注射用脂溶性維生素（I）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究

潘衛(wèi)松，肖 瑛，周永標(biāo)，張?jiān)G敏

（1.廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510610；2.暨南大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州 510632；3.暨南大學(xué) 中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及創(chuàng)新藥物研究廣東省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510632）

注射用脂溶性維生素（I）是由維生素A棕櫚酸酯、維生素D2、E、K1等多種維生素成分制成的無(wú)菌凍干粉針，臨床上用于各種內(nèi)、外科手術(shù)、嚴(yán)重傳染性疾病、昏迷等癥的腸外維生素補(bǔ)充劑，是各種外科手術(shù)后必用的藥物。我所承擔(dān)了其國(guó)家評(píng)價(jià)性抽檢的任務(wù)。其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)共有3個(gè)，分別為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH09722008，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH05222009，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH38402005，其中，前兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)都是使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法對(duì)熱原進(jìn)行控制，限度均為10EU／瓶，最后一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)則采用了家兔熱原檢查法對(duì)熱原進(jìn)行控制。我們按2010年版《中國(guó)藥典》（二部）“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”對(duì)實(shí)施國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH38402005的本品種進(jìn)行了干擾試驗(yàn)，以考察對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的可行性，并提出將其限度提高到5EU／瓶。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

SUB14恒溫水浴（英國(guó)GRANT公司）；MSI旋渦混合器（廣州IKA公司）。

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格：每支160EU，批號(hào)：150601－201174；）及細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水，規(guī)格：每支50mL，批號(hào)：1105060）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；鱟試劑（TAL）A（湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格：每支0.1mL，批號(hào)：1105101，靈敏度：0.25EU·mL－1）；TAL B（廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司，規(guī)格：每支0.1mL，批號(hào)：110603，靈敏度：0.25EU·mL－1；TAL C（湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格：每支0.1mL，批號(hào)：1103242，靈敏度：0.06EU·mL－1）；TAL D（廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司，規(guī)格：每支0.1mL，批號(hào)：100915，靈敏度：0.06EU·mL－1；注射用脂溶性維生素（I）（規(guī)格：復(fù)方制劑，批號(hào)：110102（II）206，110201（II）57，101201（II）52，10100704，10050694，101202（II）174，110101（II）41，10100787，110201（II）150，10100731，10030389，110401（II）83，110202（II）33，110203（II）89，110201（II）73）。

2 方法與結(jié)果

2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定

根據(jù)藥品使用說(shuō)明書和規(guī)格，注射用脂溶性維生素（I）細(xì)菌內(nèi)毒素限值擬定為5EU／瓶。

2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)

按照2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定，進(jìn)行鱟試劑的標(biāo)示靈敏度（λ）復(fù)核。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，2批鱟試劑經(jīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品檢查，λc均在0.5λ～2.0λ之間，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.3 預(yù)干擾試驗(yàn)

注射用脂溶性維生素（I）有效稀釋濃度（MVC）的計(jì)算：根據(jù)公式MVC＝λ／L，其中L為注射用脂溶性維生素（I）的細(xì)菌內(nèi)毒素限值5EU／瓶，每瓶先加入2mL BET檢查用水，溶解充分后，其限度可認(rèn)為2.5EU／mL，λ為鱟試劑標(biāo)示靈敏度，目前市售鱟試劑靈敏度λ通常在0.25～0.03EU／mL，則注射用脂溶性維生素（I）的對(duì)應(yīng)有效稀釋倍數(shù)為：

C0.25＝2.5／0.25＝10倍；C0.125＝2.5／0.125＝20倍；C0.06＝2.5／0.06＝40倍；C0.03＝2.5／0.03＝80倍

預(yù)干擾試驗(yàn)：

將上述系列濃度溶液記為NPC。同時(shí)在上述NPC液中加入細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，使每一濃度的試驗(yàn)液中均含有2λ濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素，記此系列溶液為PPC。取兩個(gè)不同廠家的鱟試劑，分別與上述PPC和NPC進(jìn)行反應(yīng)，每一濃度重復(fù)兩管，并設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

由預(yù)干擾試驗(yàn)結(jié)果可以初步了解：兩個(gè)廠家的鱟試劑對(duì)注射用脂溶性維生素（I）的細(xì)菌內(nèi)毒素的試驗(yàn)結(jié)果在進(jìn)行40倍稀釋后均無(wú)干擾。

2.4 正式干擾試驗(yàn)

為了最終確認(rèn)注射用脂溶性維生素（I）是否存在干擾因素的影響，筆者進(jìn)行了正式干擾試驗(yàn)。

正式干擾試驗(yàn)：

取脂溶性維生素（I），先每瓶用2mlBET水溶解，再以BET水溶解，使其最終干擾試驗(yàn)稀釋倍數(shù)為40倍，按2010年版《中國(guó)藥典》二部附錄中的“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品干擾試驗(yàn)項(xiàng)”進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，注射用脂溶性維生素（I）在進(jìn)行40倍稀釋后Es／Et均在0.5～2.0范圍之內(nèi)，確認(rèn)在40倍及以上稀釋倍數(shù)時(shí)無(wú)干擾影響。

2.5 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

按2010年版《中國(guó)藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，使用2批不同廠家的鱟試劑分別對(duì)樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并同時(shí)設(shè)立樣品的自身陽(yáng)性對(duì)照品，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

由干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可以初步發(fā)現(xiàn)注射用脂溶性維生素（I）在40倍以上稀釋倍數(shù)對(duì)兩個(gè)廠家生產(chǎn)的鱟試劑均無(wú)干擾作用。正式干擾試驗(yàn)樣品進(jìn)行40倍稀釋且用兩個(gè)廠家的鱟試劑結(jié)果Es／Et均在0.5～2.0范圍之內(nèi)，確認(rèn)在40倍以上稀釋倍數(shù)時(shí)無(wú)干擾影響。

限值定為5EU／瓶。注射用脂溶性維生素（I）可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，鱟試劑靈敏度應(yīng)使用0.06EU／mL。

表2 樣品（40倍稀釋）干擾試驗(yàn)結(jié)果

表3 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

續(xù)表3

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）［S］.2010.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄99.

［2］潘衛(wèi)松，肖瑛.透明質(zhì)酸鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，20（6）：45－7.

［3］潘衛(wèi)松，肖瑛，潘建明.熒光素鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究［J］.中國(guó)藥房，2009，20（13）：1010－12.

［4］江紅，潘衛(wèi)松，肖 瑛.對(duì)口岸藥品檢驗(yàn)所進(jìn)口藥品留樣時(shí)間的思考［J］.中國(guó)藥事，2011，25（6）：582－3.