非酒精性脂肪肝患者血清膽固醇調節元件結合蛋白-1、脂聯素變化及其意義①

殷漢華 李捷壯 古旭東

(河源市人民醫院 廣東河源 517000)

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指對肝脂類輸入或合成和其輸出或氧化之間平衡具有調控作用的局部或系統性因素的改變,導致甘油三酯在肝內堆積超過肝臟濕重5%,使肝臟對此后的損害變得易感,最終導致肝細胞炎癥和纖維化的一種疾病,并除外酒精、病毒、代謝障礙等因素[1]。該病確切機制目前尚未闡明,醫學界比較公認是所謂“二次打擊學說”,如果說胰島素所致甘油三酯堆積是對肝臟的第一次打擊,而在肝臟脂肪沉積基礎上所發生的氧應激和脂質過氧化則形成二次打擊[2]。顯然,脂質代謝障礙在NAFLD的發生、發展中占據重要地位[3],因此筆者通過檢測血清膽固醇調節元件結合蛋白-1(Sterol regulatory element-binding protein-1,SREBP-1)、脂聯素變化,探討其在NAFLD發病中的地位和意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料

30例來自于2008年10月至2010年10月河源市人民醫院門診及住院患者,其中男性28例,女性12例,平均年齡(46.31±11.29)歲,平均病程(3.19±1.24)年;選擇30名健康入學體檢大學生為正常對照組。

1.2 診斷標準

參照中華醫學會肝臟病分會制定《非酒精性脂肪肝診療指南》明確NAFLD診斷需符合以下3項條件[4]:

(1)無飲酒史或飲酒折合乙醇量＜140g/周(女性<70g/周);

(2)除外病毒性肝炎、藥物性肝病、全胃腸外營養、肝豆狀核變性、自身免疫性肝病等可導致脂肪肝的特定疾病;

(3)肝臟影像學(CT)表現符合彌漫性脂肪肝的診斷標準且無其他原因可供。即肝臟密度普遍降低,肝/脾CT值之比＜1.0。其中,肝/脾CT比值＜1.0但＞0.7者為輕度,≤0.7但＞0.5者為中度,≤0.5者為重度脂肪肝。

2 研究方法

2.1 觀察指標

2.1.1 基線資料 性別,年齡,病程等。

2.1.2 SREBP-1、脂聯素 觀察SREBP-1、脂聯素變化。

2.2 指標檢測

2.2.1 NAFLD患者SREBP-1、脂聯素變化 應用ELISA技術檢測治療前、后SREBP-1、脂聯素(購自武漢博士德生物試劑有限公司貨號)變化,實驗步驟嚴格按照試劑盒操作說明。

2.2.2 NAFLD患者SREBP-1、脂聯素mRNA表達 應用實時熒光定量PCR法(Real-time PCR),以GAPDH為內參,檢測SREBP-1、脂聯素mRNA表達。(具體步驟:組織總RNA提取-Primer5.0軟件設計引物-逆轉錄cDNA-Real time PCR反應體系擴增-目的基因相對mRNA表達水平的計算分析)。SREBP-1、脂聯素引物序列,見表1。

表1 人SREBP-1、脂聯素及GAPDH引物序列

表2 SREBP-1、脂聯素含量變化[μg/mL,(±s)]

表2 SREBP-1、脂聯素含量變化[μg/mL,(±s)]

注:與正常組比較,*P<0.05,#P<0.05

組別 例數 SREBP-1 脂聯素NAFLD組 30 76.31±21.98 3.27±1.46正常組 30 (21.49±9.43)* (18.16±12.42)#

表3 SREBP-1、脂聯素mRNA表達變化(±s)

表3 SREBP-1、脂聯素mRNA表達變化(±s)

注:與正常組比較,*P<0.05,#P<0.05

組別 例數 SREBP-1 脂聯素NAFLD組 30 3.41±1.17 0.84±0.25正常組 30 (1.26±0.49)* (2.21±0.37)#

2.3 統計學分析

3 研究結果

3.1 NAFLD患者SREBP-1、脂聯素含量結果

與正常組相比,NAFLD患者SREBP-1含量增加,脂聯素含量減少,有統計學意義(P<0.05),見表2。

3.2 NAFLD患者SREBP-1、脂聯素mRNA結果

NAFLD患者SREBP-1 mRNA表達呈上升趨勢,脂聯素表達呈下降趨勢,與正常組相比,有統計學意義(P<0.05),見表3。

4 討論

隨著社會老齡化以及病毒性肝炎等其他肝病的有效控制,NAFLD已成為越來越嚴重的健康問題。盡管NAFLD機制不明,但是甘油三酯在肝內堆積占肝臟濕重的5%是NAFLD定義的重要標準。因此,如何調控甘油三酯體內代謝,減少甘油三酯在肝內堆積是防治NAFLD思路之一。本研究結果揭示NAFLD患者促進脂肪氧化分解脂聯素含量減少,mRNA表達呈下降趨勢;而促進甘油三酯合成、積聚的SREBP-1含量增多,mRNA表達呈上升趨勢。

脂聯素是由脂肪細胞分泌的脂肪因子之一,是體內目前被證實的唯一做作為一種保護性細胞因子,其分泌無晝夜節律,正常情況下血漿含量為(5～30)μg/mL,約占總血漿蛋白量的0.01%,在血液存在3種形式,即三聚體、六聚體和高分子量形式,其中高分子量的形式在體內起主要的活性作用,具有抑制肝臟脂肪合成,促進脂肪氧分解,增強周圍組織對胰島素的敏感性,抑制炎癥因子產生,對抗氧化應激和纖維化等生物學效應。研究發現,體內注入重組或內源性的全長脂聯素,可迅速地降低血糖水平,能加速攝入高脂飲食后血漿脂質的清除;長期給予脂聯素能夠通過減少肝糖輸出,增加肌肉組織脂肪酸消耗,而改善胰島素抵抗動物的胰島素敏感性和血糖水平。

SREBPs是控制膽固醇、脂肪酸、甘油三脂、磷酸生物合成最為重要的轉錄因子超家族,其中SREBP-1可能通過調控脂肪酸合成酶及乙酰輔酶A羧基化,從而參與甘油三酯合成、積聚,同時在肝臟組織中表達的主要是SREBP-1,因此SREBP-1與肝脂質代謝密切相關。本研究提示,NAFLD患者SREBP-1含量及其mRNA呈高表達變化,與正常組比較,有統計學差異。這意味著阻斷SREBP-1表達可能對于NAFLD防治是有益的。

[1]Day CP.Non-alcoholic fatty liver disease:a massive problem[J].Clin Med,2011,11(2):176～178.

[2]Pascale A,Pais R,Ratziu V.An overview of nonalcoholic steatohepatitis:past,present and future directions[J].J Gastrointestin Liver Dis,2010,19(4):415～423.

[3]Erridge C.Diet,commensals and the intestine as sources of pathogen-associated molecular patterns in atherosclerosis,type 2 diabetes and non-alcoholic fatty liver disease[J].Atherosclerosis,2011,26.

[4]中華醫學會肝病學分會脂肪肝和酒精性肝病學組.非酒精性脂肪性肝病診療指南.肝臟,2006,11(1):57～65.