老年下呼吸道感染患者銅綠假單胞菌臨床檢測與耐藥性分析

牛安琳 (安陽市第三人民醫院檢驗科，河南 安陽 455000)

老年人由于身體器官衰退，免疫功能下降，是醫院感染的高危人群〔1〕。銅綠假單胞菌是醫院內感染最常見的致病菌之一，是一種條件致病菌，可導致人體局部化膿性炎癥和全身性感染，嚴重時危及患者生命〔2〕。該菌對大多數抗生素耐藥，在臨床上治愈較困難，特別是老年患者，多數伴有一種或幾種基礎疾病，下呼吸道感染銅綠假單胞菌后，往往難以治愈。本文主要了解本院老年下呼吸道感染患者銅綠假單胞菌感染狀況及該菌的耐藥性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院2009年6月至2010年12月送檢的老年下呼吸道感染住院患者痰標本112份，分離培養出112株銅綠假單胞菌株。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 容器采用一次性無菌平皿或無菌試管，所有患者取晨痰，采集方法為患者晨起后，先用生理鹽水漱口，然后咳痰至準備好的容器內。氣管切開患者用吸痰器取呼吸道分泌物于無菌試管中，即時送檢。

1.2.2 檢測設備及試劑 DL-96分析儀，試劑為珠海生物鑒定分析系統(法國梅里埃公司);水解酪蛋白(M-H)瓊脂(杭州天和微生物試劑有限公司)，藥敏紙片(北京天壇生物技術開發公司)。

1.2.3 檢測方法 對采集的標本先行涂片，確定為合格后進行接種，對不合格標本進行重新取樣直至合格。痰培養陽性且為優勢菌者進行分純，細菌采用PL-16分析儀鑒定，藥敏試驗采用紙片擴散(K-B)法，對臨床常用抗菌藥物進行體外敏感試驗;質控菌株為銅綠假單胞菌(ATCC 27853);β-內酰胺酶檢測采用協同法。

1.2.4 采用標準 (1)菌株分離培養標準:依據《全國臨床檢驗操作規程》進行常規分離培養和鑒定。(2)耐藥性結果標準:根據美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS，2008年)標準。

2 結果

2.1 銅綠假單胞菌藥敏檢測結果 對112株銅綠假單胞菌進行體外耐藥性檢測，結果顯示銅綠假單胞菌對多種抗生素耐藥，特別是對氨芐西林/舒巴坦、慶大霉素、哌拉西林、妥布霉素、環丙沙星耐藥率均超過40%;對亞胺培南、氨曲南敏感性較好，耐藥率分別為12.5%，16.96%。見表1。

表1 112株銅綠假單胞菌體外耐藥性檢測結果

2.2 β-內酰胺酶陽性菌藥敏檢測結果 本組112株銅綠假單胞菌采用協同法對細菌進行β-內酰胺酶測定，共檢出β-內酰胺酶陽性菌株31株，占27.68%。31株β-內酰胺酶陽性菌株藥敏檢測結果顯示，β-內酰胺酶陽性菌株對哌拉西林、氨芐西林/舒巴坦、慶大霉素、環丙沙星、妥布霉素100%耐藥，對哌拉西林/他唑巴坦、頭孢吡肟、阿米卡星耐藥性高達70%以上，對亞胺培南、氨曲南敏感性較好，耐藥性分別為19.35%與16.13%。見表2。

表2 31株銅綠假單胞菌β-內酰胺酶陽性菌體外耐藥性檢測結果

3 討論

老年患者由于呼吸器官退行性改變，肺組織彈性、支氣管纖毛系統、呼吸道黏液功能差，咳嗽反射及呼吸道功能下降〔3〕，特別是長期住院患者，疾病導致免疫功能降低，而且大多數患者常伴發一種或多種基礎疾病，加之治療期間各種治療手段如呼吸機、各種侵入性操作等，使老年患者更容易發生下呼吸道感染。銅綠假單胞菌是老年下呼吸道感染最常見的條件致病菌，研究表明，銅綠假單胞菌對多種抗菌藥物表現出天然耐藥。隨著抗菌藥物的廣泛使用，該細菌的耐藥性也隨之提高，在天然耐藥基礎上經抗生素誘導產生獲得性耐藥，本組112例患者痰培養出的菌株藥敏性試驗結果顯示，銅綠假單胞菌對大多數抗生素耐藥，特別是對氨芐西林/舒巴坦、慶大霉素、哌拉西林、妥布霉素、環丙沙星耐藥率均超過40%。

銅綠假單胞菌之所以耐藥性強，主要原因是該菌具有內源性耐藥機制與外源性耐藥機制，內源性耐藥機制主要表現在菌株可產生大量頭孢菌素酶(Ampc)、使外膜孔蛋白(OprD)缺失、靶位突變、生物膜形成〔4〕，生物膜形成不僅對細菌形成保護作用，降低抗生素的殺菌效果，更重要的是還能誘導產生外源性耐藥機制。外源性耐藥機制主要表現為銅綠假單胞菌在生物膜的誘導下，發生細胞內酶的變化及β-內酰胺酶的產生，β-內酰胺酶水解后，導致β-酰胺類抗生素被滅活〔5〕，因此，銅綠假單胞菌β-內酰胺酶陽性菌具有超強的耐藥性。本文對112株銅綠假單胞菌進行β-內酰胺酶測定，檢出β-內酰胺酶呈陽性菌31株，占27.68%。藥敏試驗檢測結果顯示，β-內酰胺酶陽性菌的耐藥性大大高于β-內酰胺酶陰性菌，對哌拉西林、氨芐西林/舒巴坦、慶大霉素、環丙沙星、妥布霉素100%耐藥。

對銅綠假單胞菌敏感性排列前五位的依次是亞胺培南、氨曲南、頭孢他啶、阿米卡星、頭孢吡肟;β-內酰胺酶陽性菌株除對氨曲南、亞胺培南、頭孢他啶較敏感外，對其他抗生素耐藥率較高。亞胺培南是碳青霉烯類抗生素，是目前臨床上普遍采用的治療下呼吸道感染的廣譜抗生素，其藥理作用是經過獨特的外膜孔道迅速進入細胞內部殺滅細菌〔6，7〕，特點是廣譜、高效，對β-內酰胺酶具有高度穩定性，是重癥感染患者的首選。氨曲南與大多數β-內酰胺類抗生素不同，它不誘導細菌產生β-內酰胺酶，其藥理作用是通過與敏感需氧革蘭陰性菌細胞膜上青霉素結合蛋白高度親和而抑制細胞壁的合成〔8〕，同時對細菌產生的大多數β-內酰胺酶高度穩定。

綜上所述，銅綠假單胞菌作為一種條件致病菌，分布極為廣泛，一方面寄生在宿主的身體里，一旦人體免疫力下降就會發生感染，而且對住院患者的侵入性操作，各種醫療器械的介入治療及通過醫護人員手等均有機會侵入機體;另一方面抗生素的長期使用造成菌群失調亦是引起感染的重要原因。而且抗生素的大量使用導致銅綠假單胞菌耐藥性逐年上升，銅綠假單胞菌耐藥性上升是造成老年患者下呼吸道感染遷延不愈及病情加重的重要原因。因此，應根據體外藥敏結果制定個體化的合理用藥方案，在治療過程中嚴格執行各種無菌操作規程，強化病室的消毒隔離管理，最大限度地預防醫院感染的發生。

1 邢志廣，廖 衛，楊焦峰.新鄉地區2001年～2006年銅綠假單胞菌對17種臨床常用抗生素的耐藥性變遷〔J〕.中國抗生素雜志，2008;33(4):244-6.

2 李 霞.氣管切開病人銅綠假單胞菌感染及耐藥分析〔J〕.齊魯醫學雜志，2007;22(3):237-8，240.

3 朱 琴，彭少華，李從榮.等.產金屬β-內酰胺酶銅綠假單胞菌的協同試驗方法研究〔J〕.中華醫院感染學雜志，2003;13(10):969-71.

4 方向群，劉又寧.藻酸鹽在銅綠假單胞菌肺部感染中的致病作用及細胞因子的關系〔J〕.中華醫院感染學雜志，2004;14(2):126-9.

5 姚冬梅，陳若虹，鄭 榮，等.老年慢性病患者下呼吸道院內感染病原菌分布及耐藥性監測〔J〕.中南大學學報·醫學版，2004;29(2):224-6.

6 Aktas Z，Poirel L，Salcioglu M，et al.PER-1 and 0XA-10-like beta lactamases in ceftazidime-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates from intensive care unit patients in lstanbul，Turkey〔J〕.Chin Microbiol Infect，2005;11(3):193-8.

7 章澤豹，郭亞春，蔣景華.下呼吸道感染患者銅綠假單胞菌耐藥性分析〔J〕.中華醫院感染學雜志，2008;18(2):270-1.

8 吳明芝.老年患者下呼吸道感染銅綠假單胞菌96例臨床分析與耐藥性調查〔J〕.檢驗醫學與臨床，2009;6(10):755-6.