反相高效液相色譜法測定香砂養(yǎng)胃丸中辛弗林含量

竇金鳳

(江蘇省鎮(zhèn)江市藥品檢驗所，江蘇 鎮(zhèn)江 212003)

香砂養(yǎng)胃丸由木香、砂仁、陳皮、茯苓、枳實等14味中藥組方，收載于 2010年版《中國藥典(一部)》[1]，具有溫中和胃之功效，用于胃陽不足、濕阻氣滯所致的胃痛、痞滿。原標(biāo)準(zhǔn)只規(guī)定測定厚樸的含量，而對方中主藥陳皮卻沒有鑒別，枳實只有薄層鑒別，均沒有含量測定，不能全面控制藥品的質(zhì)量。筆者采用高效液相色譜法對處方中的陳皮[2]、枳實[3]所含辛弗林進(jìn)行了含量測定，進(jìn)一步提高了藥品標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

SK250LH型超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);BP211D型電子天平(賽多利士);Agilent1100型高效液相色譜儀，G1314A型VWD檢測器(美國安捷倫公司)。辛弗林對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號為110727－200306);乙腈為色譜純;水為二次重蒸水;香砂養(yǎng)胃丸(河南宛西制藥有限公司，批號分別為 100801，20100934，070301)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－甲醇－0.1%冰醋酸溶液(每1 000 mL含磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉 1.0 g，15 ∶30 ∶55);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20 μL;檢測波長:224 nm;理論塔板數(shù):7 491。

2.2 溶液制備

精密稱取辛弗林對照品10.15 mg，置 100 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對照品貯備液(每1 mL含辛弗林101.5 μg)。再精密量取對照品貯備液2 mL，置20 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1 mL含辛弗林20.3 μg)。取本品粉末約1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲30 min，冷卻至室溫，用50%甲醇定容，搖勻，過濾，精取續(xù)濾液10 mL，濃縮至1 mL，加于聚酰胺柱(30 ～60 目，2 g，內(nèi)徑 1.5 cm)上，用水 20 mL 洗脫，收集洗脫液至20mL量瓶中，用水至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

空白干擾試驗:按處方比例稱取除陳皮、枳實外的其他幾味藥，按處方制備工藝制備陰性樣品，照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液，依法測定。結(jié)果在主成分出峰處無干擾(圖1)。

線性關(guān)系考察:分別精密量取對照品貯備液 (101.5 μg/mL)1，2，3，4，5 mL 置 20 mL 容量瓶中，定容，搖勻，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、相應(yīng)質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=74.189 X+3.438 8，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，辛弗林質(zhì)量濃度線性范圍為5.08～25.38μg/mL。

精密度試驗:取同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，RSD 為 0.5%(n=5)。

重復(fù)性試驗:取同一批樣品5份，依法測定辛弗林的含量，其平均含量為 0.569 mg/g，RSD 為 0.6%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗:在本試驗條件下，將供試品溶液室溫放置10 h，每隔一段時間進(jìn)樣20 μL記錄峰面積。結(jié)果辛弗林峰面積平均值為 860.2，RSD 分別 0.5%。

加樣回收試驗:取6份已知含量的樣品(批號為100801)約0.5 g，精密稱定，精密加入辛弗林對照品貯備液 (101.5 μg/mL)2.2，2.8，3.4 mL，照樣品含量測定法測定。結(jié)果見表 1。

2.4 樣品含量測定

圖1 高效液相色譜圖

表1 辛弗林加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

取供試品溶液和對照品溶液，各進(jìn)樣20 μL，讀取峰面積值，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號分別為100801，20100934，070301的樣品中辛弗林含量分別為 0.569，0.481，0.401 mg/g。

3 討論

通過試驗得知，辛弗林在224 nm波長處有較大吸收，其他成分在該波長處無干擾，因此可選擇此波長作為檢測波長。

試驗過程中曾嘗試甲醇－水(1 000 mL中加入磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉 1.0 g，冰醋酸 1 mL，50 ∶50)、甲醇 －0.02% 磷酸溶液(65 ∶35)、甲醇 － 水(62 ∶38，內(nèi)含 0.1% 十二烷基磺酸鈉及0.1%磷酸)為流動相，經(jīng)比較得知，選用乙腈－甲醇－0.1%冰醋酸溶液(每1 000 mL含磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉 1.0 g，15 ∶30 ∶55)，比例最佳，峰形及柱效較好。

通過試驗，確定了香砂養(yǎng)胃丸中辛弗林的含量測定方法，測定結(jié)果可靠，方法簡便，為香砂養(yǎng)胃丸的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:876，230 －231.

[2]趙 宇，謝培山，盧平華，等.枳實、枳殼、青皮和陳皮等藥材中辛弗林含量測定研究[J].世界科學(xué)技術(shù)－中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2006，8(4):45.

[3]許 妍，付輝政.RP－HPLC法測定枳實中辛弗林的含量[J].藥品評價，2005，2(6):436 －437.