顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8、MIP-1α含量變化及其意義探討①

劉志忠 丁秀榮 袁寶軍 石 峻 康熙雄

(首都醫科大學附屬北京天壇醫院實驗診斷中心，北京100050)

兒童顱咽管瘤是常見的先天性顱內腫瘤，占兒童腦腫瘤的10%，占兒童鞍區腫瘤的54%，幾乎全部是牙釉質型，絕大多數病例有囊變和鈣化，及與視神經、視交叉、垂體柄等結構粘連，一些顱咽管瘤還具有侵襲性生長及易復發的特點，故張玉琪等［1］認為兒童顱咽管瘤應屬惡性腫瘤。兒童顱咽管瘤的病因至今不詳。炎癥與腫瘤的關聯已得到廣泛的關注，在腫瘤微環境中，炎癥細胞和分子幾乎影響到腫瘤進展的每一方面［2］。本實驗采用高通量液體芯片技術檢測了顱咽管瘤患兒外周血清中IL-6、IL-8和MIP-1α三種炎癥因子的含量，旨在探討它們在兒童顱咽管瘤患者血清中的表達情況，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 39例顱咽管瘤患兒，均選自2010年2月至2011年2月期間在首都醫科大學附屬北京天壇醫院住院的患者，年齡5～15歲，平均年齡(10.65±4.38)歲，根據顱咽管瘤組有無術后復發分為初發組(21例)，復發組(18例)，術后復發時間20～35個月。所有病例均排除合并全身感染、心、肝、腎、肺疾病、糖尿病及其他腫瘤。健康對照組:為2010年間在河北聯合大學附屬醫院健康體檢兒童，共54例，其中男34例，女20例，年齡5～15歲，平均年齡(10.14 ±3.28)歲，與腫瘤組比較，年齡、性別比例均無統計學差異(P＞0.05)。入選者均無高血壓、心臟病、糖尿病、肝病、腎病和其他全身系統性疾病。

1.2 方法

1.2.1 標本的收集和保存 收集入選患者入院次晨空腹靜脈血3 ml于黃帽真空采血管中，室溫下靜置半小時，3 000 r/min離心5分鐘，提取血清，置于-80℃冰箱保存，待檢。健康對照兒童在體檢當日空腹抽取靜脈血3 ml，處理保存方式同病例組。

1.2.2 血清IL-6、IL-8、MIP-1α 含量檢測 血清 IL-6、IL-8、MIP-1α含量檢測采用美國Luminex公司生產的Luminex 200多功能液相芯片分析儀檢測。試劑為高通量液體芯片檢測試劑盒(Milliplex Human Cytokine/Chemokine Immunoassay)，產自美國Millipore公司。操作過程嚴格按照試劑盒操作說明進行。

1.3 統計方法 采用SPSS11.5統計軟件包進行數據分析。計量資料進行正態性檢驗，符合正態分布的計量資料采用±s表示，兩組均數之間差別的比較采用t檢驗;非正態分布的計量資料用中位數M和四分位數間距(Q25-Q75)表示，組間比較采用秩和檢驗。計數資料采用χ2檢驗。兩變量相關性采用Spearman相關分析。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

表1 病例組和對照組人口學數據及血清IL-6和IL-8、MIP-1α濃度Tab.1 The levels of the serum IL-6，IL-8 and MIP-1α in patients and healthy controls

2 結果

2.1 顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8、MIP-1α 濃度變化 顱咽管瘤組和健康對照組IL-6、IL-8、MIP-1α濃度變化如表1所示。腫瘤組三種炎癥因子濃度與對照組比較，差異均有統計學意義，P值均＜0.01。其中MIP-1α濃度變化最為顯著，腫瘤組的濃度是健康對照組濃度的112.81倍，而IL-8、IL-6濃度分別是對照組的23.67倍和8.14倍。

2.2 顱咽管瘤血清IL-6、IL-8、MIP-1α 濃度與腫瘤復發的關系 研究發現，顱咽管瘤復發患兒MIP-1a血清濃度為 355.2(97.45 ～1 028.78)pg/ml，初發顱咽管瘤患兒MIP-1α血清濃度為105.5(21.58～278.0)pg/ml，二者比較差異有統計學意義(P＜0.05)。其他兩種炎癥因子兩組間比較則未發現統計學差異(均P＞0.05)。如表2所示。

2.3 顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8、MIP-1α 濃度相關性 Spearman等級相關分析發現，血清IL-6和IL-8 呈正相關關系，rs=0.668，P ＜0.01;血清 IL-6和 MIP-1α 呈正相關關系，rs=0.734，P ＜0.01;血清IL-8 和 MIP-1α 呈正相關關系，rs=0.926，P ＜0.01。其中，血清IL-8和MIP-1α濃度的相關性最好。

3 討論

顱咽管瘤好發于學齡前兒童，并且腫瘤組織生長緩慢，多數病例等到腫瘤直徑達到3 cm以上才出現明顯的癥狀，從癥狀開始出現到確診通常需1～2年的時間。大量的臨床研究證實，顱咽管瘤的炎癥反應是導致其與周圍重要結構緊密粘連的重要原因［3，4］。黃廣龍等［5］也研究證明了成釉細胞型顱咽管瘤存在嚴重的炎癥反應，腫瘤組織及腫瘤間質中炎癥細胞聚集，C-反應蛋白及 NF-κB水平明顯升高，NF-κB信號通路被過度激活。

IL-6是一種具有廣泛免疫調節作用的細胞因子，有學者發現腦膠質瘤細胞株、腦膠質瘤組織及腫瘤浸潤巨噬細胞、淋巴細胞中都有IL-6的基因表達，并且基因的表達強弱與腦膠質瘤的惡性程度有關［6］。在本實驗中，我們發現腫瘤組IL-6濃度顯著高于對照組，說明在兒童顱咽管瘤中也可能存在IL-6的自分泌合成，從而導致外周血中IL-6的升高。顱咽管瘤的腫瘤組織及腫瘤間質中有炎癥細胞聚集［5］，如巨噬細胞、淋巴細胞等，我們推斷IL-6的旁分泌途徑也是兒童顱咽管瘤患兒血清IL-6濃度升高的原因之一。

表2 初發和復發顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8和MIP-1α濃度Tab.2 The levels of the serum IL-6，IL-8，MIP-1α in original and recurrence brain tumor children

白細胞介素8(IL-8)屬于ELR+CXC亞家族趨化因子，在適當的刺激下單核細胞、巨噬細胞、中性粒細胞、淋巴細胞及人類多種腫瘤細胞和細胞系均可合成和分泌IL-8。在本實驗中，顱咽管瘤患兒血清中IL-8含量明顯升高，這說明腫瘤組織可能以自分泌或旁分泌的方式大量生成了IL-8，從而導致外周血中IL-8含量的升高。IL-8作為一種促血管生長因子，通過自分泌或旁分泌方式刺激腫瘤血管形成的作用受到了廣泛關注。在腦部腫瘤組織中，IL-8的這種促血管增生作用也得到了證實［7］。由于兒童顱咽管瘤具有侵襲性生長及易復發等惡性腫瘤的特點［1］，故升高的IL-8可能促進了該腫瘤的血管新生，其確切作用還需組織學研究印證。

MIP-1α是趨化因子CC亞族的成員之一，單核細胞、中性粒細胞、活化T細胞等非腫瘤細胞及某些腫瘤細胞在適當的刺激下均可分泌合成MIP-1α。MIP-1α與受體結合后對靶細胞有趨化作用并促使其激活，產生TNF-α、IL-1和 IL-6等，釋放活性氧、蛋白水解酶，在慢性炎癥、微血管形成等方面發揮著重要的作用。國外學者在研究腦膠質瘤細胞時發現，C6膠質瘤細胞受細胞外ATP(三磷酸腺苷)刺激，細胞表達MIP-1α的量增加，同時培養上清MIP-1α濃度也增加，升高的MIP-1α能夠促進腫瘤細胞遷移。在本實驗中無論是顱咽管瘤初發組還是復發組血清MIP-1α濃度較對照組均有顯著升高，證明MIP-1α參與的炎癥反應與顱咽管瘤形成發展有關［8］。

術后易復發是顱咽管瘤最大的特點，如果手術不能全切，則術后幾乎均會復發［9］。即使是有影像學證實的全切患者，術后仍有一定的復發率，從0～27.3%各家報道不等［10］。如今在臨床實踐中顱咽管瘤的復發日益受到人們關注，但其分子機制仍研究甚少。本實驗結果表明，三種炎癥因子中，只有MIP-1α濃度在初發組與復發組之間有顯著差異，提示MIP-1α促進了顱咽管瘤復發過程。大量文獻報道，IL-6和 IL-8是 NF-κB信號通路的重要靶分子［11］，但 MIP-1α 與 NF-κB 的關系則未見權威報道。我們認為，MIP-1α與IL-6、IL-8可能受不同的信號通路調節。顱咽管瘤中與IL-6、IL-8相關的NF-κB 信號通路強烈激活［5］，與 MIP-1α 相關的信號通路的表達情況，有必要深入研究。通過MIP-1α相關信號通路的研究，可能發現治療該腫瘤復發的作用靶點。目前，術后影像學隨訪是監測顱咽管瘤復發的主要工具。由于CT有潛在的放射作用，患兒復查宜采用MRI檢查。但MRI檢查價格過高，定期多次復查會加重患者家庭的經濟負擔。筆者認為可將MIP-1α血清濃度檢測作為顱咽管瘤復發的篩選試驗，濃度升高者再進一步做影像學檢查既可節約醫療資源又可減輕患者的經濟負擔。

總之，顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8和MIP-1α三種炎癥因子水平均有不同程度升高，其中MIP-1α升高最為顯著，且與顱咽管瘤的復發有關。針對MIP-1α及其相關分子的研究，有可能發現有價值的診斷指標及理想的治療靶點。

1 張玉琪.兒童顱咽管瘤的治療策略［J］.中華神經外科雜志，2009;25(5):385-386.

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3 Ohmori K，Collins J，Fukushima T.Craniopharyngiomas in children［J］.Pediatr Neurosurg，2007;43(4):265-278.

4 Vinchon M，Dhellemmes P.Craniopharyngiomas in children:recurrence，reoperation and outcome［J］.Childs Nerv Syst，2008;24(2):211-217.

5 黃廣龍，漆松濤，李 佳 et al.核轉錄因子NF-κB在顱咽管瘤炎癥中的表達［J］.中國神經精神疾病雜志，2010;36(1):39-42.

6 袁玉會，于宏偉，劉云會.白細胞介素6在人腦膠質細胞瘤的表達［J］.中國神經精神疾病雜志，2007;33(3):145-158.

7 Shi X，Hong T，Walter K L et al.ING2 PHD domain links histone H3 lysine 4 methylation to active gene repression［J］.Nature，2006;442(7098):96-99.

8 Jantaratnotai N，Choi H B，McLarnon JG et al.ATPstimulates chemokine production via a store-operated calcium entry pathway in C6 glioma cells［J］.BMC Cancer，2009;9(12):442-451.

9 魏 偉，劉 兵，張建寧et al.顱咽管瘤顯微手術中下丘腦功能損害的防治［J］.天津醫科大學學報，2008;14(3):376-378.

10 漆松濤，潘 軍，方陸雄et al.顱咽管瘤的顯微手術治療及隨訪［J］.中華神經外科雜志，2007;23(4):246-249.

11 Allen C，Duffy S，Teknos T et al.Nuclear factor-kappaB-related serum factors as longitudinal biomarkers of response and survival in advanced oropharyngeal carcinoma［J］.Clin Cancer Res，2007;13(11):3182-3190.