嬰兒巨細胞病毒性肝炎患兒肝組織中IL-17的表達及意義

劉 嵐，傅 睿

（1.南昌大學研究生院醫學部2007級；2.江西省兒童醫院a.消化科；b.腎內科，南昌 330006）

人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）屬于皰疹病毒科5型，為雙鏈線狀DNA病毒，是宮內感染中最常見的病原。HCMV能侵害多種臟器如肝臟、肺、神經系統等，其中肝臟是最易受累的臟器之一。肝臟內多種細胞如肝細胞、膽管上皮細胞及血管內皮細胞可被HCMV感染，導致肝細胞病變和壞死、肝細胞凋亡和膽管病變，可引起肝功能損害、膽汁淤積、肝臟腫大、肝纖維化和膽管狹窄或閉鎖[1]。嬰兒時期由于感染HCMV而引起以黃疸、肝臟腫大、肝功能損害為主要臨床表現的疾病稱為嬰兒巨細胞病毒肝炎（infantile cytomegalovirus hepatitis），是我國嬰兒期人群中最常見的肝臟疾病之一。新近發現的細胞因子白介素-17（IL-17）是一種前炎癥因子，具有強大的介導炎癥功能，且有研究發現IL-17在多種肝病的發病及抗病毒免疫中均有表達[2-3]。本文旨在初步探討肝組織中IL-17的表達與嬰兒巨細胞病毒肝炎發病及肝纖維化的關系。

1 材料和方法

1.1 標本來源

病例組：選擇2009—2011年江西省兒童醫院23例行腹腔鏡下膽道沖洗術排外膽道閉鎖的嬰兒巨細胞病毒肝炎患兒的肝組織標本。

對照組：選擇同期10例非肝臟疾病死亡嬰兒的尸檢肝組織標本。

嬰兒巨細胞病毒肝炎患兒的診斷標準均符合中華醫學兒科學分會感染消化學組在湖北宜昌會議修訂的《巨細胞病毒感染診療方案》中的診斷標準[4]，并除外其他病原引起的肝炎（甲、乙、丙肝炎病毒，EB病毒，風疹病毒及弓形體等）。

1.2 試劑

兔抗人IL-17單克隆抗體（武漢博士德生物有限公司）；兩步法檢測試劑盒（PV-9000）、DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）。

1.3 方法

所有肝組織標本都常規經過4%甲醛固定、石蠟包埋后，切4 μm厚標本片備用。MASSON染色確定纖維化分級，免疫組織化學二抗-酶標多聚體二步法（SP法）進行IL-17的免疫組織化學染色。染色結果判斷：顯微鏡下觀察，組織和細胞中出現棕黃色或棕褐色顆粒者視為IL-17染色陽性。依據肝臟組織IL-17顯色范圍來記分:無陽性染色，記0分；見陽性染色組織，范圍占總標本范圍的25%以下記“+”，算 1分；26%～50%記“”，算 2分；51%～75%記“”，算 3 分；75%以上記“”，算 4 分[3]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 13.0統計軟件建立數據庫，分析方法包括2組獨立樣本的秩和檢驗、雙等級變量的Kendall相關分析、1組等級變量與1組連續變量的雙變量Spearman相關分析。P＜0.01表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組肝組織中IL-17的表達情況

病例組肝組織中IL-17表達水平為1.348±0.487，秩均值為30.41；對照組肝組織中IL-17表達水平為0.300±0.483，秩均值為7.90。經秩和檢驗，病例組IL-17水平高于對照組，差異有統計學意義（Z=-4.525，P＜0.01）。

2.2 病例組肝組織IL-17的表達與纖維化的關系

病例組的IL-17水平與纖維化程度呈正相關，Kendall相關系數 r=0.734，差異有統計學意義（P＜0.01）。

3 討論

近年來，在自身免疫病和過敏性疾病中發現一種不同于Th1型和Th2型的細胞亞群，此亞群細胞可產生IL-17、IL-6和TNF-α，發揮重要的免疫調節作用[5]，該型CD4+T細胞被稱為Th17細胞。Th17細胞產生的最重要的效應因子是IL-17。IL-17是一群可溶性細胞因子的統稱，是T細胞誘導的炎癥反應早期啟動因素[6]，近年來，人們發現IL-17參與了多種肝臟炎癥疾病的發病。唐永明等[7]證實在各種慢性肝病的發病過程中血清IL-17水平均有明顯升高，且與患者肝纖維化程度及HA、LN、ⅣC水平相關。邢直直等[8]發現，慢性乙型肝炎患者血清中IL-17水平升高。楊江華等[9]發現細胞因子IL-17參與了丙型肝炎（HCV）的發病過程且與肝臟炎癥活動、肝損害密切相關。但未見有IL-17與巨細胞病毒肝炎發病的臨床研究報道。

本實驗發現病例組肝組織中IL-17呈陽性表達，且主要表達在肝竇區、匯管區及纖維化區；而對照組肝組織中IL-17無表達，其差異有統計學意義。當圍生期嬰兒肝臟被HCSV感染后，由于肝組織的炎性反應，被激活的肝間質細胞會大量表達TGF-β；樹突狀細胞（DC）的Toll樣受體可以和感染的病毒受體結合后DC可大量分泌促炎癥因子IL-6[10]。IL-6可與 TGF-β 共同促進 Th-17細胞的分化[11]，增多的Th-17細胞可以釋放更多的IL-17。IL-17能通過趨化因子IL-8、MCP-1和 Gro-α（growth-relatedprotein-α）介導中性粒細胞及單核細胞趨化到炎癥部位，能誘導人成纖維細胞表達細胞間黏附分子（ICAM-1）[12]，從而介導炎癥反應。 IL-17 可以刺激靶細胞產生 IL-1、IL-2、IL-6、IL-8[13]、一氧化氮合成酶-2（NOS-2）和前列腺素E2等增強炎癥反應。推測IL-17在嬰兒巨細胞病毒肝炎的發病過程中通過多種途徑促進了肝臟持續的炎癥，導致肝細胞凋亡、肝臟損傷。

本實驗發現嬰兒巨細胞病毒肝炎患兒，IL-17主要在肝竇區、匯管區及纖維化區、間質呈陽性表達，陽性部位與纖維化關系密切。現已有實驗發現IL-17與肝纖維化密切相關。R.Y.Lan等[14]在膽汁性肝硬化患者肝組織中發現肝門部有大量Th-17細胞數量增多和IL-17+細胞增多。秦來英等[15]發現在HBV感染患者肝組織內IL-17明顯增高，且隨肝纖維化程度的增高而表達增強。現證實某些細胞因子如 TGF-β、IL-6、IL-1、INF-α 等可促進肝纖維化的發生、發展。體外研究發現IL-17與TGF-β、TNF-α、IL-6、IL-1等細胞因子之間存在著密切的生物學關系：TGF-β和IL-6可誘導Th17的生成，這一過程可以被IL-1和TNF-α增強，增多的Th17細胞可分泌更多的 IL-17[16-17]。 此外 2011年孟繁立等[18]在動物實驗中發現，IL-17在小鼠肝纖維化過程中起到了重要的作用，除了可以直接激活肝星狀細胞（HSC）產生細胞外基質（ECM），也可以間接通過激活巨噬細胞產生的炎癥因子激活HSC。推測IL-17可能參與了巨細胞病毒性肝炎肝纖維化的進程，具體機制還有待于進一步研究。

本研究結果顯示，嬰兒巨細胞病毒肝炎患兒的肝組織中IL-17表達強度高于對照組，并且其表達強度與肝纖維化程度有相關性。提示IL-17在嬰兒巨細胞病毒肝炎發病過程及纖維化的發生、發展中發揮了重要作用。

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