金標快速法與ELISA法檢測HBV的對比分析

周積滿

(瀘溪縣人民醫院 湖南湘西 416100)

病毒性肝炎在臨床具有較強感染力、發病率較高,對人類健康造成嚴重威脅的傳染性疾病,其中危害最大的是乙型肝炎(HBV),全球HBV表面攜帶者至2002年止,據WHO初步估計有4億以上,其中約有1.3億發生在我國,且母嬰傳播所造成的感染約占30%～50%[1]。在對乙肝預后進行預測、流行病學調查、獻血人員篩查、公共環境衛生、乙型肝炎免疫水平等實驗室檢測中,乙型肝炎表面抗原(HBaAg)、e抗原(HBeAg)、抗心抗體(抗-HBc)、表面抗體(抗-HBs)、e抗體(抗-HBe)等實用項目檢測的方法較為重要。本次研究選擇我院體檢某校新生為對象,分別采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和金標快速法對HBV進行檢測,就臨床結果進行回顧性分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對象4600例,行3～5mL靜脈血采集,將血清分離,初篩應用反向被動血球凝集試驗(RPHA)的方法,將HBsAg陽性的血清對乙肝HBaAg、抗-HBs、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe分別用ELISA和金標法平行進行檢測,隨機分為ELISA法組200例,金標快速法組200例,2組對象在年齡、性別、病性、病程及HBeAg檢測方面比較無統計學差異(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 金標快速檢測法 血清(血漿)與乙肝抗體(抗原)內的相應抗原(抗體)特異性結合以金、銀、硒等為標志物,依據雙抗原(抗體)夾心原理,對該抗體(抗原)在經組織化學的呈色反應之后進行定性檢測。先從冰箱中在試驗前取出測試條,常溫1～2h放置后使用,依次在試驗前將HBV五項指標測試條的一端在盛有血清標本的試管中插入約5s,后取出在白紙上放置,對弱陽性結果等待10～15min行判斷,對強陽性結果在2min內即可觀察,最遲不宜超過20min。結果判定:若有一條紅色線先后在測試條中段出現,則為陽性,若無紅色線出現為測試條失效或試驗失敗。

1.2.2 ELISA法 HBsAg目前國內最常用的免疫測定方法為ELISA試驗,應用多克隆或單克隆抗體,針對HBaAg的α決定簇,為雙抗體夾心模式,可行0.5ng/mL以下的測定。乙型肝炎在早期診斷指標為血清中檢出HBsAg,除急性期外,在發生HBV感染后,大部分人無臨床表現。但HBsAg可在血中檢出,這類人群為HBsAg攜帶者。 HBV感染的標志為血清HBaAg。

1.3 統計學方法

采用SPSS13.0統計學軟件,計數資料行χ2檢驗,P<0.05差異有統計學意義(P<0.05)。

2 結果

ELISA法與金標快速法平行檢測HBV結果,經RPHA法初篩,200份為HBsAg陽性血清,對其分別使用ELISA法與金標快速測試法對乙肝五項進行平行檢測,結果無明顯差異(P>0.05),見表1。HBV五項指標2種方法檢測結果的總符合率分別為98.5%、99.5%、99%、96%、96.5%。以ELISA為常規方法對金標快速測試法進行驗證,則金標法分別為99.5%、100%、98.5%、94.5%、95%敏感性。特異性分別為84.5%、99.5%、96.5%、96%、96%。

表1 HBV采用ELISA與金標快速法檢查結果比較(n)

3 討論

慢性乙型肝炎在我國為高度流行區,在我國人口中,HBsAg陽性者占8.83%,遠遠超出世界水平,HBV變異株近年來有研究出現使患者HBV感染復制狀況更難診斷,常有漏診發生[2]。熒光定量PCR為一項實時檢測技術,操作通過完全閉管式進行,使擴增產物的污染大大減少,并使檢測的特異性提高,擴增產物或通過電腦自動讀數來行精確定量,使檢測的靈敏度提高,避免了普通PCR檢測方法的缺點[3]。因Fprobe的加入,FQ-PCR更加提高了產物熒光定量檢測的特異性,并可得出定量結果,減少了實驗步驟,并使操作進一步簡化,使自動化的程度增加[4～5]。

膠體金標記抗體檢測細菌表面抗原是1997年有學者曾報道的方法[6],在多種病原微生物中成為重要的檢測手須,本次研究采用金標快速法對HBV五項進行檢查,并和ELISA行平行試驗,總符合較高,且2種方法檢測結果無明顯差異性,與ELISA法比較,金標快速法更方便、簡單、準確、快速,在對乙肝病毒五項指標快速測定中較為適用,無需溫育、洗滌、終止等相對復雜的步驟,對儀器設備要求不高,可通過肉眼在15min后讀出結果,可將此方法用于健康查體、大規模流行病學調查中,特別是在各種內窺鏡檢查的術前和健康人群的篩查,故在HBV五項指標快速測定中,金標快速法為較理想的方法,快速、使用簡單、準確性高,值得廣泛推廣應用。

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[4]李敬忠,譚淑珍,呈燕.熒光定量聚合酶鏈反應檢測乙型肝炎病毒DNA[J].中華微生物和免疫學雜志,2001,21(6):690～692.

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