磷脂酶Cε1蛋白在不同部位胃癌細胞中的表達

張 偉，栗 粟，柴軍輝，康海涵，張占東，姬社青，花亞偉

(1.鄭州大學附屬腫瘤醫院普外科 河南鄭州 450008;2.鄭州大學第一附屬醫院普外科 河南鄭州 450052)

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，我國每年胃癌發病率約為60/10萬，死亡率約為30/10萬，位居所有惡性腫瘤死亡第1位，不同部位的胃癌其預后具有差異性，賁門癌預后較胃竇癌差，原因尚不明確［1］。PLCE1是PLC基因編碼的一種正向同源蛋白，由Kelly等利用新桿線蟲PLC210序列克隆出，是磷脂酰肌醇信號通道中的關鍵酶［2］，近來研究表明PLCE1與胃癌、食管癌、結腸癌等腫瘤的發生、發展、轉移相關，本實驗通過對觀察PLCE1在不同部位胃癌組織中的表達，探討PLCE1與胃癌生物學特征的關系，以研究其在胃癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2006年至2008年在鄭州大學附屬腫瘤醫院行胃癌根治術的病人中選取，入選標準:有完整的臨床、檢查及術后病理確診為腺癌，未發現遠處轉移，所用胃癌患者手術前均未行任何化療和放療(術后病理分期按2010年第7版AJCC胃癌TNM分期標準確定)。入選者分組如下:賁門癌60例，胃竇癌60例。30例正常組織隨機取自胃鏡室，經病理結果證實。

1.2 PLCE1檢測 所有標本均為離體后2 h內10%甲醛固定，常規石蠟包埋，切片厚度4 μm，連續切片2張。切片脫蠟后，于高溫pH9.0 EDTA抗原修復液中修復6 min，冷卻至室溫，以體積分數3%H2O2阻斷內源性過氧化物酶，再經一抗、二抗(均按100倍稀釋)作用后，DAB顯色并在光鏡下控色，蘇木精復染后脫水，中性樹膠封片。兔抗人PLCE1抗體購自Abnova公司，Envision試劑盒購自DAKO公司。用 PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判定 PLCE1主要在細胞漿膜表達，顯微鏡下陽性細胞可見胞膜呈棕黃色，少量間質細胞有表達。切片陽性的標準:每例切片高倍鏡下隨機選5個視野，陽性細胞數占同類計數細胞百分比大于等于25%視為陽性。

1.4 統計學處理 本實驗數據分析采用的統計學分析軟件為 SPSS17.0，采用χ2檢驗進行兩兩之間比較，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 不同部位胃癌組織及正常胃粘膜組織中PLCE1的表達 賁門癌組織、胃竇癌組織及正常胃粘膜組織中 PLCE1 表達存在差異(χ2=25.915，P ＜0.001)。賁門癌組織中PLCE1的陽性表達率為73.3%(44/60)，高于胃竇癌組織的 51.7%(31/60)(χ2=6.009，P=0.014)，高于正常胃粘膜組織的 16.7%(5/30)(χ2=25.893，P ＜0.001)。胃竇癌組織表達率高于正常胃粘膜組織的表達 (χ2=7.751，P=0.005)。見表1。

2.2 PLCE1表達與胃癌臨床病理特征的關系 賁門癌與胃竇癌組織PLCE1的表達與淋巴結轉移和原發腫瘤侵潤深度及組織學分級均有關(P＜0.05)，與性別、年齡均無關 (P＞0.05)。見表2。

2.3 分層比較賁門癌與胃竇癌PLCE1表達情況當原發腫瘤未侵及外膜(T1+T2)、無淋巴結轉移或組織學分級為G1和G2時，賁門癌與胃竇癌組織PLCE1表達無顯著性差異，當原發腫瘤侵及外膜(T3+T4)、出現淋巴結轉移或組織學分級為G3和G4時，賁門癌與胃竇癌組織PLCE1表達存在顯著性差異。見表3。

3 討論

臨床上發現賁門癌預后相對較差，根據流行病學資料，在食管癌高發區，賁門癌也屬于高發，在近年來食管癌現場干預的情況下，食管癌的發病率下降，而賁門癌的發病率上升，近端胃癌發病率較遠端胃癌上升［3］。從世界范圍看，賁門腺癌的發病率以20%的速度逐年上升，是增長最快的一種惡性腫瘤［4，5］。發病率的差異，提示賁門腺癌及胃竇部腺癌在發生機制上可能存在差異。

研究表明PLCE1參與Ras蛋白，Rho-家族即GTP酶等信號傳導通路，影響遺傳信息的表達［6-9］。據報道，PLCE1與惡性腫瘤的發生發展有著密切的關系，Bourguignon等［10］針對HNSCC-HSC-3細胞系研究，認為通過不同的途徑激活PLCE1，可通過影響其催化活性，引起細胞內第二信使如蛋白激酶C和鈣離子的釋放及鈣調蛋白激酶Ⅱ上調，影響細胞骨架蛋-絲蛋白的表達，從而促進腫瘤的轉移。Ou L等及 Ling研究［11，12］發現PLCEI基因可通過調控不同的酶如基質金屬蛋白酶(MMP)、bcl-2的表達及影響不同的的信號傳導通路(例如蛋白激酶Cα)，從而影響膀胱癌細胞的侵襲和增殖力;或者通過影響細胞周期相關蛋白而影響正常的細胞周期，參與到膀胱癌的發生、發展。在其他研究中，研究者則發現PLCE1在結腸癌組織中較正常組織低表達，PLCE1 具有抑制腫瘤生長的作用［13，14］。王立東、Abnet及Hu H等［15-17］則運用GWAS技術發現PLCE1基因為食管癌的易感基因，而其在食管癌的發生發展中的相關機制，尚不明確。

表2 PLCE1表達與胃癌臨床病理特征的關系

表3 分層比較賁門癌與胃竇癌PLCE1表達情況

在最近一個關于PLCE1單核苷酸多態性(SNP，rs2274223＞G)與胃腺癌的風險的全基因組關聯研究(GWAS)中，研究人員發現PLCE1 mRNA的表達水平顯著低于癌旁組織［18］。表明PLCE1基因是胃癌的易感基因，因此有必要進一步研究PLCE1基因的功能，探討其在靶基因的轉錄調控和蛋白表達的作用。

本實驗結果表明PLCE1在賁門癌和胃竇癌組織中及正常胃粘膜組織的表達存在差異性，并發現其表達與淋巴結轉移情況、原發腫瘤浸潤深度及分化程度均有關(P＜0.05)。提示PLCE1可能在賁門癌與胃竇癌發生、發展、轉移中作用不同，這也與另外一項提示胃癌與PLCE1關聯性與解剖部位的不同有關的研究結果在某些方面一致［16］。這可能是由于賁門部與胃竇部所處的外環境不同，引起基因的表觀遺傳的不同，也可能是由于賁門部與胃竇部組織學組成不同，周圍其他的組織細胞所起的作用不同所致。分層分析發現賁門癌與胃竇癌組織PLCE1的表達的差異性與腫瘤的T分期、N分期及組織學分化程度有關，但還不清楚PLCE1在腫瘤進展的不同階段的作用。因本實驗病例較少，為回顧性分析，存在一定局限性，PLCE1在賁門癌和胃竇癌過度表達及表達的差異性是否影響腫瘤的發生及預后尚不明確，需搜集資料進一步研究及詳細分析，希望為胃癌患者的早期診斷、個體化治療及預后判斷提供了新的方法和思路。

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