肝細(xì)胞癌中T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)基因1對肝細(xì)胞癌患者血管生成的作用

洪水翔 賴日勇 鐘瑋平 廖光宏 (贛州市立醫(yī)院消化內(nèi)科，江西 贛州 34000)

肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為與患者預(yù)后相關(guān)，且新近研究表明肝細(xì)胞癌生長過程常依賴血管生成。T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)基因(Tiam)1是一個細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)因子，具有多種功能，其與血管生成有關(guān)〔1，2〕。本研究關(guān)注肝細(xì)胞癌中 Tiam1、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及CD105表達(dá)關(guān)系，探討Tiam1對肝細(xì)胞癌血管生成的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2004年1月至2007年12月我院行肝癌手術(shù)切除后留取的蠟塊組織89例為觀察組，均符合WHO消化系統(tǒng)腫瘤病理學(xué)與遺傳學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡42～76(平均54.5)歲，其中男49例，女40例。手術(shù)前均未行放化療。選取同期行肝癌手術(shù)后取距腫物＞5 cm的切緣正常肝組織的蠟塊50例為對照組，其中男女各25例，年齡40～75(平均53.7)歲。均經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，簽署知情同意書。兩組一般臨床特征無明顯差別，有可比性。

1.2 Tiam1、VEGF及 CD105蛋白檢測 Tiam1、VEGF及CD105均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法檢測蛋白的表達(dá)，嚴(yán)格按說明書操作，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Tiam1、VEGF陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，每張切片觀察10個具有代表性的視野，根據(jù)細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評分:基本不著色為0分，著色淡1分，著色深2分;著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分率＜5%為0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。將每張切片著色強(qiáng)度得分和著色細(xì)胞百分率得分相乘，為其最后得分。0～1分為陰性(-)，2～3分陽性(+)，4分及以上強(qiáng)陽性(?)。平均血管密度(MVD)判斷方法:確定CD105染色胞叢為一個血管，先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內(nèi)血管密度最高處。再在高倍鏡下，以與周圍腫瘤細(xì)胞和結(jié)締組織成分明顯區(qū)別的任何一個棕色染色內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢為一個血管，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分支結(jié)構(gòu)也作為一個血管計數(shù)。記錄5個視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均數(shù)為MVD。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS 6.12統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)及相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組Tiam1、VEGF和MVD表達(dá)比較 觀察組Tiam1〔64例(71.91%)vs 19例(38.00%)，P ＜0.000 1〕、VEGF表達(dá)陽性率〔60例(67.42%)vs 17例(34.00%)，P=0.000 1〕和 CD105標(biāo)記的MVD(36.08±5.69 vs 17.86±6.53，P＜0.000 1)較對照組明顯增高。

2.2 Tiam1、VEGF陽性表達(dá)和MVD與肝細(xì)胞癌不同臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 觀察組Tiam1、VEGF表達(dá)陽性率及MVD在不同腫瘤直徑、有無轉(zhuǎn)移及不同Ki67表達(dá)組中差異顯著(P＜0.05)，見表1。

2.3 肝細(xì)胞癌中Tiam1、VEGF和MVD表達(dá)的關(guān)系 經(jīng)相關(guān)分析，Tiam1和 VEGF表達(dá)(r=0.46，P=0.019 5)、Tiam1表達(dá)和 MVD(r=0.42，P=0.013 6)、VEGF 表達(dá)和 MVD(r=0.44，P=0.024 1)均呈正相關(guān)。

表1 觀察組Tiam1、VEGF和MVD在不同臨床病理特征中表達(dá)

3 討論

肝癌生長和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤內(nèi)新生血管形成，而VEGF的發(fā)現(xiàn)推動了腫瘤血管生成的研究。肝癌是富于血管的腫瘤，且肝組織在形成腫瘤過程中，可產(chǎn)生更多的VEGF。VEGF有強(qiáng)大的基質(zhì)血管生成促進(jìn)作用，并可作為蛋白或基因的橋聯(lián)作用，并成為其作用的關(guān)鍵因子。VEGF是由2條相對分子量為23 000單鏈組成的蛋白質(zhì)，能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，引起內(nèi)皮細(xì)胞增殖〔3〕。在研究血管新生的實(shí)驗(yàn)中，血管新生的標(biāo)記物是研究腫瘤血管生成重要依據(jù)，CD105又名Endoglin，是轉(zhuǎn)化生長因子-β受體復(fù)合物成分一，是與增生有關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞膜抗原，CD105是現(xiàn)今被人們認(rèn)為標(biāo)記血管生成的最好標(biāo)記物，在血管新生方面明顯優(yōu)于 CD34、Ⅷ因子等血管標(biāo)記物〔4，5〕。Tiam1是從鼠的T淋巴瘤中分離出來的一種腫瘤轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)基因，Tiam1是一種親水性胞液蛋白質(zhì)，富含脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸及蘇氨酸，有多個潛在的磷酸化位點(diǎn)〔6〕。Tiam1通過激活Rac1進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)重組，影響細(xì)胞的形體極化過程，促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動和遷移，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成〔7，8〕。鐘大平等〔9〕認(rèn)為Tiam1參與了 VEGF家族表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，并認(rèn)為Tiam1可能具有促脈管生成作用。

本研究提示Tiam1、VEGF在肝癌發(fā)生發(fā)展中可能起明顯促進(jìn)作用，CD105作為特異性血管標(biāo)記物，其在肝細(xì)胞癌中表達(dá)陽性數(shù)量明顯高于正常肝組織，提示肝癌中新生血管數(shù)量增多，有利于腫瘤生長。Tiam1產(chǎn)物可特異激活與Rac相關(guān)的C3肉毒底物，通過Tiam1-Rac信號途徑改變腫瘤細(xì)胞形態(tài)和功能，調(diào)節(jié)并誘導(dǎo)腫瘤進(jìn)展，促進(jìn)血管生成〔10，11〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Tiam1、VEGF和MVD均與腫瘤直徑、有無轉(zhuǎn)移及不同Ki67表達(dá)有關(guān)，由于轉(zhuǎn)移及Ki67是與預(yù)后相關(guān)的重要因素，提示聯(lián)合檢測Tiam1、VEGF表達(dá)和MVD可能有助于判斷預(yù)后。提示Tiam1、VEGF和MVD具有正向協(xié)同作用，即Tiam1可能通過誘導(dǎo)VEGF高表達(dá)而促進(jìn)CD105陽性血管生成。此過程中，血管新生使腫瘤能獲得足夠營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。肝細(xì)胞癌中Tiam1、VEGF高表達(dá)，共同促進(jìn) MVD形成，聯(lián)合檢測 Tiam1、VEGF及CD105可能對判斷肝細(xì)胞癌預(yù)后有重要意義。

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