探討腦梗死的患者C反應蛋白-717A/G多態性與C反應蛋白及相關危險因素的關系

馮 濤 徐秀芝 楊 勇 祝鴻雁 范玉偉 王連堃

黑龍江省醫院南崗分院神經二科，黑龍江哈爾濱 150000

C反應蛋白(CRP)被發現是一項較敏感的反應機體炎癥狀態的指標，近年來有學者證明CRP有對未來發生腦梗死的預言能力[1，2]，但在遺傳標記方面目前還沒有信息支持這一結果。本研究應PCR-RFLP方法檢測125例腦梗死患者和130例健康對照者CRP-717A/G基因多態性，探討中國東北地區腦梗死患者CRP-717A/G基因多態性與CRP及腦梗死其他危險因素的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象

我們選取發病3 d內的腦梗死患者125例，診斷符合2008年歐洲卒中指南制定的缺血性腦血管病診斷標準，經腦CT或MRI檢查證實，其中男76例，女49例，平均年齡（67.60±9.42）歲。對照組為健康體檢者130例，三個月內沒有感染，男73例，女57例，平均年齡（67.5±8.26）歲。

1.2 方法

1.2.1 一般資料 年齡、性別、血壓，于清晨空腹靜脈血檢測血常規、血脂、血糖、凝血常規及C反應蛋白，測頸動脈內膜中層厚度，腦梗死病灶大小，神經功能評分。

1.2.2 DNA提取 采外周靜脈血2～3 mL，ACD抗凝，用血液基因組DNA純化試劑盒提取DNA。

1.2.3 PCR 擴增 taq酶，dNTP，引物序列（均由上海捷瑞公司合成），上游引物：5′-GACTCCTGCCTGAAGCTTTACATA-3′，下游引物：5′-ATACATGTGCCATGCTGGTGTG-3′，擴增片段大小為376bp。PCR 擴增體系（共12.5μL）：模板DNA 50～100 ng，4×dNTP各2.5 mmol，PCR引物各5μmol，rTaq 0.5 U。PCR 擴增條件：95℃預變性4 min，95℃變性30 s，58℃退火40 s，72℃延伸30 s，共30個循環，最后72℃延伸7 min。

1.2.4 酶切 按內切酶Bsh1236 I說明書要求酶切PCR產物并采用電泳分型。

1.3 統計學方法

兩組間基因型、等位基因頻率比較應用χ2檢驗方法，P＜0.05為差異有顯著意義。應用SAS9.13統計軟件，對計量資料的各基因型間的比較則應用單因素方差分析。

2 結果

①通過邏輯回歸分析，對腦梗死作用由大到小分別是：C反應蛋白(OR=8.4820），膽固醇(OR=4.5349)，血糖（OR=3.5510），纖維蛋白原(OR=1.8955)，年齡(OR=1.3260），收縮壓(OR=1.1350）。②C反應蛋白啟動子區-717A/G位點與腦梗死關系。腦梗死組及對照組的CRP-717A> G 基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡，兩組間等位基因頻率及各基因型頻率分布無顯著差異（P=0.21），結果見表1。

表1 腦梗死組與對照組-717A/G基因型頻率、等位基因頻率比較

3 討論

由于我們研究的樣本量比較少，可能會存在統計學上的偏差，但肯定CRP是一項與腦血管病有直接關系的敏感指標，我們將擴大樣本量繼續深入研究探討腦梗死患者C反應蛋白多態性與C反應蛋白及相關危險因素的關系。

[1]Biasucci LM，Liuzzo G，Grillo RL，et al. Maseri A (1999)Elevated levels of C-reactive protein at discharge in atientswith unstable angina predict recurrent instability[J].Circulation，1999:855-860.

[2]Ferreiros ER，Boissonnet CP，Pizarro R，et al. Bazzino OO (1999)Independent prognostic value of elevated C-reactive protein in unstable angina[J].Circulation1999，100:1958-1963.

[3]Gussekloo J，SchaapMC，FrolichM，et al.C-reactive protein is a strong butnonspecific risk factor of fatal stroke in elderly persons[J].ArteriosclerThromb Vasc Bio，2000，20：1047-1051.