肝細胞癌中T淋巴瘤侵襲轉移誘導基因1對肝細胞癌患者血管生成的作用

洪水翔 賴日勇 鐘瑋平 廖光宏 (贛州市立醫院消化內科，江西 贛州 34000)

肝細胞癌生物學行為與患者預后相關，且新近研究表明肝細胞癌生長過程常依賴血管生成。T淋巴瘤侵襲轉移誘導基因(Tiam)1是一個細胞骨架調節因子，具有多種功能，其與血管生成有關〔1，2〕。本研究關注肝細胞癌中 Tiam1、血管內皮生長因子(VEGF)及CD105表達關系，探討Tiam1對肝細胞癌血管生成的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2004年1月至2007年12月我院行肝癌手術切除后留取的蠟塊組織89例為觀察組，均符合WHO消化系統腫瘤病理學與遺傳學診斷標準，年齡42～76(平均54.5)歲，其中男49例，女40例。手術前均未行放化療。選取同期行肝癌手術后取距腫物＞5 cm的切緣正常肝組織的蠟塊50例為對照組，其中男女各25例，年齡40～75(平均53.7)歲。均經倫理委員會批準，簽署知情同意書。兩組一般臨床特征無明顯差別，有可比性。

1.2 Tiam1、VEGF及 CD105蛋白檢測 Tiam1、VEGF及CD105均購自武漢博士德生物技術有限公司，應用免疫組織化學技術SP法檢測蛋白的表達，嚴格按說明書操作，嚴格質控。

1.3 結果判定標準 Tiam1、VEGF陽性表達為細胞質出現棕黃色顆粒，每張切片觀察10個具有代表性的視野，根據細胞質染色強度和染色細胞百分率進行評分:基本不著色為0分，著色淡1分，著色深2分;著色細胞占計數細胞百分率＜5%為0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。將每張切片著色強度得分和著色細胞百分率得分相乘，為其最后得分。0～1分為陰性(-)，2～3分陽性(+)，4分及以上強陽性(?)。平均血管密度(MVD)判斷方法:確定CD105染色胞叢為一個血管，先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內血管密度最高處。再在高倍鏡下，以與周圍腫瘤細胞和結締組織成分明顯區別的任何一個棕色染色內皮細胞或細胞叢為一個血管，只要結構不相連，其分支結構也作為一個血管計數。記錄5個視野內的微血管數，取其平均數為MVD。

1.4 統計學方法 應用SAS 6.12統計軟件進行χ2檢驗、t檢驗及相關分析。

2 結果

2.1 兩組Tiam1、VEGF和MVD表達比較 觀察組Tiam1〔64例(71.91%)vs 19例(38.00%)，P ＜0.000 1〕、VEGF表達陽性率〔60例(67.42%)vs 17例(34.00%)，P=0.000 1〕和 CD105標記的MVD(36.08±5.69 vs 17.86±6.53，P＜0.000 1)較對照組明顯增高。

2.2 Tiam1、VEGF陽性表達和MVD與肝細胞癌不同臨床病理指標的關系 觀察組Tiam1、VEGF表達陽性率及MVD在不同腫瘤直徑、有無轉移及不同Ki67表達組中差異顯著(P＜0.05)，見表1。

2.3 肝細胞癌中Tiam1、VEGF和MVD表達的關系 經相關分析，Tiam1和 VEGF表達(r=0.46，P=0.019 5)、Tiam1表達和 MVD(r=0.42，P=0.013 6)、VEGF 表達和 MVD(r=0.44，P=0.024 1)均呈正相關。

表1 觀察組Tiam1、VEGF和MVD在不同臨床病理特征中表達

3 討論

肝癌生長和轉移依賴于腫瘤內新生血管形成，而VEGF的發現推動了腫瘤血管生成的研究。肝癌是富于血管的腫瘤，且肝組織在形成腫瘤過程中，可產生更多的VEGF。VEGF有強大的基質血管生成促進作用，并可作為蛋白或基因的橋聯作用，并成為其作用的關鍵因子。VEGF是由2條相對分子量為23 000單鏈組成的蛋白質，能直接作用于血管內皮細胞，引起內皮細胞增殖〔3〕。在研究血管新生的實驗中，血管新生的標記物是研究腫瘤血管生成重要依據，CD105又名Endoglin，是轉化生長因子-β受體復合物成分一，是與增生有關的內皮細胞膜抗原，CD105是現今被人們認為標記血管生成的最好標記物，在血管新生方面明顯優于 CD34、Ⅷ因子等血管標記物〔4，5〕。Tiam1是從鼠的T淋巴瘤中分離出來的一種腫瘤轉移誘導基因，Tiam1是一種親水性胞液蛋白質，富含脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸及蘇氨酸，有多個潛在的磷酸化位點〔6〕。Tiam1通過激活Rac1進而調節細胞骨架結構重組，影響細胞的形體極化過程，促進細胞運動和遷移，誘導腫瘤細胞侵襲轉移和血管生成〔7，8〕。鐘大平等〔9〕認為Tiam1參與了 VEGF家族表達的調節作用，并認為Tiam1可能具有促脈管生成作用。

本研究提示Tiam1、VEGF在肝癌發生發展中可能起明顯促進作用，CD105作為特異性血管標記物，其在肝細胞癌中表達陽性數量明顯高于正常肝組織，提示肝癌中新生血管數量增多，有利于腫瘤生長。Tiam1產物可特異激活與Rac相關的C3肉毒底物，通過Tiam1-Rac信號途徑改變腫瘤細胞形態和功能，調節并誘導腫瘤進展，促進血管生成〔10，11〕。本實驗結果顯示Tiam1、VEGF和MVD均與腫瘤直徑、有無轉移及不同Ki67表達有關，由于轉移及Ki67是與預后相關的重要因素，提示聯合檢測Tiam1、VEGF表達和MVD可能有助于判斷預后。提示Tiam1、VEGF和MVD具有正向協同作用，即Tiam1可能通過誘導VEGF高表達而促進CD105陽性血管生成。此過程中，血管新生使腫瘤能獲得足夠營養物質，促進腫瘤進展。肝細胞癌中Tiam1、VEGF高表達，共同促進 MVD形成，聯合檢測 Tiam1、VEGF及CD105可能對判斷肝細胞癌預后有重要意義。

1 王軼淳，黃玉紅，孫明軍，等.胃癌組織中B-catenin及Tiam-1 mRNA表達的意義〔J〕.世界華人消化雜志，2007;15(20):2268-71.

2 Chen B，Ding Y，Liu F，et al.Tiam1，overexpressed in most malignancies，is a novel tumor biomarker〔J〕.Mol Med Report，2012;5(1):48-53.

3 劉愛東.流式細胞術檢測胃癌中血管內皮生長因子的表達及意義〔J〕.中國中醫藥咨訊，2011;3(5):219.

4 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(7):886-7.

5 王 玥，劉愛東，龐久玲，等.CD(105)在結直腸腺癌組織中的表達及意義〔J〕.山東醫藥，2007;47(20):27.

6 劉 莉，許岸高，王 蔚，等.大腸腫瘤中Tiam1的表達及臨床意義〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2006;22(2):137-9.

7 鐘大平，彭秋平，邊志衡，等.結腸癌組織中Tiam1的表達與淋巴管生成之間的關系〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2007;14(8):604-6.

8 Hsueh C，Lin JD，Yang CF，et al.Prognostic significance of Tiam1 expression in papillary thyroid carcinoma〔J〕.Virchows Arch，2011;459(6):587-93.

9 鐘大平，李 焱，周進明，等.Tiam1基因沉默降低結腸癌細胞VEGFC-D的表達〔J〕.第三軍醫大學學報，2008;30(17):1607-9.

10 Liu H，Shi G，Liu X，et al.Overexpression of Tiam1 predicts poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Oncol Rep，2011;25(3):841-8.

11 Yang W，Lv S，Liu X，et al.Up-regulation of Tiam1 and Rac1 correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma〔J〕.Jpn J Clin Oncol，2010;40(11):1053-9.