乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達(dá)及意義

郭德超，安慧敏，孫廣正，張海峰，戴華衛(wèi)，夏 康

（1.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院普外科，浙江瑞安 325200；2.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院病理科，浙江瑞安 325200）

·論 著·

乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達(dá)及意義

郭德超1，安慧敏2，孫廣正1，張海峰1，戴華衛(wèi)1，夏 康2

（1.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院普外科，浙江瑞安 325200；2.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院病理科，浙江瑞安 325200）

目的探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear transcription factor kappa B，NF-κB）和半乳糖凝集素3（Galectin-3）基因在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義。方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)40例乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達(dá)情況。結(jié)果乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.0%和55.0%；NF-κB、Galectin-3與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=2.497，P＜0.05）。結(jié)論乳腺癌中NF-κB、Galectin-3基因的表達(dá)呈正相關(guān)，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

乳腺腫瘤；NF-κB；半乳糖凝集素-3

乳腺癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年來(lái)呈發(fā)病率逐年上升和年輕化的趨勢(shì)。因此，關(guān)于乳腺癌的研究越來(lái)越受到世人的矚目。大量研究認(rèn)為，核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）是一種廣泛存在于體內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，在多種腫瘤組織內(nèi)呈活化狀態(tài)，可調(diào)控多種實(shí)體瘤（肝癌、結(jié)腸癌等）的MDR1基因表達(dá)，抑制NF-κB的活性可以抑制多種腫瘤MDR1基因的轉(zhuǎn)錄活性減少P糖蛋白的表達(dá)，從而提高抗腫瘤藥物在細(xì)胞內(nèi)的濃度，增強(qiáng)化療藥物對(duì)耐藥細(xì)胞的抑制作用［1］。Galectin-3在多種腫瘤中均有表達(dá)，且濃度的高低與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。通過(guò)免疫熒光法測(cè)定正常人與腫瘤患者血清中的Galectin-3，發(fā)現(xiàn)腫瘤患者（胃腸道腫瘤、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤）明顯高于正常人群，已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者又高于局限性腫瘤患者［2-3］。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)乳腺癌組織中的NF-κB與Galectin-3的表達(dá)，并結(jié)合臨床病理學(xué)特征分析其中乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選擇2007年6月—2010年12月溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院外科手術(shù)切除的乳腺癌患者40例，均為女性，年齡35～75歲，平均52.3歲；腫瘤大小＜2.0cm 13例，≥2.0cm 27例；TNM分期，Ⅰ期7例，Ⅱ期16例，Ⅲ期5例，Ⅳ期12例；組織學(xué)分級(jí)低分化3例，中分化4例，高分化33例；腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者27例。另取10例癌旁組織（距癌灶8～10cm），病理證實(shí)為非腫瘤組織作為對(duì)照。所有病例術(shù)前均未經(jīng)任何針對(duì)腫瘤的治療。

1.2 試劑：NF-κB鼠抗人多克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。單克隆兔抗人Galectin-3抗體購(gòu)自基因科技（上海）有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色：手術(shù)切除的組織標(biāo)本常規(guī)固定后石蠟包埋切成4μm厚切片2張，依次經(jīng)脫蠟、梯度水化、3%H2O2溶液室溫下孵育5～10min、PBS振洗、微波抗原熱修復(fù)、山羊血清封閉、PBS振洗、分別滴加鼠抗人NF-κB（1∶100）和Galectin-3（1∶100）單克隆抗體、濕盒內(nèi)4℃孵育過(guò)夜。再用PBS振洗、滴加親和素過(guò)氧化物酶復(fù)合物37℃濕育30min。最后用PBS振洗、DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、封片、顯微鏡下計(jì)數(shù)。用PBS代一抗作陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷：光鏡下觀察陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量和分布，隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野，求出平均每個(gè)高倍視野網(wǎng)格內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞百分率。NF-κB陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞漿，呈現(xiàn)棕黃色顆粒，Galectin-3陽(yáng)性表達(dá)部位為細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色。根據(jù)其表達(dá)率及染色強(qiáng)度分別記為陰性（-，無(wú)明顯陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞面積＜10%，染色淺）；弱陽(yáng)性（+，陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞面積＞10%，但＜50%，染色較深）；強(qiáng)陽(yáng)性（++，陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞面積＞50%，染色深）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用列聯(lián)表資料的χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

癌組織中NF-κB與Galectin-3的表達(dá)與患者性別、年齡及孕激素受體（progesterone receptor，PR）等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，NF-κB和Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.9%和70.4%，而無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率僅為30.8%和23.1%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），在雌激素受體（estrogen receptor，ER）（+）表達(dá)組中，NF-κB和Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.0%和52.0%，而ER（-）表達(dá)組陽(yáng)性率僅為47.4%和40.0%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在Her-2（+）組中，NF-κB和Galectin-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.2%和76.2%，而Her-2（-）組陽(yáng)性率僅為33.3%和36.8%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。NF-κB在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)圖1、陰性表達(dá)見(jiàn)圖2；NF-κB在臨床分期方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），Galectin-3在乳腺癌組織中隨組織學(xué)分級(jí)的增高，蛋白表達(dá)率上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），Galectin-3在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)圖3；本研究將40例乳腺癌按組織學(xué)分級(jí)分為2組，Ⅰ+Ⅱ?yàn)镮組，Ⅲ為II組，隨著組織學(xué)分級(jí)的增加，NF-κB和Galectin-3蛋白表達(dá)均呈上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳腺癌組織中NF-κB和Galection-3的陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.0%和55.0%，NF-κB和Galectin-3的表達(dá)情況呈正相關(guān)（r=2.497，P＜0.05），見(jiàn)表2。

表1 NF-κB和Galectin-3的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系Tab le1 Relationship between the expression of NF-κB，Galectin-3 and clinical pathological paramenters

Her-2：human epidermal growth factor receptorⅡ；ER：estrogen receptor；PR：progesterone receptor

圖1 NF-κB在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)（SP×400） Figure 1 Positive expression of NF-κB in breast cancer（SP×400）

圖2 NF-κB在乳腺癌組織中的陰性表達(dá)（SP×400）Figure 2 Negative expression of NF-κB in breast cancer（SP×400）

圖3 Galectin-3在乳腺癌組織的陽(yáng)性表達(dá)（SP×400）Figure 3 Positive expression of Galectin-3 in breast cancer（SP×400）

表2 乳腺癌組織中NF-κB與Galectin-3關(guān)系的一致性檢驗(yàn)Table 2 Consistency test of relationship between NF-κB and Galetin-3 in breast cancer tissue

3 討 論

隨著分子生物學(xué)和腫瘤學(xué)的飛速發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)NF-κB信號(hào)途徑在腫瘤發(fā)生發(fā)展的各個(gè)環(huán)節(jié)中扮演重要角色，而其在腫瘤細(xì)胞凋亡中的作用尤為顯著［4-7］。

NF-κB是一種分布和作用均十分廣泛的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，屬于NF-κB/Rel蛋白家族成員，能夠與B淋巴細(xì)胞免疫蛋白κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異的結(jié)合。隨后對(duì)NF-κB進(jìn)行了廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)它能與多種細(xì)胞基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子發(fā)生特異性結(jié)合，并促進(jìn)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，參與炎癥反應(yīng)、損傷刺激、免疫防御、細(xì)胞增殖和凋亡等過(guò)程。研究［8］證實(shí)，NF-κB在腫瘤生長(zhǎng)機(jī)制過(guò)程的信息傳遞中起重要作用，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

本研究以鼠抗人單克隆抗體特異性標(biāo)記乳腺癌組織中的NF-κB蛋白的表達(dá)。NF-κB蛋白在乳腺癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，證明NF-κB中乳腺癌組織中存在過(guò)度活化的現(xiàn)象，并隨著組織學(xué)分級(jí)的提高，陽(yáng)性表達(dá)率增加，呈正相關(guān)，這提示NF-κB的高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。NF-κB蛋白在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與Hou等［9］的研究結(jié)果具有相似性。

Galectin-3是一種β-半乳糖苷結(jié)合的動(dòng)物凝集素，為脊椎動(dòng)物半乳糖凝集素家族中的一種亞型，人Galectin-3的相對(duì)分子質(zhì)量為31 000，Galectin-3對(duì)β-半乳糖有特別的親和力，可通過(guò)與特殊配體的反應(yīng)發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。半乳糖凝集素在活化的巨噬細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、上皮細(xì)胞及一些感覺(jué)神經(jīng)元中表達(dá)最多。Galectin-3主要存在于細(xì)胞漿中，也可存在于細(xì)胞核、細(xì)胞表面或者細(xì)胞外［10］。Galectin-3能參與細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與間質(zhì)之間黏附，炎癥反應(yīng)，細(xì)胞凋亡，免疫調(diào)節(jié)及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)［11］。Galectin-3在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)，明顯高于在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)，并隨著組織學(xué)及臨床分期的提高，陽(yáng)性表達(dá)率增加，呈正相關(guān)。

總之，乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達(dá)具有相關(guān)性，提示在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、腫瘤分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及評(píng)估預(yù)后中具有很大的潛在價(jià)值。

［1］ TSE AK，ZHU GY，WAN CK，et al.1，25-dihydroxyvitamin D3 inhibits transcriptional potential of nuclear factor kappa B in breast cancer cells［J］.Mol Immunol，2010，47（9）：1728-1738.

［2］ DECHAPHUNKUL A，KANNGURN S，DECHSUKHUM C，et al. The significance of galectin-3 immunohistochemistry，clinical characterstics and liver imaging in differentiating intrahepatic cholangiocarcinoma from adenocarinoma liver metastasis［J］.J Med Assoc Thai，2010，93（9）：523-528.

［3］ LEVY R，GRAFI-COHEN M，KRAILE Z，et al.Galectin-3 promotes chronic activation of K-Ras and differentiation block in malignant thyroid carcinomas［J］.Mol Cancer Ther，2010，9（6）：2208-2219.

［4］ ALWAHAIBI NY，BUDIN S B，MOHAMED J，et al.Nuclear factor-kappa B as a promising target for selenium chemoprevention in rat hepatocarcinogenesis［J］.JGastroenterol Hepatol，2010，25（4）：786-791.

［5］ NING Y，RIGGINS RB，MULLA JE，et al.IFNgamma restores breast cancer sensitivity to fulvestrant by regulating STAT1，IFN regulatory factor 1，NF-kappa B，BCL2 family members，and signaling to caspase-dependent apoptosis［J］.Mol Cancer Ther，2010，9（5）：1274-1285.

［6］ PUVVADA SD，F(xiàn)UNKHOUSERWK，GREENE K，et al.NF-κB and Bcl-3 activation are prognostic in metastatic colorectal cancer［J］.Oncology，2010，78（3/4）：181-188.

［7］ BARITAKI S，BONAVIDA B.Viral infection and cancer：the NF-kappa B/Snail/RKIP loop regulates target cell sensitivity to apoptosis by cytotoxic lymphocytes［J］.Crit Rev Immunol，2010，30（1）：31-46.

［8］ GUILLERMET-GUIBERT J，SAINT-LAURENT N，DAVENNE L，et al.Novel synergistic mechanism for sst2 somatostatin and TNFalpha receptors to induce apoptosis：crosstalk between NF-kappaB and JNK pathways［J］.Cell Death Differ，2007，14（2）：197-208.

［9］ HOU MF，LN SB，YUAN SS，et al.The clinical significance between activation of nuclear factor kappa B transcription factor and overexpression of C-erB-2 oncoprotein in taiwaneese patientswith breast cancer［J］.Clin Chim Acta，2003，3341（1/ 2）：137-144.

［10］ YOSHII T，INOHARA H，TAKENAKA Y，et al.Galectin23 maintains the transformed phenotype of thyroid pap illary carcinoma cells［J］.Int JOncol，2001，18（14）：787-792.

［11］ NANGIA MAKKER P，HONJO Y，SARVIS R，et al.Galectin23 induces endothelial cellmorphogenesis and angiogenesis［J］.Am JPathol，2000，156（17）：899-909.

（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION OF NF-κB AND Galectin-3 AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE IN BREAST CANCER

GUO Dechao1，AN Huimin2，SUN Guangzheng1，ZHANG Haifeng1，DAIHuawei1，XIA Kang2
（1.Department of General Surgery，the Third Affiliated Hospital ofWenzhou Medical College，Zhejiang Province，Ruian 325200，China；2.Department of Pathology，the Third Affiliated Hospital ofWenzhou Medical College，Zhejiang Province，Ruian 325200，China）

ObjectiveTo explore the expression of nuclear transcription factor-kappa B（NF-κB）and Galectin-3 in beast cancer and their significance.MethodsThe expression of NF-κB and Galectin-3 were determined with immunohistochemistry in 40 cases of breast cancer.ResultsThe positive expression rates of NF-κB and Galectin-3 in breast cancer tissues were 70.0%and 55.0% respectively.Overexpressions of NF-κB and Galectin-3 in breast cancer were related to lymph node metastasis（r=2.497，P＜0.05）.ConclusionThe expression of NF-κB in breast cancer tissues is correlated with Galectin-3 expression，and theymay play a very important role in the progress of breast cancer.

breast neoplasms；NF-kappaB；galectin-3

R737.9

A

1007-3205（2012）03-0275-04

2011-08-23；

2012-01-16

瑞安市科技局科研項(xiàng)目（20082104）

郭德超（1978-），男，吉林磐石人，溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事胃腸道及乳腺腫瘤診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.03.009