DNA的滾環擴增技術研究進展

王曉亮，王星宇，梁長城，董 平，梁興國

（中國海洋大學食品科學與工程學院，山東青島266003）

DNA的滾環擴增技術研究進展

王曉亮，王星宇，梁長城，董 平，梁興國*

（中國海洋大學食品科學與工程學院，山東青島266003）

作為一種等溫DNA擴增技術，滾環擴增（Rolling Circle Amplification，RCA），以其簡單和高效的特點得到了廣泛的研究和應用。一般通過與靶序列進行雜交，特異性地生成環狀DNA來達到DNA檢測的目的。RCA已經廣泛應用于免疫檢測、原位檢測、SNP檢測等方面。本文將對RCA的工作原理、技術進展、應用前景以及存在的問題等進行介紹。

核酸檢測，恒溫核酸擴增，滾環擴增，鎖式探針，核酸復制

Abstract：As an isothermal DNA amplification technology，the well-known RCA （rolling circle amplification） has gained wide attention for its simplicity and high efficiency.Generally，forming specifically the circular DNA through hybridizing to the target molecule is the key point to realize specific detection.RCA has been extensively applied to immunoassay，in situ detection，SNP investigation and microarray assay.This review would introduce the principle，technological development，applicable prospect and the present problems of RCA.

Key words：nucleic acid detection；isothermal nucleic acid amplification；RCA；padlock probe；nucleic acid replication

核酸擴增是一項基本的現代生物技術，不僅在生命科學各個領域的科學研究中發揮了重要作用，并且在醫療、農業、環境監測、取證等各個方面都得到了廣泛應用。眾所周知，上世紀八十年代發展起來的PCR（Polymerase chain reaction），作為第一個體外核酸擴增技術，對現代分子生物學的發展起到非常重要的作用，可以說PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑。但是PCR方法仍然有不足之處如：擴增過程中需要對雙鏈DNA進行變性、需要特制的可快速升降溫的PCR儀、因非特異性擴增而產生假陽性或假陰性結果等。因此，近十幾年來發展起來了一些新的核酸擴增技術以取代PCR技術或彌補它的不足。如：環介導等溫擴增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）、滾環擴增（Rolling circle amplification，RCA）、基于核酸序列的擴增（Nucleic acid sequence-based amplification，NASBA）、鏈置換擴增（Strand displacement amplification，SDA）和依賴解旋酶的擴增（Helicase-dependent amplification，HAD）等。這些方法各有所長，綜合利用這些技術將使便攜式核酸檢測裝置等的開發成為可能。……