高效液相色譜法測定果凍中的合成著色劑

王冬芬

洛陽市澗西區疾病預防控制中心，河南洛陽 471003

果凍為一種膠凍休閑食品，其主要原料是海藻膠，它非常可口且色彩多樣，尤其為小朋友所青睞。然而果凍里面添加的合成著色劑，能夠對人體產生毒害[1]，所以國家衛生標準中嚴格的規定了合成著色劑的添加量[2]。在我國，共有十幾種可以使用的合成著色劑，其中莧菜紅、檸檬黃、日落黃、胭脂紅以及靛藍等最為常見。在我國高效液相色譜法、示波極譜法以及薄層色譜法是常用的色素檢測方法。然而國標GB／T5009.35—2003中關于食品中合成著色劑的檢測，利用高效液相色譜法主要在同一波長對各種色素含量進行測定，具有靈敏度和特異性低的缺點，缺少相應的處理措施。

1 材料與方法

1.1 材料

LC2000液相色譜儀（上海天美科學儀器有限公司）。試劑為已腈；乙酸銨溶液（0.02 mol／L）；水：氨水：乙醇溶液(1：2：7)；檸檬酸溶液（20%）；pH6水（pH用20%檸檬酸調）；聚酰胺粉；日落黃、檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、赤蘚紅、靛藍六種色素標準溶液（0.1 mg／mL）。

1.3 方法

測定方法依據GB／T5009.35—2003。其前處理方法如下：稱取5.00 g加標樣品，溶解，pH調至6.0，然后50.0 mL容量瓶定容。

超聲萃取：分別用超聲器超聲10、20、30 min，再進行提取。

振蕩提取：分別用振蕩機振蕩10、20、30 min，再進行提取。

加熱提取：置70℃恒溫水浴鍋分別為10、20、30 min，再進行提取。

1.4 待測樣品的處理

稱取5.00 g樣品，溶解，調pH6.0，50.0 mL容量瓶定容。在恒溫水浴鍋（70℃）水浴20 min后混勻，加檸檬酸（20%）使pH為6.0，把聚酰胺粉（1 g）用水調為粥狀，然后倒到樣品溶液，進行攪拌，通過垂融漏斗進行抽濾，以70℃pH6水進行洗滌（4次），然后用5 mL的水、氨水以及乙醇混合溶液進行解吸（4次），將解吸液收集之后，并中和（乙酸），然后蒸發接近干燥，用水溶后定容到5 mL，經濾膜（0.22 μm）過濾，濾液保存好后備用。

2 結果分析

2.1 6種色素的標準曲線

把6種常用色素的各種濃度標準混合溶液通過高效液相色譜儀，得出標準工作曲線。自下而上依次是①赤蘚紅；②日落黃；③胭脂紅；④靛藍；⑤莧菜紅；⑥檸檬黃。獲得6種常用色素的標準曲線方程為：赤蘚紅Y=11107X-2175.8，r=0.9993；日落黃Y=12209X+3013.7，r=0.9993；胭脂紅Y=18234X+7057.1 r=0.9993；靛藍Y=24646X+10806，r=-0.9994；莧菜紅Y=23911X+769402，r=0.9996；檸檬黃Y=26053x+7395.7 r=0.9995。

2.2 三種前處理對比分析

用加熱、振蕩、超聲三種放法進行提取，發現震蕩和超聲法隨著時間的延長提取效果增加。而加熱法在20 min時提取效果最好，同時這種處理方法是最佳方法。同時以檸檬黃為例作圖比較提取效果，能夠非常直觀發現加熱法為最好的提取方法，也就是經70℃水浴20 min提取為最佳提取方法（圖1）。

圖1 檸檬黃提取效果的比較圖

2.3 回收試驗結果

在同一前處理好的樣品里面加入色素標準溶液，測定合成著色劑。所測結果的相對標準差范圍是2.5%～8.3%，回收率為98.4%～100.0%。

3 結論

本文研究發現果凍色素最佳提取方法為70℃水浴20 min。這種方法的優點是便于操作、及時，回收率高。由于果凍中通常含有大約0.5%瓊脂，因此通過超聲與振蕩的方法提取該半固體的色素，很難進行完全提取，導致回收率不高。因為在70℃時瓊脂就可溶解，然后再稀釋10倍后，由于瓊脂濃度較低，就不能再成半固體狀物質，這樣非常適合進行檢測。國家標準方法檢測波長是254 nm，由于大部分物質對該波長存在吸收，因此會有干擾產生。本文首先將前處理法確定，然后將各段時間的檢測波長確定，使不同色素的特異性與靈敏度顯著提高。

總之，通過將果凍進行前處理，利用液相色譜法C18柱，流動相為乙腈和乙酸胺，精油梯度洗脫，能夠非常高效的檢測出果凍中的合成著色劑。

[1]季順仙，繆菁，陶晶晶，等. 休閑食品中添加劑使用情況調查[J]. 浙江預防醫學，2009（1）:41-42.

[2]李乃潔，周長民，劉然，等. 合成著色劑標準樣品雜質純化的基本方法[J].品牌與標準化，2011（24）:35.