ACL TOP血凝儀兩種方法相結(jié)合檢測(cè)纖維蛋白原的分析

彭賽亮，梁小亮，尹向飛

(廈門市第二醫(yī)院，福建 廈門 361021)

纖維蛋白原既是一種重要的凝血因子，參與機(jī)體正常凝血反應(yīng)，也是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，與心腦血管疾病、惡性腫瘤及腎臟疾病等關(guān)系密切，近年來(lái)對(duì)Fib的檢測(cè)越來(lái)越受到重視。Fib 檢測(cè)方法有很多種[1,4]，由于Fib的基因多態(tài)性使其具有高度異質(zhì)性[2]，影響檢測(cè)的因素很多，所以各種檢測(cè)方法所得結(jié)果差異較大。目前常規(guī)檢測(cè)較多運(yùn)用的是PT-der 法和Clauss 法，為探討ACL TOP 血凝儀上這兩種方法測(cè)定Fib 結(jié)果的差異，筆者對(duì)部分標(biāo)本同時(shí)用兩法進(jìn)行了檢測(cè)分析。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 ACL TOP全自動(dòng)血凝儀及配套進(jìn)口試劑：Fib-C(LOT：N0185581)，PT Recombiplastin(LOT：N0215219，ISI：0.82)，正常值質(zhì)控血漿(LOT：N0386069)，低值質(zhì)控血漿(LOT：N0185576)。

1.2 兩種質(zhì)控血漿分別用PT-der 法和Clauss 法檢測(cè)其Fib含量，每法重復(fù)檢測(cè)10次，分別計(jì)算其均值、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)。

1.3 實(shí)驗(yàn)對(duì)象和方法 我院集美院區(qū)住院及門診患者，每天隨機(jī)選取10名患者，性別年齡不限，采集靜脈血2.7ml(內(nèi)含109mmol/L 枸櫞酸鈉0.3ml)，3000rpm 離心15min，取乏血小板血漿，分別用PTder 法和Clauss 法檢測(cè)血漿中的Fib，在2h 內(nèi)完成檢測(cè)，連續(xù)檢測(cè)9d。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)質(zhì)控血漿Fib的比較

表1 結(jié)果表明，兩種方法的精密度(CV<10%)和準(zhǔn)確度都很好，PT-der 法檢測(cè)結(jié)果明顯高于Clauss法(P<0.01)。

2.2 兩種方法檢測(cè)常規(guī)標(biāo)本Fib的比較

表2 結(jié)果表明，兩種方法檢測(cè)Fib 相關(guān)性很好(r=0.92-0.98),PT-der 法所測(cè)Fib值明顯高于Clauss法(P<0.01)。將PT-der 法所測(cè)Fib值按回歸方程轉(zhuǎn)換后兩法的Fib值見(jiàn)表3，經(jīng)轉(zhuǎn)換后兩種方法的Fib值無(wú)顯著性差異(P>0.05)。兩種方法所測(cè)Fib值分布見(jiàn)表4，提示經(jīng)轉(zhuǎn)換后，兩種方法檢測(cè)的Fib值分布很接近。

表1 兩種方法檢測(cè)兩種質(zhì)控血漿的Fib 結(jié)果

表2 兩種方法檢測(cè)90份常規(guī)標(biāo)本Fib的結(jié)果()

3 討論

Fib 是一種相對(duì)分子量為340KD的糖蛋白，由Aα、Bβ、γ 三條肽鏈的對(duì)稱二聚體(Aα、Bβ、γ)所構(gòu)成，三條多肽鏈通過(guò)29個(gè)二硫鍵相連接。根據(jù)纖維蛋白原分子中Aα 鏈的異質(zhì)性,Fib 分為高相對(duì)分子量(HMr)、低相對(duì)分子量(LMr)和LMr′三種,在正常血漿中分別占總Fib的70%、26%和4%，HMr比LMr和LMr′更易凝集[4]。

表3 PT-der 法轉(zhuǎn)換后Fib值與Clauss 法的比較()

表4 兩種方法檢測(cè)90例患者Fib值的分布

檢測(cè)Fib的方法有物理化學(xué)方法、功能性方法和免疫學(xué)方法等幾類，其中，Clauss 法是WHO 推薦的參考方法[10]。ACL TOP全自動(dòng)血凝儀的準(zhǔn)確度、精密度及抗干擾能力均很好[3]，可以通過(guò)PTder 法和Clauss 法檢測(cè)血漿中的Fib，均有配套試劑，且Clauss 法已溯源到Fib 標(biāo)準(zhǔn)品(98/612)。PTder 法的原理是在檢測(cè)PT 時(shí)Fib 完全轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，其濁度變化與Fib含量呈正比；Clauss 法的原理是在標(biāo)本中加入過(guò)量凝血酶，使Fib 轉(zhuǎn)變成纖維蛋白而凝固，F(xiàn)ib的含量與出現(xiàn)凝固的時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，能直接反應(yīng)Fib的凝血功能。

本研究以質(zhì)控血漿和臨床標(biāo)本為對(duì)象分別用PT-der 法和Clauss 法檢測(cè)Fib值，發(fā)現(xiàn)兩種方法檢測(cè)質(zhì)控血漿Fib 精密度(CV<10%)和準(zhǔn)確度都很好，但PT-der 法檢測(cè)結(jié)果明顯高于Clauss 法(P<0.01)；分別用兩種方法檢測(cè)90例臨床標(biāo)本的Fib，結(jié)果表明，兩種方法檢測(cè)Fib 相關(guān)性很好(r=0.92-0.98)，但PT-der 法檢測(cè)Fib 高、中、低值均明顯高于Clauss 法(P<0.01)，這與曾文坦等[7，8]報(bào)道相似。有文獻(xiàn)報(bào)道，當(dāng)Fib 在正常值范圍兩種方法檢測(cè)無(wú)差異，但當(dāng)Fib 過(guò)高或過(guò)低時(shí)或PT 異常時(shí)兩者所測(cè)值有差異[4-6]，黃作群等[9]報(bào)道PT-der 法檢測(cè)Fib低于Clauss 法,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果有差異,這可能是因?yàn)槔w維蛋白原的多樣性所致，與血漿中所含其它成分如肝素、FDP、纖溶酶激活等也有關(guān)系，并與所用儀器及試劑不同也有很大關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)中Clauss法所測(cè)Fib 結(jié)果約是PT-der 法的70%-75%，這與HMr 占血漿總Fib含量相當(dāng)，是否PT-der 法檢測(cè)的是血漿總Fib含量，而Clauss 法所檢測(cè)的就是活性較強(qiáng)的HMr 部分？ 將PT-der 法所測(cè)Fib值進(jìn)行回歸轉(zhuǎn)換，與Clauss 法相比較無(wú)差異(P>0.05)。參照文獻(xiàn)[3]所定參考范圍，轉(zhuǎn)換前，PT-der 法所測(cè)Fib值在低值、正常值和高值分布與Clauss 法差異很大，轉(zhuǎn)換后PT-der 法與Clauss 法非常接近。

在日常臨床檢驗(yàn)工作中，標(biāo)本的Fib 先用PTder 法檢測(cè)，當(dāng)PT 結(jié)果正常且Fib 處于2.63～6.50g/L 之間時(shí)，F(xiàn)ib 結(jié)果利用回歸方程進(jìn)行轉(zhuǎn)換后即可報(bào)告；凡是PT>13s、Fib值低于2.63 g/L 或 高于6.50 g/L(PT-der 法)的標(biāo)本用Clauss 法重新檢測(cè)(可在ACL TOP 設(shè)置自動(dòng)運(yùn)行)，這樣就能有效地避免因?yàn)榉椒ㄔ蚨鴮?dǎo)致的Fib 異常標(biāo)本的漏檢及正常標(biāo)本的誤報(bào)。既能滿足臨床需要，同時(shí)又能節(jié)省檢測(cè)成本和時(shí)間。同時(shí)堅(jiān)持做好室內(nèi)質(zhì)控，定期檢測(cè)正常值質(zhì)控血漿；試劑更換批號(hào)需重新定標(biāo)并校正回歸方程；每天隨機(jī)取5～10份臨床標(biāo)本用Clauss 法同時(shí)檢測(cè)Fib值，并結(jié)合儀器自動(dòng)同時(shí)用兩法檢測(cè)的Fib 結(jié)果，每周統(tǒng)計(jì)分析其相關(guān)性。對(duì)于某些特殊疾病如血栓性疾病、腎病綜合征、腦梗死、心肌梗死、某些血液病及纖溶活性增高的疾病和服用某些藥物如溶栓藥物等需監(jiān)測(cè)Fib 時(shí)標(biāo)本必需同時(shí)用Clauss 法測(cè)定其Fib含量，以免由于方法差異而誤診。

綜上所述，在ACL TOP全自動(dòng)血凝儀上用Clauss 法和PT-der 法檢測(cè)Fib 結(jié)果精確度和準(zhǔn)確度均較好，PT-der 法結(jié)果比Clauss 法偏高，兩者相關(guān)性良好。將PT-der 法和Clauss 法相結(jié)合能達(dá)到有效而經(jīng)濟(jì)地檢測(cè)標(biāo)本Fib的效果。

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