薄層色譜掃描法測定板連沖劑中靛玉紅與靛藍的含量

史長生 許 立*

（1 武警河北總隊醫院醫務處，河北 石家莊 050081；2 武警河北總隊醫院藥劑科，河北 石家莊 050081）

板藍根、連翹為臨床常用中藥，均具有清熱解毒之功效，臨產上常用于治療病毒引起的流感、上感、風熱等癥。入秋以來，甲型H1N1流感疫情明顯增多，市場上的抗病毒中藥日趨緊張，為加強部隊應對甲型H1N1流感及季節性流感的衛勤保障能力，我院組織有關專家及技術人員研發了板連沖劑復方中藥制劑保障部隊使用。板藍根的有效成分：靛藍、靛玉紅、喹唑酮酸、棕櫚酸、苯甲酸、水楊酸、22氨基苯甲酸、丁香酸、脯氨酸、精氨酸、腺苷、尿苷、尿嘌呤、鳥嘌呤和次黃嘌呤[1-3]?！吨袊幍洹分胁⑽疵鞔_對板藍根質量控制中的含量測定方法和指標，而本試驗采用了TLC法對復方板藍根顆粒進行定性鑒別，以便更好地控制藥品的內在質量，保證臨床用藥的有效性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品、試劑與儀器：靛玉紅標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號110717200204）；靛藍標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號110716200610）；板連沖劑（武警河北總隊醫院制劑室研發，規格10g/袋）；硅膠HPTLC板（青島海洋化工有限公司）；石油醚、乙酸乙酯、氯仿均為色譜純。CS-930型薄層掃描儀（日本島津）；DHG-9243BS型電熱恒溫鼓風干燥箱；AR64CN型電子天平（奧豪斯儀器(上海)有限公司）；微量進樣器（山東滕海分析儀器有限公司）。

1.1.2 色譜條件：薄層層析板：硅膠HPTLC板；展開劑：石油醚-乙酸乙酯-氯仿（1∶1∶8）。

1.2 方法

1.2.1 硅膠HPTLC板于105℃活化1h，冷卻后置干燥器中備用。

1.2.2 標準溶液的制備

靛玉紅標準溶液的制備：精密稱取靛玉紅標準品10mg，置于100mL容量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，搖勻。配成每毫升含0.1mg靛玉紅的標準溶液。避光保存。

靛藍標準溶液的制備：精密稱取靛藍標準品50mg，置于250mL容量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，搖勻。配成每毫升含0.2mg靛藍的標準溶液。避光保存。

1.2.3 供試品溶液的制備

將板連沖劑研磨，過篩，烘干。精密稱取5g，用氯仿100mL索式回流提取，過濾，濾液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至10mL。

1.2.4 標準曲線的繪制

精密吸取上述靛玉紅、靛藍對照品溶液1μL、2μL、3μL、4μL、5μL，分別點于同一硅膠HPTLC板上，依法展開[4]，并進行全程掃描測定各斑點的面積。以斑點面積積分值為縱坐標Y，以點樣量為橫坐標X，繪制標準曲線。

1.2.5 穩定性實驗

精密吸取對照品溶液5μL點于硅膠HPTLC板上，依上述條件層析展開，顯色，每間隔0.5h測定一次峰面積積分值，計算RSD。

1.2.6 精密性實驗

精密吸取對照品溶液3μL在同一塊薄層板上點樣6次，依法展開，計算各斑點的峰面積積分值RSD。

1.2.7 樣品含量測定

分別精密吸取不同供試品溶液2μL，對照品溶液1μL和3μL，交叉點于同一硅膠HPTLC板上，按上述條件展開，顯色，掃描測定各樣品中靛玉紅、靛藍的含量，以外標二點法計算含量。

1.2.8 加樣回收實驗

取5份已知含量（0.496mg/g）的供試品粉末2g，精密加入靛玉紅及靛藍對照品，按供試品溶液制備，測定回收率。

1.2.9 統計學處理

2 結 果

2.1 標準曲線

2.1.1 以靛玉紅對照品濃度c對峰面積A進行線性回歸分析，得一不過原點的線，因此使用外標兩點法進行含量測定。靛玉紅在點樣量0.1～0.5μg范圍內呈良好的線性關系，得回歸方程為：Y=9991X+1017.9，r =0.9999，見圖1。

圖1 靛玉紅對照品標準曲線圖

2.1.2 同2.1.1方法得靛藍標準曲線，回歸方程為：Y=19955X+2080.5，r =0.9998，見圖2。

2.2 穩定性及精密性實驗

穩定性實驗結果的RSD為1.18%（n=5），精密性實驗結果的RSD為2.18%。

圖2 靛藍對照品標準曲線圖

加樣回收率試驗結果測定板連沖劑中靛玉紅與靛藍含量的RSD分別為2.74%、3.54%和4.53%、2.96%，見表1。

表1 回收率測定結果表

2.3 板連沖劑中靛玉紅與靛藍的含量，見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討 論

近些年來季節性流感的感染情況愈發嚴重，年初以來據衛生部公布的數據已經有10萬多人次感染甲型H1N1流感，死亡300多例。隨著國內外對板藍根抗病毒作用的進一步研究，傳統中藥板藍根在預防與治療病毒性流感方面的作用更加顯著，從而導致了這一類藥物在市場上的緊俏[5-6]。目前關于板藍根的質量控制標準尚無確切定論，本實驗參考了近些年來的研究，通過檢測板連沖劑中的靛玉紅以及靛藍的含量來對制劑進行治療控制，通過查閱相關文獻資料本實驗結果顯示板連沖劑中的板藍根有效成分含量較高[6,7]，因此下一步將按照申請新藥的標準繼續完善制劑的質量，以期盡早形成量產。

[1]王瑞,楊海英,楊琪偉,等.板藍根的質量標準研究[J].中草藥,2010,3(3):478-480.

[2]崔卓,王穎,康廷國.板藍根有效成分質量研究[J].遼寧中醫雜志,2004,8(8):692-693.

[3]馬方,陳秀英.薄層層析法檢測板藍根所含靛玉紅、靛藍的方法研究[J].河南中醫學院學報,2008,23(135):39-41.

[4]國家藥典委員會.中國藥典·一部[M].北京:化學工業出版社,2005:附錄Ⅵ B.

[5]陳慶.板藍根藥理作用與臨床應用[J].中國藥事,2009,23(6):607-608.

[6]丁越,張彤,陶建生.板藍根藥材中有效成分的含量測定研究[J].中成藥,2008,30(11):1697-1701.

[7]馬莉,孫琴,李友,等.HPLC法測定板藍根藥材及制劑中靛藍和靛玉紅含量[J].藥物分析雜志,2010,30(9):1642-1645.