響應面法優化Coriolus versicolor ZZH-2產漆酶培養基

尹將來，劉長根，賈紅華，周 華，韋 萍

（南京工業大學生物與制藥工程學院，江蘇南京210009）

響應面法優化Coriolus versicolor ZZH-2產漆酶培養基

尹將來，劉長根，賈紅華，周 華*，韋 萍

（南京工業大學生物與制藥工程學院，江蘇南京210009）

采用響應面法對Coriolus versicolor ZZH-2產漆酶培養基進行優化，首先用Plackett-Burman（PB）法篩選出3個影響較大的重要因素，分別為酵母膏、羧甲基纖維素鈉和L-天冬氨酸。在此基礎上，用最陡爬坡實驗逼近最大響應區域，并利用中心組合實驗以及響應面分析確定了主要影響因素的最佳條件，即酵母膏13.82g/L、羧甲基纖維素鈉13.29g/L和L-天冬氨酸1.44g/L，在優化培養基后漆酶酶活達到9693U/mL，比優化前提高了1.7倍，其實驗值與理論值基本相符。

漆酶，響應面法，培養基優化

Abstract：In this report，response surface methodology was applied to optimize the fermentation conditions Coriolus versicolor ZZH-2 for Laccase Production.Firstly，Plackett-Burman design was used to select the main factors affecting laccase yield of Coriolus versicolor ZZH-2.The results showed that three factors played important roles in the fermentation conditions，including the concentration of yeast extract，sodium carboxymethyl cellulose（CMC） and L-aspartic acid.The pass of steepest ascent was undertaken to approach the optimal region of the three significant to factors.Then the central composite design and response surface analysis were applied to investigate the mutual interaction between the variables and identify optimal values that bring maximum laccase activity.The activity of laccase increased nearly 1.7 times to 9693U/mL where concentrations of yeast extract，sodium carboxymethyl cellulose（CMC） and L-aspartic acid were at 13.82，13.29 and 1.44g/L.The experimental values agreed with the predicted values.

Key words：laccase；response surface methodology；culture medium optimization

漆酶是一種含銅的多酚氧化酶（p-diphenol oxidase，EC1.10.3.2），與抗壞血酸氧化酶和哺乳動物血漿銅藍蛋白同源，都屬于藍色多銅氧化酶家族[1]。Yoshida[2]最先對漆酶進行了描述，Bertrand[3]確定了它是一種包含金屬的氧化酶。近年來，由于漆酶能對有毒的酚類物質起作用，在木質素降解、微生物菌體形態形成等方面的功能，使之在食品工業、環境保護、造紙工業等領域顯示出巨大的研究價值和應用潛力，其在納米生物技術和土壤生物修復等方面的應用也越來越受到重視[4]，成為國內外綠色環保型酶的研究熱點。漆酶在自然界中分布廣泛，在多種植物、真菌、細菌、昆蟲以及少數高等動物中都有發現。分泌漆酶的真菌主要集中于擔子菌亞門、子囊菌亞門及半知菌亞門等高等真菌，其中最主要的是擔子菌亞門的白腐真菌[5]。……