復方美托洛爾-氨氯地平雙層片體外釋放度方法研究

沈淑媛 吳 赟 王成港 王杏林

1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.天津藥物研究院 釋藥技術與藥代動力學國家重點實驗室，天津 300193

酒石酸美托洛爾為水溶性β受體阻滯劑，口服1.5 h血藥濃度達峰值，半衰期3～5 h，為減少服藥次數可制成緩釋制劑[1]；苯磺酸氨氯地平為二氫吡啶類鈣拮抗劑，口服不受食物影響、生物利用度高，6～12 h達到峰濃度，血漿半衰期長（36～45 h）[2]。二者通過不同的作用途徑，達到了相同的降血壓效果。兩者聯合不僅能協同降低血壓，而且可抑制由于降壓而引起的反射性心率增快，同時可以減少對心、腦、腎等靶器官的毒副作用。由阿斯利康公司研發的復方琥珀酸美托洛爾氨氯地平緩釋片（SelomaxTM）在國外已上市，而國內尚無此類產品上市。筆者對復方酒石酸美托洛爾-苯磺酸氨氯地平雙層片進行了研究開發，本文主要考察了自制美托洛爾-氨氯地平雙層片的體外釋放度。

1 材料與試藥

1.1 儀器

紫外可見分光光度計UV2550（日本島津），安捷倫高效液相色譜儀1200（美國安捷倫公司），AB104N型電子天平（瑞士 METTLER TOLEDO），智能溶出試驗儀（ZRS-8G）（天大天發科技有限公司）。

1.2 藥品

酒石酸美托洛爾（廣州漢方現代中藥研究開發有限公司，批號：00239），苯磺酸氨氯地平（常州亞邦制藥有限公司，批號：M100401），磷酸二氫鉀（天津博迪化工股份有限公司，批號：20101201），鹽酸（天津市凱信化學有限公司），乙腈（天津市康科德科技有限公司）。

2 方法與結果

2.1 材料的制備

2.1.1 緩釋層的制備

將酒石酸美托洛爾與新型預膠化淀粉緩釋骨架材料SWELSTARTM MX-1、乳糖等輔料混勻，加入適量黏合劑（10%PVP及乙醇溶液）制軟材，過30目篩制粒，在60℃烤箱中干燥0.5 h，取出，過30目篩整粒，加入適量硬脂酸鎂，混勻即得。

2.1.2 速釋層的制備

根據預試驗知速釋層可以采用粉末直接壓片法制備，先將各輔料按處方量混合均勻，再將苯磺酸氨氯地平按等量遞加法與輔料混合，即得。

2.1.3 雙層片的制備

根據處方設計要求將兩種顆粒按一定比例分層壓片。

2.2 釋放度方法考察

2.2.1 吸收波長的選擇

分別用0.01 mol/L的鹽酸溶液配制50 μg/mL的美托洛爾溶液、20 μg/mL的氨氯地平溶液及空白輔料溶液，在200～400 nm范圍內進行全波長掃描。結果酒石酸美托洛爾在274 nm處有最大吸收波長，而苯磺酸氨氯地平在237 nm處有較高吸收。空白輔料在兩個波長下均無干擾吸收。考察在兩個不同的波長下主藥的檢測，在237 nm波長條件下，基線平穩，兩個主藥互不影響，因此選擇237 nm為兩者的檢測波長。

2.2.2 釋放度測定方法

采用高效液相色譜（HPLC）法測定。色譜條件具體為流動相：0.02 mmol/L 磷酸二氫鉀（pH 3.0）-乙腈=65∶35，十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（25 cm），流速：1 mL/min，檢測波長：237 nm。配制適宜濃度的樣品和對照品，進樣20 μL，記錄色譜圖及主峰峰面積。用外標法計算兩個主藥釋放度。

2.2.3 專屬性

按處方量稱取本品中除主藥外的其他原輔料置100 mL量瓶中，加甲醇溶解，過濾，在237 nm下進樣。稱取相當于含美托洛爾50 mg、氨氯地平5 mg的片粉于50 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋，超聲溶解，移取1 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容，過濾，分別進樣。結果表明空白輔料不干擾主藥的測定。酒石酸美托洛爾的理論塔板數為2902，苯磺酸氨氯地平的理論塔板數為2392，兩者的分離度為2.93。

2.2.4 線性關系

2.2.4.1 美托洛爾和氨氯地平對照品溶液的制備 用0.01 mol/L鹽酸分別配制濃度為120 μg/mL和15 μg/mL的美托洛爾和氨氯地平對照品儲備液。

2.2.4.2 美托洛爾標準溶液的制備 分別精密吸取1、2、4、6、8 mL美托洛爾對照品儲備液于10 mL容量瓶中，加0.01 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，得濃度為 12、24、48、72、96 μg/mL的美托洛爾標準溶液。

2.2.4.3 氨氯地平標準溶液的制備 分別精密吸取1、2、4、6、8 mL苯磺酸氨氯地平對照品儲備液于10 mL容量瓶中，0.01 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，得濃度為1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 μg/mL 的氨氯地平標準溶液。

分別將上述系列標準溶液、對照品儲備液進樣，記錄峰面積，以峰面積對濃度做直線回歸[3]，得酒石酸美托洛爾和苯磺酸氨氯地平在0.01 mol/L鹽酸溶液中的回歸方程分別為A=19562C+6951（r=0.9999）和 A=2932C+678（r=0.9998）。結果表明酒石酸美托洛爾在12～120 μg/mL濃度范圍內線性關系良好，苯磺酸氨氯地平在1.5～15.0 μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.2.5 精密度試驗

稱取復方美托洛爾-氨氯地平緩釋雙層片粉，加0.01 mol/L鹽酸溶液溶解稀釋定容，配成約含美托洛爾100 μg/mL、氨氯地平10 μg/mL的供試品溶液。重復進樣6次，分別測定兩個主藥峰面積，計算RSD。美托洛爾的RSD為0.68%、氨氯地平的RSD為0.72%，結果表明兩者精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗

稱取復方美托洛爾-氨氯地平緩釋雙層片粉適量，加0.01 mol/L的鹽酸溶解并過濾。配成約含美托洛爾100 μg/mL、氨氯地平 10 μg/mL 的供試品溶液。 分別于 0、3、6、9、12 h 進樣，測定峰面積，得酒石酸美托洛爾的RSD為0.92%，苯磺酸氨氯地平的RSD為1.3%。結果表明，酒石酸美托洛爾及苯磺酸氨氯地平在0.01 mol/L的鹽酸中12 h均穩定。

2.2.7 回收率試驗

2.2.7.1 酒石酸美托洛爾回收率試驗 用0.01 mol/L鹽酸溶液分別配制含標示量美托洛爾80%、100%、120%的9個樣品，進樣，計算回收率。酒石酸美托洛爾的回收率平均值99.92%，RSD<2%，回收率符合要求。

2.2.7.2 氨氯地平回收率試驗 用0.01 mol/L的鹽酸溶液配制含標示量氨氯地平80%、100%、120%的9個樣品，進樣，計算回收率。氨氯地平的回收率平均值100.23%，RSD<2%，回收率符合要求。

2.2.8 濾膜干擾試驗

專屬性項下樣品溶液，分別過濾 5、10、15、20、25、30 mL續濾液20 μL分別進樣檢查。試驗結果表明，樣品經過濾膜過濾后，不干擾溶出度的測定結果。

2.2.9 雙層片釋放度的測定

雙層片釋放度的測定采用《中國藥典》2010年版二部附錄X D第一法。按照《中國藥典》2010年版二部附錄XIX D緩釋、控釋和遲釋制劑指導原則，轉速75 r/min，溫度37.5℃，溶出介質0.01 mol/L的鹽酸500 mL。定時取樣5 mL，濾過，同時補加相應的溶出介質5 mL；取續濾液20 μL注入液相色譜儀，按外標法分別計算兩個主藥的累積釋放百分率，結果見圖 1、2。

圖1 苯磺酸氨氯地平溶出度曲線

圖2 酒石酸美托洛爾累積釋放度曲線

2.3 釋放度方法的研究

目前國內尚無此復方制劑上市，考慮到含有兩個主藥，為減少誤差，首先參考了FDA、日本厚生省等對苯磺酸氨氯地平的溶出方法規定，確定速釋層溶出度的考察方法：槳法，75 r/min，溶出介質為0.01 mol/L的鹽酸。下面從這三個方面考察酒石酸美托洛爾的釋放，判斷是否可以用同一個方法測定。

2.3.1 溶出方法的選擇

分別使用槳法、籃法測定酒石酸美托洛爾的釋放度[4]，結果見圖3。由圖3可知，溶出方法對釋放無顯著影響，為了便于觀察緩釋層的溶蝕情況，選擇槳法。

圖3 不同溶出方法下酒石酸美托洛爾釋放度曲線

2.3.2 轉速選擇

分別在100、75、50 r/min條件下測定雙層片緩釋層的釋放度結果見圖4。

由圖4可以看出50 r/min條件下釋放較慢，75 r/min及100 r/min條件對釋放度的影響不大，考慮到速釋層釋放條件，選擇轉速75 r/min。

圖4 不同轉速下酒石酸美托洛爾的溶出度曲線

2.3.3 溶出介質選擇

分別考察純水、0.01 mol/L鹽酸、pH 6.8的磷酸鹽緩沖液這三種溶出介質[5]，按照“2.2.9”項下測定方法測定酒石酸美托洛爾的釋放度，結果見圖5。

由圖5可以看出三種溶出介質對緩釋層釋放影響不大，考慮到苯磺酸氨氯地平微溶于水，因此選擇0.01 mol/L鹽酸為溶出介質。

圖5 不同釋放介質中酒石酸美托洛爾的釋放度曲線

綜合以上結論，兩個主藥可選擇同一方法測定溶出度。

2.4 緩釋層釋藥動力學研究

目前評價緩、控釋制劑藥物釋放機制的模型主要有如下幾種：零級釋藥方程[6]：Q=Kt；一級釋藥方程[7]：ln（100-Q）=-kt；Higuchi平面擴散模式方程[8]：Q=Kt1/2；Ritger-Peppas 方程[9]：lnQ=nlnt+k。式中Q為累積釋藥百分率，K為釋放速率常數，t為時間，n為擴散指數。考察45 min～12 h之間酒石酸美托洛爾的釋放度。

表1 復方雙層片中緩釋部分釋藥曲線的模型擬合（n=6）

擬合時以相關系數（r）越大，表明擬合效果越好。由此判斷酒石酸美托洛爾緩釋層體外釋藥機制接近零級動力學方程。

3 討論

對于復方緩釋片的釋放度測定方法，國內尚未見報道，通過參考相關資料首先確定了測定氨氯地平速釋層溶出度的方法，接著考察了不同條件下酒石酸美托洛爾的釋放度，并建立了測定復方雙層片的方法。酒石酸美托洛爾為水易溶藥物，在水中溶解度 >700 mg/mL，故在選擇釋放介質時，如釋放介質能滿足苯磺酸氨氯地平漏槽條件的話，酒石酸美托洛爾也滿足漏槽條件。

自制片中加入了一種親水凝膠骨架材料，是由旭化成化學公司和三和淀粉公司共同開發的一種新型預膠化淀粉，商品名為SWELSTARTM MX-1，通過加入親水性物質聚乙二醇（PEG 6000）使其具有可控制的凝膠強度，推進水分的滲透作用，增加了MX-1早期的吸水性，減少其溶蝕，從而控制藥物以零級速率釋放。

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