冰凍紅細胞的特點、制備、保存及臨床應用

王 惟

吉林省血液中心，吉林長春 130031

隨著成分輸血的開展，紅細胞的合理利用逐漸受到重視，國外以紅細胞利用率80%作為評價一個國家的醫療技術水平。20世紀60年代末70年代初，建立了冰凍紅細胞技術。在低溫冷凍的條件下，由于紅細胞的代謝活動幾乎停止而處于休眠狀態，使紅細胞能夠長期保存。冷凍速度較慢時，細胞外的水會結冰，加入甘油防凍劑后，細胞內脫水和細胞容積減少。由于甘油滲透壓較高，進入體內容易造成細胞溶血，因此紅細胞復蘇后，需要洗滌去甘油，此時細胞處于高滲狀態，必須用梯度洗滌的方法去除甘油和游離血紅蛋白[1]。經過不斷改進，我國70年代在制備冰凍紅細胞工藝上已日益完善，開創了保存血液的另一種重要途徑。冰凍紅細胞最大的特點是可長達10年的保存期，解決了血液長期貯存、保障供血和對稀有血型輸血（Rh(D)陰性）以及自身輸血創造了條件，爭取了搶救時間，挽救了寶貴的生命，冷凍血是其它制劑所不能替代的制品[2]。為更好的提高冰凍紅細胞血液質量，筆者在紅細胞制備、保存以及解凍洗滌過程中，積累了一些經驗，對不同方法制備出的冰凍紅細胞甘油殘留量、游離血紅蛋白含量等指標進行分析，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與耗材

57%甘油、9%氯化鈉溶液、三珠冷凍袋、無菌四聯袋、羥乙基淀粉溶液、0.9%生理鹽水。

1.2 制備方法

甘油化方法：將紅細胞或全血離心去上清，將紅細胞移至三珠袋中加甘油，動作需輕柔。200mL紅細胞加甘油160mL，控制速度先慢后快，25min左右加完。在室溫靜止30min送-80℃速凍保存。洗脫甘油：用濃度梯度法洗滌，分別用9%NaCl溶液與羥乙基淀粉溶液洗滌，再用0.9%NaCl溶液反復洗滌，成品為懸浮紅細胞供臨床應用。在制備過程中加甘油后不同放置時間和洗脫時不同離心力對產品質量有較大影響，按照這兩項條件不同將制備的產品分A組和B組。

1.3 質量控制標準

上清血紅蛋白不超過1g/L；殘余甘油含量在10g/L；紅細胞回收率＞80%；體外溶血實驗≤50%[3]。

1.4 統法方法

2 結果

2.1 甘油化時紅細胞加甘油后不同放置時間，A組15min，B組30min，檢測甘油殘留量，見表1。

表1 不同放置時間的甘油殘留量（±s）

表1 不同放置時間的甘油殘留量（±s）

注： *兩組相比，P<0.05。

組別例數 甘油殘留量（g/L）A組B組88 7.85±0.65 4.49±0.92

2.2 在洗脫甘油過程中，適當的離心力既能很好地去除甘油，又能減少重離心對紅細胞的破壞，筆者采用不同離心力制備冰凍紅細胞后檢測冰凍紅細胞各項參數，做如下比較，A組2600轉/min,B組3300轉/min,見表 2。

表2 洗脫甘油過程中兩種離心力的對比（±s）

表2 洗脫甘油過程中兩種離心力的對比（±s）

組別上清游離蛋白（g/L）甘油殘留量（g/L）紅細胞回收率（%）溶血率（%）A組B組88例數P 0.39±0.15 0.79±0.006<0.05 4.56±1.73 8.4±0.75<0.05 4.1±2.41 79.1±2.32<0.05 34.3±0.93 44.7±3.82<0.05

3 討論

紅細胞甘油化前，保養液為ACD的血液制劑應2d冰凍，保養液為CPDA-1的血液制劑在6d內冰凍，這是保持冰凍紅細胞活性的基礎。目前，冰凍紅細胞所使用的防凍劑為滲透性甘油，由于甘油滲透壓較高，在加入甘油時一定要先控制速度，先20滴/min，3min后 40滴/min，5min后 60～70滴/min，25min左右加完即可。由慢到快，逐漸提高滴速，并使血液制劑的血袋始終保持震蕩狀態，血袋內有玻璃珠，起攪拌作用。讓甘油緩慢均勻地和紅細胞混合，甘油加完后一定要靜止30min。加甘油前和加完甘油后都要排盡血袋內空氣，如果血袋內氣泡太多形成大的氣泡的過程中，小氣泡需不斷破裂，這樣對紅細胞是一種損害。解凍去甘油過程：①將冰凍的紅細胞制備成解凍去甘油紅細胞關鍵的第一步是在-80℃冰箱取出紅細胞后要迅速浸入37～40℃水浴中，水浴箱的水一定要浸沒血袋，不斷搖動，使血袋與水充分接觸，加速其融化，但不能用力擠壓血袋。減少紅細胞在溶化過程中的機械損傷，溶化好的血袋要在室溫靜止10min，讓紅細胞得到充分休息，增強細胞的抗破壞能力。②甘油化的紅細胞的內環境是高滲的，為防止紅細胞遭到人為破壞，一般采用梯度洗滌法，先用高滲鹽水9%NaCl使甘油從紅細胞內逐漸釋放出來，逐漸降低滲液的濃度，這一洗滌過程重點是高滲鹽水的速度一定要緩慢些，30滴/min逐漸提高滴速。7min加完即可，而且每次加完洗液后一定要平衡5～10min后再離心。③注意選擇適當降離心力，對冰凍紅細胞能達到各種質量標準起到絕對性作用，通過比較我們發現2600轉/min離心的制品各項指標較好。④臨床應用：經過洗滌紅細胞由于去除了絕大部分白細胞、血小板和血漿蛋白，減少了輸血不良反應的發生。對于血液病、陣發性睡眠性血紅蛋白尿、腎功能異常以及心功能不全的患者，輸用更為有利。冷凍血由于去除了細胞代謝產物、抗凝劑及可能的病原體，即使大量輸注也可避免酸中毒、高鉀血癥以及減少傳染病的傳播，能很好滿足臨床特殊需要并且安全有效[4]。

[1] 邱艷.全血成分血質量要求與血液標準化[M].北京：中國標準出版社，2002：72-73.

[2] 王培華.輸血技術學[M].北京：人民衛生出版社，2002：70-73.

[3] 中華人民共和國國家標準.全血及成分血質量要求GB18469-2001.

[4] 安萬新，于衛建.輸血技術學[M].科學技術文獻出版社，2010：167.