原花青素對心肌缺血再灌注大鼠血管內皮細胞活性因子的影響

鄒金發 葉麗平 劉曉光(遼寧醫學院病理生理學教研室，遼寧 錦州 200)

原花青素對心肌缺血再灌注大鼠血管內皮細胞活性因子的影響

鄒金發 葉麗平 劉曉光1(遼寧醫學院病理生理學教研室，遼寧 錦州 121001)

目的 探討原花青素(PC)對心肌缺血再灌注大鼠血管內皮細胞活性因子的影響。方法 將60只大鼠隨機分成兩組，對照組30只，于結扎前30 min腹腔注射0.9%氯化鈉溶液。觀察組30只，于結扎前30 min腹腔注射劑量為120 mg/kg的PC。分析兩組再灌注后血清一氧化氮(NO)、內皮素(ET)-1含量及組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性變化情況。結果 PC處理觀察組血清NO濃度升高，心肌SOD活性回升，MDA、ET-1含量顯著降低 (P＜0.05);觀察組大鼠的心肌梗死范圍(19.1±2.8)%，顯著低于對照組的(57.4±4.9)%(P＜0.05)。結論 PC對于大鼠血流再灌注損傷的預防具有重要作用。

PC;心肌缺血;再灌注;活性因子

原花青素(PC)由數量不等的兒茶素、表兒茶素構成。本研究為進一步分析PC對大鼠心肌缺血再灌注損傷模型氧化損傷的保護效果〔1〕，實驗前對心肌缺血再灌注損傷模型大鼠給予PC腹腔注射，之后觀察大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、內皮素1(ET-1)及心肌梗死面積等指標，為PC新藥開發提供指導。

1 材料與方法

1.1 材料 PC(純度大于95%，青海康普生物科技股份有限公司)。SD大鼠60只，體重(252±30.7)g(221.5～279.8 g)，雌雄各半，購自遼寧醫學院動物實驗中心。每4只合籠，自由飲水及攝食，溫度20% ～26%，相對濕度控制在(65±5)%。

NO試劑盒(批號:20110101)、SOD試劑盒(批號:20110203)、MDA試劑盒(批號:20110213)均購于上海研吉生物科技有限公司。ET-1試劑盒(批號:20110313)購于上海易利生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 缺血再灌注模型建立 0.3%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)大鼠腹腔注射麻醉，固定牢固后行氣管切開，人工機械通氣(65～70次/min)。打開大鼠胸腔，暴露心包膜、心臟，經左冠狀動脈下淺層穿一絲線，結扎冠狀動脈左前降支，建立心肌缺血模型。結扎后40 min，用眼科剪將管壁、絲線剪開，恢復缺血心肌灌注，再灌注2 h后取實驗大鼠心臟。采用RM-6240BD多道生理信號系統(上海華巖儀器設備有限公司專業生產)記錄標準肢體Ⅱ導心電圖。以大鼠心電圖Ⅱ導聯出現ST段降低或抬高為標準判斷建模成功。

1.2.2 分組 大鼠隨機分成兩組，每組30只。對照組:于結扎前30 min腹腔注射0.9%氯化鈉溶液。觀察組:于結扎前30 min腹腔注射劑量為100 mg/kg的PC。

1.2.3 指標測定 再灌注后從大鼠腹主動脈采血5 ml，4℃，3 000 r/min離心5 min，收集上層血清測量 NO及ET-1含量。取血后，立即處死大鼠，取出心臟，留左心室，加入9倍比例的生理鹽水，將組織搗碎，離心，取上清液測量心肌SOD、MDA活力。硝酸還原酶法檢測NO水平;黃嘌呤氧化酶法檢測SOD活力。根據試劑盒說明進行操作。

1.3 統計學方法 應用SPSS18.0軟件進行分析，數據資料以±s表示;計量資料用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組各指標比較 與對照組比較，觀察組血清NO濃度升高，心肌SOD活性回升，MDA、ET-1活性顯著降低，差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組大鼠血清NO，EF-1水平及心肌MDA、SOD活性比較(±s，n=30)

表1 兩組大鼠血清NO，EF-1水平及心肌MDA、SOD活性比較(±s，n=30)

與對照組比較:1)P＜0.05

組別MDA(nmol/ml)NO(mmol/L)ET-1(pg/ml)SOD(μmol/L)對照組5.74 ±0.35 31.8±11.0 313.6±46.7 96.6±7.5觀察組 3.86 ±0.481)42.6±4.41)170.6±21.21)171.6±10.61)

2.2 PC對大鼠心肌梗死程度的影響 觀察組大鼠的心肌梗死范圍(19.1±2.8)%，顯著低于對照組的(57.4±4.9)%，差異具有統計學意義(P＜0.05)。

3 討論

PC是廣泛存在于植物中的一類多酚化合物，酸性條件下加熱能夠分解為花青素〔2〕。經過近半個世紀的研究結果顯示，PC具有高效的抗氧化活性，能夠防治心血管系統疾病，防癌抗癌，抗高血糖，增強免疫力，改善人體微循環。近年來的研究表明缺血再灌注損傷與氧自由基(OFR)、羥自由基(HFR)形成等關系密切〔3〕。心肌缺血再灌注后，心肌組織及細胞無法立刻適應快速恢復的血流灌注攜帶的高濃度氧，在細胞內部表現為線粒體不能完全消化這些“過剩”游離氧，導致生產大量OFR，OFR又對細胞膜上不飽和脂肪酸進行攻擊，導致細胞膜脂質過氧化損傷，從而生產大量MDA〔4〕。因此，MDA濃度也間接體現了組織細胞受到自由基攻擊的嚴重度。SOD是重要的抗氧化酶，OFR也破壞SOD防御酶系統，造成SOD被大量消耗，SOD活性降低。SOD活力高低也一定程度上反映了機體清除OFR的能力〔5〕。防治缺血再灌注損傷應重點清除OFR，增強OFR清除酶活性。本組研究結果發現，缺血再灌注大鼠心肌組織SOD活性明顯下降，而給予PC處理的觀察組大鼠心肌SOD活性明顯回升。表明PC可明顯增強缺血再灌注損傷大鼠的心肌細胞SOD活性，減少過氧化脂質代謝產物MDA的生成，抑制脂質過氧化，從而降低心肌損傷〔6〕。而給予不同劑量的PC可不同程度地提高SOD活性。

NO是血管內皮細胞合成的一種舒血管因子〔7〕。穩定的NO釋放對維持心血管系統適度舒張度，維持心肌血流灌注具有重要意義。本組觀察顯示，PC可明顯增強心肌缺血再灌注大鼠血清NO濃度，提示PC的抗心肌缺血再灌注損傷作用還與其可避免血清NO減少相關。本組研究還發現，大鼠心肌缺血再灌注后血清ET-1濃度升高，這可能是由于心肌缺血再灌注過程中，體循環腎素-血管緊張素(RAS)系統被激活，ET-1生成增多，引起冠狀動脈收縮，使血流量降低，心肌細胞氧、能量供應減少，從而使心肌缺血再灌注損傷加重。本組應用PC處理后，血清ET-1濃度顯著降低，促進了冠脈血流量恢復，有效防止了心肌組織免受再灌注損傷。

本實驗還觀察到，PC處理組再灌注損傷大鼠的心肌梗死范圍顯著低于對照組。因此，PC能夠有效改善心肌缺血再灌注大鼠血管內皮細胞活性因子水平，對于血流再灌注損傷的預防治療具有重要作用。

1 張國霞，武 艷，韓冬梅，等.原花青素對大鼠心肌缺血-再灌注損傷的保護作用〔J〕.中國生化藥物雜志，2010;31(3):170-2.

2 劉湘紅，郭松超，李艷飛，等.葡萄籽原花青素對2型糖尿病大鼠血清中SOD、GSH、MDA及 NO表達的影響〔J〕.中國藥物與臨床，2008;8(3):193-5.

3 齊志敏，王 倩，張 瑩.大鼠心肌缺血再灌注損傷實驗模型研究〔J〕.中國臨床康復，2004;8(30):6620-1.

4 Oriyanhan W，Yamazaki K，Miwa S，et al.Taurine prevents myocardial ischemia/reperfusion-induced oxidative stress and apoptosis in prolonged hypothermic rat heart preservation〔J〕.Heart Vessels，2005;20(6):278-85.

5 李 澎，王建農，盧樹杰，等.山楂葉原花青素對乳鼠心肌細胞缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.中國中藥雜志，2009;34(1):96-9.

6 Maier T，Fromm M，Schieber A，et al.Process and storage stability of anthocyanins and non-anthocyanin phenolics in pectin and gelatin gels enriched with grape pomace extracts〔J〕.Eur Food Res Technol，2009;229(6):949-60.

7 顧迎春，于曉玲，郭維軍.川芎嗪后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.國際心血管病雜志，2009;36(5):304-7.

〔2012-01-10收稿 2012-01-20修回〕

(編輯 袁左鳴)

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A

1005-9202(2012)17-3728-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.17.052

1 錦州95905部隊衛生隊

鄒金發(1977-)，男，碩士，講師，主要從事消化及心血管病理生理學研究。