HPLC法測定氫化可的松洗劑的含量

趙玉平 楊夏 高峰麗

氫化可的松洗劑是由氫化可的松、甘油、乙醇及蒸餾水配制而成。在臨床上多做為醫院自制制劑，臨床應用廣泛［1］，用于抗菌止癢，多用于過敏性皮炎、脂溢性皮炎、瘙癢癥。醫院擬標準多采用紫外分光光度法測定氫化可的松洗劑中氫化可的松的含量，該方法準確度低。查閱相關文獻，對氫化可的松洗劑含量測定的研究很少，本實驗為了控制氫化可的松洗劑的質量，采用高效液相方法對其進行研究［2］。

1 儀器與試藥

Vertex STIP5000高效液相色譜儀，535型紫外檢測器(美國生物公司);氫化可的松洗劑(醫院自制);氫化可的松對照品(實驗室提取制得，純度99.9%);乙腈為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Kromstar C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:乙腈-水(28∶72);檢測波長:245nm;流速:1.0 ml.min;柱溫:室溫。進樣量:10 μl。

2.2 溶液的制備 ①對照品溶液制備:精密稱取氫化可的松對照品10.0 mg置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成氫化可的松對照品溶液。氫化可的松含量為0.20 mg/ml。②供試品溶液制備:精密量取本品1.0 ml至50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得氫化可的松供試品溶液。③陰性樣品溶液的制備:按處方量取除氫化可的松外的氫化可的松洗劑各原輔料，依法制成不含氫化可的松陰性供試品，按“②”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.3 系統適用性試驗 分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，氫化可的松的理論塔板數不低于3000，分離度大于1.5，拖尾因子等符合要求。陰性樣品對氫化可的松含量測定無干擾。色譜圖見圖1。

2.4 線性關系考察 分別精密量取氫化可的松對照品溶液(0.2 mg/ml)2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成系列標準品溶液，按“2.1”項下色譜條件各進樣10 μL，記錄色譜圖，測定各濃度氫化可的松的峰面積，以各對照品溶液的峰面積Y對濃度X作線性回歸，得回歸方程為Y=1.97965×105X+101534，r=0.9996。結果表明，氫化可的松在0.04～0.2 mg/ml的范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 取“①”項下制備的對照品溶液，連續進樣6次，測定峰面積，RSD=0.82%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗 取批號為20120224的供試品溶液6份，照樣品測定法項下方法測定，RSD=1.45%(n=6)，方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗 取批號為20120224的樣品溶液，分別于0，1，2，4，8，24 h 進樣測定，RSD 為 1.61%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗 取同一批號(20120309)已知含量的氫化可得松樣品適量，按“②”項下方法制備供試品溶液，分別加入對照品溶液5、10、15 ml，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算平均回收率100.13%(n=9)。

2.9 樣品的含量測定 精密量取按“②”項下方法制備的對照品溶液和按“②”項下方法制備的供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進樣測定，進樣量為10 μl。以外標法計算樣品中氫化可的松的含量。見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 氫化可的松洗劑測定結果(標示量%，n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 精密稱定氫化可的松對照品10 mg，至50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法進行掃描，結果在245 nm的波長處有較大吸收，故選取245 nm為檢測波長。

3.2 流動相的選擇 通過查閱文獻資料，對氫化可的松洗劑的研究很少，《中國藥典》2010版曾用乙腈-水對氫化可的松注射劑進行測定，選乙腈-水不同比例的流動相進行試驗，結果選用乙腈-水(28∶72)，峰形好，保留時間適中。本法操作簡單、準確、重現性好，與紫外分光光度法比較，方法專屬性更強，適用于該產品的質量控制。

［1］ 邵建斌.氫化可的松洗劑及霜劑的含量測定.秦州職業技術學院學報，2010，10(3):36-37.

［2］ 國家藥典委員會.中國藥典.二部.中國醫藥科技出版社，2010:550.

［3］ 陳笑天，劉慧瑩，劉小英，等.HPLC法測定尿素氫化可的松乳膏中氫化可的松的含量.江西中醫學院學報，2011，23(5):69-70.