反相高效液相色譜法測定復方小兒退熱栓中對乙酰氨基酚含量

王 巍 ，余 翔 ，周祥敏

(1.重慶市涪陵食品藥品檢驗所，重慶 408000;2.重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121)

復方小兒退熱栓由南板藍根浸膏粉、對乙酰氨基酚、人工牛黃等成分組成，具有解熱鎮(zhèn)痛、利咽解毒、祛痰定驚的功效，對小兒發(fā)熱、上呼吸道感染、支氣管炎肺熱咳嗽等癥具有較好的療效。該制劑的藥品標準中對乙酰氨基酚的含量測定采用紫外分光光度法[1]。該方法專屬性較差，不能完全排除雜質(zhì)的干擾，具有一定的局限性。筆者參考相關(guān)文獻[2－5]，首次采用反相高效液相色譜法測定復方小兒退熱栓中對乙酰氨基酚的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，包括四元梯度、VWD紫外可見檢測器、Agilent色譜工作站、自動進樣器;Sartorius－ME235S型電子天平(Max 230g;d=0.01 mg);Shimadzu UV－2501PC型紫外可見分光光度計。對乙酰氨基酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為 100018－200408，含量100.0%);復方小兒退熱栓(江西九華藥業(yè)有限公司，批號為20110401，20110504，20110709);甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse XDB C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.05 mol/L醋酸銨溶液－甲醇(90∶10);流速:1.0 mL/min;檢測波長:244 nm;柱溫:30 ℃，進樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取對乙酰氨基酚對照品20.78 mg，置20 mL量瓶中，加0.01 mol/L氫氧化鈉溶液適量，振搖使溶解，用0.01 mol/L氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取本品10粒，精密稱定，切成小片，精密稱取復方小兒退熱栓0.694 80 g(約相當于對乙酰氨基酚0.10 g)，置碘量瓶中，精密加入0.01 mol/L氫氧化鈉溶液100 mL，在60℃水浴加熱20 min，時時振搖，冷卻至室溫，置冰浴中冷卻45 min，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取不含對乙酰氨基酚的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗:取2.2項下3種溶液，按擬訂的色譜條件進行測定。結(jié)果陰性對照品溶液在與對照品溶液色譜峰相應保留時間位置上未出現(xiàn)吸收峰，說明處方中其他成分對測定無干擾。在此條件下，對乙酰氨基酚與其他組分達到基線完全分離，分離度 R大于1.5，理論板數(shù)以對乙酰氨基酚計算大于4 000。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品液 2，4，8，10，12，16，20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值(Y)對對照品進樣量(X)進行處理，回歸方程為 Y=3 870.6 X －34.386，r=0.999 9。結(jié)果表明，對乙酰氨基酚進樣量在 0.207 8 ～ 2.078 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密進樣同一對照品溶液10 μL，連續(xù)測定6次。結(jié)果對乙酰氨基酚峰面積的 RSD為0.18%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:精密取同一批樣品(批號為20110401)，依法制備6份供試品溶液，分別測定。結(jié)果的 RSD為0.27%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，8，12，24 h時進樣10 μL，測定對乙酰氨基酚的峰面積。結(jié)果的 RSD為0.31%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:精密量取2.2項下已知含量的樣品(批號為20110401)續(xù)濾液1 mL，共6份，分別置20 mL量瓶中，分成3組，分別精密加入對乙酰氨基酚對照品溶液(0.103 9 mg/mL)8，10，12 mL，平行2次，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得，分別測定，用外標法計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 對乙酰氨基酚加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按擬訂方法測定，用高效液相色譜法(HPLC法)測定含量，按外標法計算3批樣品中對乙酰氨基酚的含量，同時用紫外分光光度法(UV法)測定其含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(%)

3 討論

根據(jù)對乙酰氨基酚對照品溶液紫外掃描結(jié)果，在190～400 nm波長范圍內(nèi)，對乙酰氨基酚對照品溶液在203 nm和244 nm波長處有吸收峰，但因在203 nm波長處溶劑等因素的干擾較大，故檢測波長選擇244 nm。

紫外分光光度法測定的對乙酰氨基酚含量偏高，有可能是樣品中所含雜質(zhì)有一定的干擾。而高效液相色譜法靈敏度高，專屬性好，有利于含量測定。

曾比較了多種不同的流動相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)選用0.05 mol/L醋酸銨溶液－甲醇(90∶10)使得對乙酰氨基酚色譜峰形對稱尖銳，基線平直，系統(tǒng)穩(wěn)定，出峰保留時間、理論板數(shù)達到理想的效果。試驗結(jié)果表明，本法方法操作簡便，重現(xiàn)性好，樣品回收率高，可用于復方小兒退熱栓的質(zhì)量控制。

[1]WS3－B－2748－97，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第十四冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:236.

[3]曾 嶸，文 為.高效液相色譜法測定復方小兒退熱栓中膽紅素含量[J].醫(yī)藥導報，2006，25(11):1 206 － 1 207.

[4]李國強.HPLC法測定復方通感片中對乙酰氨基酚、咖啡因含量研究[J].中國當代醫(yī)藥，2011，18(24):42 －43，47.

[5]李莉明，彭向東，陽國平，等.HPLC－MS/MS同時測定人血漿中對乙酰氨基酚和咖啡因含量的方法學研究[J].中南藥學，2010，8(6):419－422.