原料藥丹酚酸B粉末及其水溶液穩定性研究*

李珊珊，趙紫偉，何 蕊，侯安國

(云南中醫學院，云南昆明 650500)

丹參為常用中藥材，最早記載于《神農本草經》，具有活血化瘀，安神去煩，涼血消痛的功效。現代藥理對其化學成分做了大量研究，其中水溶性成分之一丹酚酸B，據報道具有較強的抗氧化活性和清除自由基的作用，具有潛在的藥用開發價值［1－2］;另報道表示丹酚酸B在水溶液中不穩定，易受溫度、pH的影響。為了對其進一步了解，本文就以自制純度為91.33%的丹酚酸B粉末為原料藥，考察溫度、光照、濕度對其穩定性的影響及在不同溫度下丹酚酸B的降解速率常數，推導在常溫條件下丹酚酸B的速率常數及有效期，為丹酚酸B水溶液制劑提供理論依據。

1 實驗儀器和試藥

1.1 儀器

戴安U－3000高效液相色譜儀 (美國戴安公司);SHH－SDT綜合藥品穩定性試驗箱 (重慶市永生實驗儀器廠);Auw2200分析天平 (島津國際貿易有限公司);電熱恒溫鼓風干燥箱 (上海一恒科技有限公司)

1.2 試藥

丹酚酸B對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號:11562－200302);丹酚酸B原料藥 (自制，純度 91.33%);色譜級甲醇、乙腈 (Fisher公司);水為去離子水;其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定方法

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取丹酚酸B對照品適量，加水溶解，配制成0.12mg/mL的對照品溶液，備用。

2.1.2 色譜條件

Eclipse XPB－C18(4.6×150mm)色譜柱;流動相:甲醇－乙腈－甲酸－水 (30∶10∶1∶59);流速:1.0ml· min－1;柱溫:30℃;檢測波長:286nm;理論塔板數以丹酚酸B色譜峰計大于3000。

2.1.3 線性關系考察

取上述丹酚酸B對照品溶液，分別進樣1μL，4μL，7μL，10μL，14μL，18μL，以對照品峰面積為縱坐標，以丹酚酸B質量為橫坐標，計算得回歸方程為:y=20.378x+0.0082(r=1)，其在0.12～2.16μg線性范圍內良好。

2.1.4 精密度考察

取上述丹酚酸B對照品溶液，連續進樣6次，每次10μL。結果，RSD=0.80% ，表明儀器精密度良好。

2.1.5 穩定性考察

取上述丹酚酸B對照品溶液，于0，2，4，6，8，12h進樣，每次10μL。結果，RSD=0.76% ，表明丹酚酸B對照品在12h內穩定性較好。

2.1.6 加樣回收率考察

取6份已測定含量的供試品溶液2mL，分別精密加入上述丹酚酸B對照品溶液2 mL于5mL的容量瓶中，分別進樣10μL，計算回收率。結果，實驗平均回收率為99.78%，RSD=1.74%(n=6)。

2.2 強光照對原料藥丹酚酸B粉末的影響［3］

取適量供試品于稱量瓶中，攤成≤5mm厚的薄層，置于裝有日光燈的藥品穩定性試驗箱光照箱中，于照度為4500lx±500lx的條件下放置10d，于第5天和第10天取樣，平行測定3組，觀察其外觀及測定其含量變化，結果，原料藥丹酚酸B粉末在10d內的強光照條件下，外觀顏色、含量基本無明顯的變化。

2.3 高溫條件對原料藥丹酚酸B粉末的影響

取適量供試品于稱量瓶中，攤成≤5mm厚的薄層，置于藥品穩定性試驗箱60℃的恒溫箱中10d，于第5天和第10天取樣，平行測定3組，觀察其外觀及測定其含量變化，結果，原料藥丹酚酸B粉末在10d內的高溫條件下，外觀顏色、含量也基本無明顯的變化。

2.4 高濕條件對原料藥丹酚酸B粉末的影響

2.4.1 吸濕平衡時間的測定［4］

取適量供試品于稱量瓶中，攤成≤5mm厚的薄層，精密稱重，置于底部盛有飽和NaCl的干燥器中 (相對濕度為75%)，每隔24h稱重1次，平行測定3組，計算不同時間的吸濕率，結果丹酚酸B粉末在48h后吸濕基本達到平衡，其吸濕率達到16.52%.

2.4.2 樣品臨界相對濕度的測定［4］

取恒重過的原料藥丹酚酸B分別置于盛有不同濃度的濃H2SO4中，于48h后取出，精密稱定，計算常溫下樣品的水分含量。以吸濕率為縱坐標，相對濕度為橫坐標作臨界相對濕度曲線圖，結果見圖1:

圖1 丹酚酸B臨界相對吸濕曲線圖

由圖1可知，相對濕度在60%以下丹酚酸B粉末的吸濕率較小，而在60%以上吸濕率逐漸增大。因此，可確定丹酚酸B粉末臨界相對濕度為60%.

2.5 原料藥丹酚酸B水溶液降解動力學的測定［5］

取適量原料藥丹酚酸B粉末于500mL的容量瓶中，配制成0.9969mg/mL的丹酚酸B水溶液，平均分為5組，每組3份，于適宜容器中，分別置于50℃，60℃，70℃，80℃，90℃的恒溫水浴鍋中，每隔一段時間取樣，測定其含量，作各溫度下的IgC－t圖，并分別求得Arrhenius方程、常溫下(25℃)的速率常數及有效期，結果見圖2及表1。

圖2 各溫度條件下丹酚酸B降解動力學方程擬合曲線

表1 丹酚酸B水溶液在不同溫度下的回歸方程及動力學常數

實驗結果表明隨著溫度升高，丹酚酸B濃度下降越快，在50℃時含量降解最慢，90℃時降解最快。丹酚酸B水溶液降解趨勢成直線分布，符合降解一級動力學特征，原料藥丹酚酸B水溶液在室溫時速率常數為K25℃=1.132×104h－1，降解10%的時間為t0.9=38.80d。

3 小結與討論

原料藥丹酚酸B粉末10d內在強光照、高溫條件下比較穩定，外觀、含量幾乎無變化，但粉末易吸潮，且吸濕較快，因此，丹酚酸B粉末應置于相對濕度為60%以下的環境中儲存。

實驗證明，丹酚酸B水溶液降解符合一級動力學方程，在不同溫度下降解速率不同，隨著溫度的升高，降解速率逐步升高。經推導丹酚酸B的Arrenius方程為Igk=－3.4529/T+7.6408(r=0.9816)，在常溫下的降解常數為1.132×104h－1，有效期38.80d，說明水溶液在常溫下不穩定，水液配置的標準品應現配現用，水溶液制劑有效期短。另者，文獻報道［6－7］，調節適宜的pH值、添加合理的抗氧劑可以增加水溶液的穩定性。丹酚酸B具潛在的新藥研發價值，可以結合文獻報道的條件進行進一步研究，為水溶液制劑的開發提供理論依據。

［1］黃詒森，張均田.丹參中三種水溶性成分的體外抗氧化作用 ［J］.藥學學報，1992，27(2):9.

［2］劉平，劉乃明，徐列明，等.丹酚酸乙對四氯化碳體外損傷原代培養大鼠肝細胞的直接保護作用 ［J］.中國中藥雜志，1997，22(5):303－306.

［3］中華人民共和國藥典 ［M］.北京:中國科技醫藥出版社，2010:附錄199－200.

［4］謝秀瓊.中藥新劑型開發與應用 ［M］.北京:人民衛生出版社，2000.

［5］張兆旺.中藥藥劑學 ［M］.北京:中國中醫藥出版社，2008.

［6］林青，黃琳，肖曉麗，等.丹參水提液中丹酚酸B濕熱降解動力學研究 ［J］.中國現代中藥，2008，10(8):29－31.

［7］朱靜，陳慧清，白鵬.丹酚酸B水溶液分解反應的動力學研究 ［J］.中成藥，2009，31(4):541－543.