Nucleostemin基因在非小細胞肺癌組織中的檢測及意義

李向陽 錢如林 蔡祖勛 賈向波

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，我國發病率和死亡率有明顯增高的趨勢。NS是一個P53結合蛋白，表達于干細胞、變異細胞和腫瘤，對維持干細胞和腫瘤細胞繼續增殖起了重要的作用［1，2］。NS表達量的增高與多種惡性腫瘤的惡性程度相關，而在NSCLC中的表達情況尚不清楚。本研究采免疫組織化學SP法檢測NS基因在NSCLC和癌旁正常組織中的表達水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 53例肺癌標本選自河南省胸科醫院2009年3月至2010年6月手術切除并經病理證實的組織標本，鱗癌30例，腺癌23例。術前未行任何化療、放療。其中男31例，女22例，年齡37～76歲，平均年齡57歲。臨床分期標準按國際抗癌聯盟(UICC)TNM分期:Ⅰ期4例，Ⅱ期34例，Ⅲ期15例。按組織學分級為:高分化10，中分化25例，低分化18例;另取癌旁(＞4 cm)經病理證實的正常肺組織作為對照。

1.2 免疫組織化學 兔抗人FHIT多克隆抗體及SP試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。每例取原發灶癌組織、切緣正常組織，組織經10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續切片，分別進行HE染色和免疫組化SP法染色。免疫組化染色步驟嚴格按試劑盒說明進行。

1.3 統計學方法 采用SPSS 11.0軟件包進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05具體統計學意義。

2 結果

NS蛋白在NSCLC中的表達率為54.7%(29/53)顯著高于癌旁正常組織中的表達率0%(0/15)(P＜0.05)。NS蛋白腺癌組織的表達率為65.2%(15/23)明顯高于鱗癌組織的表達率46.7%(14/30)(P＜0.05);低分化組織的表達率77.8%(14/18)明顯高于高、中分化組織的表達率42.9%(15/35)(P＜0.05)，與患者TNM分期及淋巴結轉移無關(P＞0.05)。

3 討論

腫瘤是正常細胞經過長時間、多階段演變而形成的一種疾病，許多基因及其蛋白質產物參與了這個復雜的變化過程。研究發現NS通過對p53通路來調節細胞周期，進而影響細胞的增殖分化，用RNA干擾和雜合子基因敲出實驗使NS的表達降低，就減少了細胞的增殖，加快細胞的衰老［3］，因此被認為是一個細胞增殖的重要調節因子。

最近一些研究已證實，在RNA和蛋白水平上，NS在多種腫瘤細胞系和原發癌上高表達，在定型終末分化細胞中不表達［4］。本研究顯示NS蛋白在NSCLC組織中的表達明顯高于癌旁正常組織。NS蛋白表達上調可能是NSCLC發生的早期事件，NS蛋白在NSCLC組織中表達的升高，使正常組織細胞惡性轉化的能力增強，細胞發生癌變、增殖能力增強，導致腫瘤的發生。提示NS蛋白表達的減少在NSCLC的發生機制中可能起一定的作用，采用纖維支氣管鏡活檢結合免疫組化技術檢測NS蛋白有助于NSCLC的早期發現，從而提高NSCLC的早期診斷率。

本研究結果顯示，NS蛋白的表達與NSCLC的分化程度相關，分化越低的組織，NS蛋白的表達率越高，低分化組織中NS蛋白高表達率明顯高于高、中分化組織。由于腫瘤細胞中NS蛋白的高表達，使得腫瘤細胞在細胞周期G1/S、G2/M兩個重要階段躍遷，腫瘤細胞一直處在細胞周期的循環當中，促進了細胞的有絲分裂，細胞不斷增殖，阻斷細胞的進一步分化，研究發現NS蛋白表達率與腫瘤的分化程度呈負相關［5］。可與推測NS基因對細胞的惡性增殖發揮了重要作用，NS的高表達可作為腫瘤惡性程度的一個新指標。有研究［6］顯示，在乳腺腫瘤組織中，TNM分期提高，NS基因表達量也提高，而我們的研究發現NS的表達與TNM分期無關，這一點還需要進一步研究。我們發現，NSCLC分化低的組織，NS的表達高，提示NS在腫瘤分化過程中起重要作用，很可能與患者的預后有關，關于患者的預后情況我們正在跟蹤調查之中。

［1］劉冉錄，徐勇，張志宏，等.核干因子在前列腺癌中的表達及其臨床意義.中華男科學雜志，2008，5(14):418-422.

［2］misteli T.Going in GTP cycles in the nucleolus.J Cell Biol，2005，168(2):177-178.

［3］H，Pederson T.Depletion of the nucleolar protein nucleostem in causes G1 cellcycle arrest via the p53 pathway.Mol Biol Cell，2007，18(7):2630-2635.

［4］童秀珍，鄒外一，珊珊，等.急性白血病患者骨髓細胞 nucleostemin基因的表達與其類型、療效的關系.中國病理生理雜志，2008，24(11):2171-2174.

［5］李娟，黎友倫，程序.Nucleostemin基因在非小細胞肺癌組織中的表達及意義.中國組織化學與細胞化學雜志，2010，19(3):229-233.

［6］蔡子微，鄭學芝，胡靜.乳腺腫瘤組織nucleostemin基因表達與臨床病理表現的關系.中國病理生理雜志，2007，23(11):2191-2194.