烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠損傷心肌和血液粘度的作用研究*

戴啟剛，汪受傳

(南京中醫藥大學第一臨床醫學院，江蘇南京 210046)

《金匱要略·胸痹心痛短氣病》篇云:“心痛徹背，背痛徹心，烏頭赤石脂丸主之。”烏頭赤石脂丸方由蜀椒、制川烏、制附子、干姜、赤石脂按2∶1∶1∶1∶2組成，因方中烏頭、附子、蜀椒、干姜均為辛溫大熱，故主治陽氣不足，陰寒痼結心下之胸痹［1－3］。前期實驗研究表明，其能減輕異丙腎上腺素所致的大鼠心肌的損傷程度，對缺血心肌有保護作用，其模型類似于現代醫學之冠心病、心絞痛，與寒凝胸痹證型的吻合度不高［4］。本實驗擬以冰水游泳加注射垂體后葉素復制大鼠陽虛寒凝胸痹模型，在模證相合的前提下，通過描記心電圖，檢測血清CK、LDH、全血及血漿粘滯度，觀察心肌組織病理學變化，探討烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠的作用及可能機制。

1 材料與儀器

1.1 動物、藥品、試劑

SD大鼠，雌雄各半，體重 (200±20)g，由南京中醫藥大學動物中心提供，動物許可證號:SCXK(滬)2007－0005;烏頭赤石脂丸 (具體制備方法同前期研究，見文獻［4］)，購于南京中醫藥大學門診部，符合《中國藥典》 (2010版)一部規定;復方丹參滴丸，天津天士力制藥股份有限公司，批號:20061208;垂體后葉素，上海第一生化藥業有限公司，批號:040301;血清CK、LDH試劑盒，南京建成生物有限公司，批號:20090826、20091127。

1.2 儀器

BL－420E+生物機能實驗系統，成都泰盟科技有限公司;TP1020自動脫水機、RM2135型切片機、DMLS2光學顯微鏡，德國LEICA公司產品;Tissue－Tek TEL組織包埋中心，日本SAKURA公司產品;CS－VI型攤片烤片機，湖北孝感宏業醫用儀器有限公司;SA－6000自動血流變測試儀，北京賽科希德科技發展有限公司;752型分光光度計，上海分析儀器廠。

2 方法

2.1 動物分組

72只SD大鼠，隨機分為6組:正常對照組，模型組，復方丹參滴丸組 (給藥量相當于人體等效劑量72.9mg/kg)，烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組 (給藥量分別相當于人體等效劑量的1/3即0.63 g/kg、1倍即 1.89g/kg、3倍即 5.67g/kg)。每組12只。

2.2 動物模型的制備、描記心電圖

［5－6］并結合預實驗結果建立如下模型:正常對照組、模型組大鼠灌胃生理鹽水2mL，其余各組灌胃相應藥物2mL，每日1次，連續2周。除正常對照組外，其余各組大鼠每日灌胃30 min后，于0℃冰水中游泳5 min。于末次游泳結束后，大鼠以戊巴比妥鈉按35 mg/kg劑量腹腔注射麻醉，大鼠背位固定在鼠臺上，并與生物信號采集系統相接，描記Ⅱ導聯心電圖;除正常對照組外，其余各組動物腹腔注射垂體后葉素 (20 U/kg)造模，描記30 min內Ⅱ導聯心電圖變化，如見ST段上抬、J點抬高則表示造模成功。

2.3 采血、取心室

各組大鼠于注射垂體后葉素24h后，用戊巴比妥鈉麻醉，頸總動脈采血 (所采血分3份，2份抗凝、1份不抗凝)，并迅速取下心臟，剪去心房及結締組織，保留心室，作病理學檢查。

2.4 血清CK、LDH及血液粘稠度的測定

將不抗凝血室溫下靜置2h待其凝固后以3000 r·min－1速度離心10min，取血清，化學比色法測定血清CK、LDH含量;一份抗凝血以同樣方法離心，取血漿與另一份抗凝血全血一同留置檢測粘稠度。

2.5 組織形態學觀察

將大鼠左心室置于10%福爾馬林液中固定，乙醇脫水，石蠟包埋，5μm厚組織切片，蘇木素－伊紅 (HE)染色，光鏡下觀察心肌細胞損傷程度。

2.6 統計學處理

3 結果

3.1 動物標本的脫落

本實驗共分6組，每組12只SD大鼠。在造模過程中除正常對照組外，其余各組均有大鼠死亡，死亡數目及死亡率分別為:模型組死亡5只 (死亡率41.7%);烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組分別為 4只 (死亡率 33.3%)、3只 (死亡率25.0%)、2只 (死亡率16.7%);復方丹參滴丸組為3只 (死亡率25.0%)。其中模型組死亡率最高，烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組死亡率漸次下降，藥物干預組大鼠的死亡率低于模型組。

3.2 烏頭赤石脂丸對大鼠心電圖Ⅱ導聯J點改變的影響

各組心電圖Ⅱ導聯J點位移如表1所示。模型組J點抬高值最高，與對照組相比，P＜0.01，表明造模成功;烏頭赤石脂丸中、高劑量組及復方丹參滴丸組與模型組相比，P＜0.01，表明烏頭赤石脂丸中、高劑量組對寒凝胸痹大鼠的心肌損傷有明顯的治療作用，能改善心肌損傷;但各治療組與對照組相比，P＜0.01，表明其療效在心電圖改善方面還不能使之恢復到正常。

表1 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠心電圖Ⅱ導聯J點位移影響 ()

表1 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠心電圖Ⅱ導聯J點位移影響 ()

注:與正常對照組相比，＊＊P＜0.01，*P＜0.05;與模型組相比，▲▲P ＜0.01，▲P ＜0.05。

3.3 心肌酶譜LDH、CK水平的改變

心肌受損后，細胞破裂，釋放出其中的CK、LDH進入血液中，故檢測血中CK、LDH，常作為評判心肌受損程度的指標。各實驗組檢測結果如表2。與正常對照組相比，模型組大鼠的血清CK、LDH水平明顯提高 (P＜0.01)，造模成功;與模型組相比，烏頭赤石脂丸高、中劑量組及復方丹參滴丸組大鼠血清CK、LDH水平明顯減輕 (P＜0.05);而烏頭赤石脂丸低劑量組雖能減低血清CK、LDH水平，但無統計學意義。

3.4 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠心肌病理學改變的影響

心肌壞死程度按參照文獻 ［7］分級:0級:無壞死;Ⅰ級:點狀，局灶壞死;Ⅱ級:≥2個灶壞死;Ⅲ級:≥3個灶壞死;Ⅳ級:大片彌散性壞死。各組間的差異用秩和檢驗，結果見表3。烏頭赤石脂丸中、高劑量組與模型組相比，P＜0.01，表明其能明顯減輕心肌損害;但與正常對照組相比，P＜0.01，表明其療效在心肌損害改善方面還不能使之恢復到正常。

表2 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清LDH、CK水平的影響 ()

表2 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清LDH、CK水平的影響 ()

注:與正常對照組相比，＊＊P＜0.01;與模型組相比，▲P＜0.05。

表3 寒凝胸痹大鼠心肌病理學改變

3.5 全血及血漿粘度的檢測

各組大鼠全血及血漿粘度改變如表4。模型組不同切變率的全血及血漿粘度最高，與對照組相比，P＜0.01或＜0.05，表明存在著顯著差別;各治療組與模型組相比，P＜0.01或＜0.05，表明烏頭赤石脂丸能降低寒凝胸痹大鼠的全血或血漿粘度，改善血液流變學。由此可推測，烏頭赤石脂丸可能通過降低寒凝胸痹大鼠的血液粘稠度，增加血液流速，提高心肌供血而實現對心肌的保護作用的。

表4 寒凝胸痹大鼠全血及血漿粘度改變()

表4 寒凝胸痹大鼠全血及血漿粘度改變()

注:與正常對照組相比，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05;與模型組相比，▲▲P ＜0.01，▲P ＜0.05)

4 討論

《內經》首載“胸痹”， 《靈樞·本臟》云:“肺大則多飲，善病胸痹、喉痹、逆氣”。胸痹因病位不同分為心痹和肺痹，張仲景認為胸痹病主要指心痹，其在《金匾要略·胸痹心痛短氣病》指出:“胸痹之病喘息，咳唾，胸背痛，短氣”，“胸痹不得臥，心痛徹背”。由此可見，胸痹主要指胸部悶痛，甚則胸痛徹背，氣短喘息不得臥為主癥的一種疾病。7版《中醫診斷學》將胸痹分型分為4型:寒凝心脈、氣滯心脈、痰阻心脈、瘀阻心脈。烏頭赤石脂丸主治陽氣不足，寒凝心脈之胸痹。

心肌缺血損傷時，將影響缺血區的心室生物電復極的正常進行，在心電圖相關導聯上發生ST－T段的異常改變，J點為ST段的起點，其改變可作為心肌缺血的心電圖觀察指標。由于心肌細胞發生腫脹，細胞膜的完整性受到破壞，膜對蛋白酶的通透性增加，CK、LDH由細胞內釋出增加，使血清中酶含量增加，是評判心肌受損程度的指標。烏頭赤石脂丸可降低寒凝胸痹大鼠心電圖Ⅱ導聯J點的抬高;改善大鼠血清CK、LDH水平;病理形態學上顯示能減輕心肌組織的缺血損傷程度，表明烏頭赤石脂丸對冰水游泳結合垂體后葉素誘發寒凝胸痹大鼠缺血損傷心肌有保護作用。

血液粘度增高可使血流阻力增加，血流速度減慢，會誘導血小板的粘附聚集形成血栓，從而加重損傷心肌的缺血。烏頭赤石脂丸降低寒凝胸痹大鼠的全血或血漿粘度，改善其血液流變學。提示烏頭赤石脂丸能減輕寒凝胸痹大鼠心肌缺血損傷程度，可能通過改善血液的粘稠度達到保護目的，具體機制需進一步深入研究。

［參考文獻］

［1］徐光華，張學山，黃展，等.烏頭赤石脂湯合丹參注射液治療急性心肌梗死的療效觀察 ［J］.新中醫，2001，33(9):30－31.

［2］王旭東.探析烏頭赤石脂丸的臨床運用［J］.中醫函授通訊，1993，11(5):2－3.

［3］黃漢超，周鳳嬌.烏頭赤石脂湯治療不穩定型心絞痛的臨床觀察［J］.中華中醫藥學刊，2007，23(5):1032－1034.

［4］戴啟剛，汪受傳，王忠山，等.烏頭赤石脂丸對異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護作用［J］.北京中醫藥大學學報，2011，34(11):755－758.

［5］閆娟娟，高文遠.黃芪桂枝五物湯對胸痹陽虛寒凝證大鼠的心電圖和血清酶的影響 ［J］.上海中醫藥雜志，2009，43(1):75－77.

［6］韋敏，沈健，許惠琴.乳舒改善微循環和血液流變學的作用研究 ［J］.云南中醫學院學報，2006，29(5):20－23.

［7］Bertinchant J P，Robert E，Polge A，et al.Comparison of the diagnostic value of cardiac troponinⅠand T determinations for detecting early myocardial damage and the relationship with histological findings after isoprenaline－induced cardiac injury in rats ［J］.Clin Chim Acta，2000，298(122):13－28.