DNA定量分析系統用于非典型鱗狀細胞檢查的評估

李文峰 張慧晶

目前，非典型鱗狀細胞（atypical squamouscells,ASC）是指鱗狀上皮已經增生，并且出現了異型性，包括無明確診斷意義的非典型的鱗狀上皮細胞(ASC—US)和不除外高度病變的非典型鱗狀上皮細胞(ASC—H)[1],其診斷一直沒有一個統一的標準，各實驗室細胞學醫生的診斷標準亦有差別，且主觀性強[2]。導致對ASC的處理意見多樣，根據2001年美國陰道鏡和子宮頸病理學會（the American Society for Colposcopy and Cervical Pathology,ASCCP）制定的處理指南，提出了3種處理意見：（1）直接行陰道鏡檢查。（2）4～6個月復查細胞學。（3）行高危型HPV DNA檢測，陽性者行陰道鏡檢查，陰性者6～12個月復查細胞學。但由于我國宮頸病發病率高，本地區經濟欠佳，隨訪條件受到制約等原因，我們嘗試對ASC的病人進行DNA定量分析系統檢測，取得了較好的效果，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2008年6月～2010年11月湖北省鐘祥市計劃生育服務站檢測出的ASC病例60例，其中意義不明的非典型鱗狀上皮細胞（ASCUS，atypical squamous cells of undetermined significance）52例，非典型鱗狀上皮內病變，不排除高度病變（ASC-H,atypical squamous cells,cannot exclude hig-grade squamous intraepithelial lesion）8例。年齡20～53歲，平均年齡34歲。

1.2 方法

1.2.1 器材 SPICM-DNA型全自動細胞腫瘤篩查分析系統，Feuigen染液等。

1.2.2 液基薄層制片及染色 將裝有固定液和刷頭的標本收集管，加入0.1%DTT消化液放在震蕩器上震蕩2小時，然后將消化后的細胞懸液離心5分鐘（1000轉/分），棄上清液后，加50%酒精分別清洗、離心兩次（1000轉/分，5分鐘/次）。然后將用固定液稀釋的細胞混懸液，放入細胞涂片離心機甩片5分鐘，每例制成1張薄層細胞學片，進行FeulgenDNA染色做DNA定量測定。

1.2.3 細胞DNA定量分析 SPICM-DNA型全自動細胞腫瘤篩查分析系統根據不同細胞成分所具有的不同特征參數來完成自動細胞分類和計數過程，標準對照細胞為同張玻片上的100個正常上皮細胞，所測出的平均光密度（IOD,Intergrated Optical Density）為2C的參考值，其CV（Coefficient of Variation）值小于5%。

根據SPICM-DNA型全自動細胞腫瘤篩查分析系統所做的細胞DNA倍體分析結果及處理方法有如下三種情況：⑴正常2C細胞為主，未見異倍體細胞及異倍體細胞峰，建議一年復查。⑵出現DNA指數（D1）大于2.5細胞及DI在1～2之間的細胞數超過被測細胞總數的10%，建議病理活檢。⑶出現異倍體細胞峰及大量D1大于2.5的細胞，建議病理活檢。

1.2.4 病理診斷 對60例ASC病例均在陰道鏡下對宮頸可疑部位進行組織活檢。病理診斷報告為：正常、宮頸炎、宮頸上皮內瘤變CINI級、CINⅡ級、CINⅢ級或原位癌及浸潤癌。

1.3 統計學方法 以宮頸活檢病理診斷結果為標準，評價DNA定量分析系統篩查ASC中宮頸癌及癌前病變的敏感性、特異性。敏感性（%）=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%，特異性（%）=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%。

2 結果

DNA定量分析系統用于非典型磷狀細胞篩查結果如下：

在52例ASCUS患者中，DNA定量分析系統檢測異常36例，病理組織活檢異常（包括CINI、CINⅡ、CINⅢ或原位癌及浸潤癌）符合34例，DNA定量分析系統檢測假陰性1例，假陽性2例。敏感性為97.1%，特異性為90.0%。

在8例ASC-H患者中，DNA定量分析系統檢測異常6例，病理組織活檢異常（包括CINI級、CINⅡ級、CINⅢ級或原位癌及浸潤癌）符合6例。DNA定量分析系統檢測無漏診，假陽性1例。其敏感性為100%，特異性為66.7%。

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，在女性惡性腫瘤中位居第二位，占癌癥患者總數的15%，嚴重威脅女性的健康，每年有371200個新發病例，約200000例死亡。特別是在經濟水平低下以及缺乏宮頸腫瘤普查手段的發展中國家，宮頸癌發病率更高[3]?，F在降低宮頸癌病死率的最有效手段依然是早發現、早診斷和早治療，故準確地檢測出宮頸癌前病變顯得尤為重要。在宮頸癌前病變中，ASC是一類不能明確診斷為無上皮內病變及惡性改變（negative for intraepithelial lesion or malignancy，NILM）和鱗狀上皮內病變（squamous intraepithelial lesion，SIL）的一類細胞。有研究資料表明，ASC中真正低于CIN的病變僅占40%，半數以上病例為CIN與癌，其中高級別病變與癌在ASC-US和ASC-H中的比例分別達18.68%與33.3%[4]。由于受到感染、變性改變、炎癥刺激、可能存在癌細胞、出現風干現象以及實驗室在染色和制片技術上的差別等原因，ASC的診斷標準一直難以統一；2001年TBS（The Bethesda System，TBS）系統更新，將ASC分為ASCUS和ASCH[5],但細胞學醫生對它并不能作出準確并可重復性的判讀。而對ASC的處理，ASCCP作出了明確的說明，但受到經濟條件、隨訪條件等原因的影響，而DNA定量分析系統能夠解決這些問題，它不需要長時間的隨訪，也不需要對病人再行宮頸部位的各種檢查，且準確性和特異性均較好。

在ASCUS檢查中出現的1例假陰性，系統只掃描出2027個細胞，且炎癥細胞比例占62%，固縮核細胞比例占15%，可供分析的細胞只占23%?？赡苁欠治黾毎麛的窟^少導致儀器沒檢測出。而出現的2例假陽性，其中1例有口服避孕藥史，另1例經檢查，維生素B12低于正常參考范圍，而口服避孕藥、維生素B12缺乏等因素，均可影響細胞DNA異常。在判讀為ASC-H的患者，提示潛在的CINⅡ或CINⅢ，其陽性預測價值較ASC-US更高，但比明確診斷為HSIL預測CINⅡ或更嚴重病變的價值要低[6-7]。此次在ASC-H中出現的1例假陽性為老年女性，宮頸萎縮，可能因該患者年齡偏大（53歲），激素水平紊亂導致核改變有關。

總之，DNA定量分析系統用于ASC的檢測中，不管是敏感性還是特異性均較好。用該方法進行檢測值得嘗試。

此次分析病例數較小，下次將在更大群體和更廣的范圍中進行。但DNA定量分析系統用于ASC患者檢查，可以使ASC的病變更明確；結合本單位實際，對ASC患者的處理，在征得患者理解的前提下，進行DNA定量分析系統檢測，結果異常者，進行宮頸組織活檢；結果正常者1年復查。

[1]劉君芬.TCT結合HR-HPV檢測在宮頸癌篩查中的應用[J].當代醫學,2008,14（11）：55.

[2]馬博文.子宮頸細胞病理學診斷圖譜[M].北京:人民軍醫出版社,2008：90-101.

[3]常玉梅,蔣旭東,鄭娜,等.宮頸癌前病變研究進展[J].河北醫藥,2010,32(9):1136-1138.

[4]張新瑩,郭東輝,張小晶,等.宮頸細胞涂片中的非典型鱗狀細胞與低度鱗狀上皮內病變[J].診斷病理學雜志,2006,13(6):407-409.

[5]Boulanger JC,Sevestre H,ASCUS:an update[J].Gynecol Obstet Fertil,2006,34(1):44-48.

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[7]Sherman ME,Solomon D,Schiffman M (for the ALTS Group).Qualification of ASCUS.A comparison of equivocal LSIL and equivocal HSIL cervical cytology in the ASCUS LSIL Triaye Study[J].Am J Clin Pathol,2001,116(3):386-394.