分析前處理對比濁法凝血儀檢測結果的影響

盧美紅，景蓉蓉

（南通大學附屬醫院檢驗科，江蘇南通226001）

分析前處理對比濁法凝血儀檢測結果的影響

盧美紅，景蓉蓉

（南通大學附屬醫院檢驗科，江蘇南通226001）

目的研究不同分析前處理方法對比濁法凝血儀檢測結果的影響。方法將乳糜血20份、健康人血20份，分別用常規法、高速離心法和手工法進行PT、APTT檢測；將溶血標本21份、血量不足標本30份和重新補抽來的51份標本同時進行PT、APTT檢測。結果健康人標本常規法、高速離心法、手工法檢測的PT，APTT結果差異無統計學意義(P＞0.05)。而乳糜血標本常規法檢測PT、APTT結果高，甚至檢測不出，經高速離心處理后結果與手工法比較差異無統計學意義(P＞0.05)；溶血、血量不足等問題標本的PT、APTT結果與重新采血后標本的結果比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），特別是血量不足時APTT明顯延長。結論乳糜血、溶血、血量不足等問題標本大大影響了光電比濁法凝血儀檢測結果的準確性，分析前標本的處理是保證其檢測結果可靠性的一個重要因素。

血漿凝血酶原時間；活化部分凝血活酶時間；分析前處理；乳糜；溶血；血量不足

凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APPT)是臨床實驗室常規檢查項目，它們反映內、外源性凝血因子是否異常，主要用于手術前檢查、血栓病治療和彌散性血管內凝血(DIC)治療抗凝劑使用的監測等。手工測定法為經典方法，但操作程序復雜，效率低，不能適應于大醫院大批量標本的檢測，而且人為主觀因素對測定結果影響較大。我科使用的Sysmex CA7000血液凝固分析儀具有測定成本低速度快、對正常外觀標本的測定準確度和精密度高等優點，得到廣泛使用，是解決大批量標本測定的關鍵手段。其原理為：光電比濁法即當一束光(光源鹵素燈)通過樣品杯，會發生透射和散射，樣品杯中的血漿在凝固過程中，纖維蛋白原逐漸轉變成纖維蛋白，其理學性狀發生改變，導致透射光和散射光強度發生改變，由此判斷凝固終點[1]。由于許多凝血因子是具有生物活性的蛋白質，極易失活，而凝血過程又是一個相當復雜的生理病理過程，其測定影響因素比較多，其中標本的影響是一個重要的因素，如乳糜血、溶血、血量不足、標本未及時送檢等問題大大影響了結果的準確性。在臨床檢測中經常會遇到此類標本，嚴重干擾了臨床醫師及時準確判斷，從而延誤最佳治療時間，可見樣本分析前處理是保證檢測可靠性的一個重要方面。本人對幾種影響因素和處理方法分別進行了探討。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑Sysmex CA7000血液凝固分析儀、TGL-16C臺式普通高速離心機，測定條件室溫20℃～25℃，濕度＜80%，測定時嚴格進行質量控制。試劑、質控品均為Sysmex公司提供。

1.2 標本來源健康血漿對照組：隨機收集我院2010-2011年住院患者非乳糜標本20份，排除心臟、腎臟、肝臟疾病和口服抗凝藥物。乳糜血血漿組：20份乳糜血來自我院2010-2011年住院患者，排除心臟、腎臟、肝臟疾病和口服抗凝藥物。按外觀將標本分為輕中度乳糜、重度乳糜，分別為15份、5份。溶血、血量不足組：收集我院2010年12月至2011年6月住院送檢的嚴重溶血標本21份，血量不足標本30份。

1.3 方法

1.3.1 乳糜血處理的方法將健康血漿對照組、乳糜血血漿組標本分別用常規法、手工法和高速離心法進行檢測。常規法：將健康人血漿組、乳糜血漿組，常規離心3 000 r/min，15 min后立即在Sysmex CA7000血液凝固分析儀上檢測PT、APTT。手工法：常規法剩余的血漿用手工法測定血漿中的PT、APTT重復測定2～3次，取其平均值。高速離心法：所剩余的血漿用高速離心專用塑料管密封后以15 000 r/min離心10 min后，用注射器抽取下層清亮血漿(即去乳糜血漿)在CA7000上檢測PT、APTT值。

1.3.2 溶血、血量不足的處理方法采用Sysmex CA7000血液凝固分析儀檢測PT、APTT值，對51份標本進行再次抽血復檢，將先后兩次結果進行比較。

1.4 統計學處理所有實驗數據均采用SPSS16.0軟件，采用配對t檢驗分析。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 乳糜血的處理結果健康對照血漿組：20份標本經常規離心法、高速離心法、手工法檢測的PT、APTT結果差異無統計學意義(P＞0.05)。乳糜血血漿組：15例輕、中度乳糜血標本常規法與高速離心及手工法差異有統計學意義(P＜0.01)，常規法結果偏高，而高速離心和手工法差異無統計學意義(P＞0.05)，5例高度乳糜標本常規離心均未能檢測出PT、APTT結果，而對高速離心后去脂肪乳糜血漿檢測結果與手工法測定結果比較，PT、APTT差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 對照組與乳糜組三種方法的檢測結果

表1 對照組與乳糜組三種方法的檢測結果

注：“-”表示未測出結果。

2.2 溶血、血量不足的處理結果溶血、血量不足等問題標本的PT、APTT結果與二次采血后標本的結果比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)，特別是血量不足時APTT明顯延長。血液量略低于凝血抗凝管刻度線便有APTT延長的現象，往往易被檢測者忽略，從而誤導臨床診斷用藥，見表2、表3。

表2 問題標本與重新采血標本的PT結果

表2 問題標本與重新采血標本的PT結果

表3 問題標本與重新采血標本的APPT結果

表3 問題標本與重新采血標本的APPT結果

3 討論

脂血標本通常由于餐后以及某些病理狀態下血漿中含有大量的乳糜微粒時產生，因乳糜微粒顆粒較大能使光發生散射，而使血漿外觀混濁。一般情況下應空腹抽血，從而消除高脂對凝血結果的影響。但有的患者采血前食用高脂飲食，出現了乳糜血。另外由于脂肪乳注射液是臨床上常用的營養劑，對于那些對能量需求較高的消耗性疾病患者，如大面積燒傷、外傷急救、外科大手術前后及長期禁食患者，提供足夠的熱量和營養，對于改善患者的氮平衡具有極其重要的意義[2]。但是，患者輸注脂肪乳后抽取的血樣，會使血液標本呈乳糜樣外觀。雖然有些學者提出采用最合適的脂肪乳輸注時間，可避免這些影響，但卻只對常規患者有效。而對于術后或急診、搶救患者的凝血功能檢測，依然困擾臨床及實驗室。為克服乳糜血對檢測結果的影響，本人查閱文件發現已有資料顯示文獻報道去除高脂肪乳糜的方法有標本放置法[1]、高速離心法[3]、過濾法等。放置法需要很長時間，不能及時檢測，延誤診治時機，另有報道凝血標本存放一段時間后對結果有影響，特別是對APTT影響明顯[4]。過濾法、低溫高速離心法對設備要求較高，一般實驗室不易裝備。常溫高速離心機價格低，實驗室容易裝備。

溶血往往是由于針頭過細、抽入氣泡、止血帶壓迫時間過長以及運輸過程不當等原因造成的。溶血會使紅細胞內成分釋放，激活凝血機制，對凝血結果有影響。血量不足是我室臨檢組標本拒收的主要原因，正常情況下血液與抗凝劑(109mmol/L的枸櫞酸鈉)比例應按9：1配比，否則會改變血漿中的鈣離子濃度而影響測定結果[5]。抽取抗凝血時一定要按比例采血，采集血后應立即輕輕混勻，避免血液凝固[6]。嚴重溶血、血量不足等不合格的標本應拒收，通知臨床重新采集后再做檢測。因此檢驗凝血功能最好空腹抽血，如果遇到高脂飲食、術后、急診、搶救患者等生理、病理情況下的乳糜血標本，特別是高度乳糜血標本時，手工法等以光電比濁法為原理的血凝儀檢測結果不可靠，建議使用簡單可行的高速離心。

[1]叢玉隆,王淑娟.今日臨床檢驗學[M].北京：中國科學技術出版社,1997：196-198.

[2]任峰,孟慶忠.脂肪乳劑的臨床應用[J].中國現代藥物應用, 2009,3(8)：132.

[3]陳建蕓,石凌波,任峰.高速離心法消除高血脂對凝血酶原時間測定的影響[J].檢驗醫學,2005,20(4)：401-402.

[4]馮荔,馮忠盈,曹文俊.標本存放時間對凝血指標影響的實驗評估[J].檢驗醫學,2010,25(1)：8-9.

[5]蔡煥榮,潘秀賢.PT、APTT實驗影響因素的探討[J].海南醫學, 2011,2(6)：105-106.

[6]葉秀枝.提高靜脈抽血護理質量體會[J].中國誤診學雜志,2008,2 (5)：1094.

Effect of pre-processing on the results of blood coagulation analyzer through turbidimetric method.

LU Mei-hong,JING Rong-rong.Department of Clinical Laboratory,the Affiliated Hospital of Nantong University,Nantong 226001,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the influence on test results with different pre-processing by applying turbidimetric method on blood coagulation analyzer.MethodsWe detected PT and APTT from 20 chylous blood specimens and 20 blood specimens of healthy individuals by routine method,high speed centrifugation and manual method,respectively.PT and APTT were also measured from 21 hemolytic specimens,30 insufficient blood volume specimens and 51 re-sampling specimens at the same time.ResultsNo statistically significant differences was found between PT and APTT results of the healthy individuals by routine method,high speed centrifugation and manual method(P＞0.05).There was also no statistically significant difference between PT and APTT results of chylous blood specimens by high speed centrifugation and manual method(P＞0.05),but the results of PT and APTT by routine method were higher.Differences in hemolytic specimens and insufficient blood volume specimens before and after re-sampling was statistically significant,and the results of APTT were significantly higher in insufficient blood volume specimens(P＜0.05).ConclusionProblems such as chylemia,haemolysis and insufficient blood significantly influenced the accuracy of blood coagulation analyzer based on turbidimetric method.Pre-processing is an important element which ensures the reliability of test.

Prothrombin time(PT);Activated partial thromboplastin time(APTT);Pre-processing;Chylous; Hemolysis;Insufficient blood

R446.11

B

1003—6350（2012）18—080—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.038

2012-03-01)

盧美紅（1975—），女，江蘇省南通市人，主管技師，學士。