TAFI基因啟動子區－2345 2G／1G多態性與腦梗死的關系

陳煜森 曾志良 林智君 冼文川 鐘望濤 趙 斌 許志恩

1）廣東醫學院附屬醫院神經內科 湛江 524001 2）廣東東莞市太平人民醫院 東莞 523900

腦梗死是最常見的腦卒中類型，其發病機制復雜，孿生子女、家族研究表明腦梗死是一種復雜的多因子疾病，有明顯的家族遺傳傾向，其發病與多種基因和環境因素相關［1－2］。腦梗死的亞型不同，遺傳學對其發病影響的程度不同，動脈粥樣硬化性腦梗死的遺傳組成部分要強于心源性卒中，提示側重于動脈粥樣硬化性腦梗死的遺傳學研究可能會更有效［3－4］。凝血酶激活的纖溶抑制物（TAFI）在凝血和纖溶系統中起著重要作用，從而參與動脈血栓形成［5－7］，因此，TAFI基因可能是腦梗死發病相關的候選基因。最近有研究表明，TAFI基因編碼區多態性與腦梗死發病相關［8］，而其啟動子區多態性對TAFI抗原表達具有調控作用，我們推測TAFI基因啟動區多態性亦可能與腦梗死的發病相關。為證實這個推測，我們研究中國漢族人群凝血酶激活的纖溶抑制物基因啟動子區－2345 2G／1G與動脈粥樣硬化性腦梗死發病的關系?，F將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1研究對象病例組225例，男145例，女80例；年齡38～80歲，平均（67.60±10.61）歲，均為2006－08－2007－11我院神經內科住院的腦梗死病人，病程1周內，均為漢族人，所有病例均經臨床及CT和（或）MRI確診（依照第4屆全國腦血管病學術會議診斷標準）。排除心臟源性栓塞、動脈炎、血液病等其他原因引起的腦梗死。

對照組184例，男107例，女77例，平均年齡（66.11±11.02）歲，為我院健康體檢者，均為漢族人，無腦卒中史，并經臨床檢查和（或）影像學檢查排除腦卒中。排除感染、發熱及炎癥性疾病、肝腎功能不全、血液病、自身免疫性疾病等。詳細記錄入選者的腦血管病危險因素，包括高血壓、糖尿病、吸煙、血脂等。所有標本的收集均經本人或家屬同意。

1.2基因組全血DNA提取用QIAGEN酶法提取全血DNA。

1.3等位基因特導性聚合酶鏈反應分析（AS－PCR）TAFI－2345 2G／1G多態性，引物設計參考 Mireille Henry［9］，引物序列見表1。

表1 擴增TAFI－2345 2G／1G多態性位點的引物序列

1.4統計學方法采用SPSS 11.5統計分析軟件和遺傳學數理統計方法進行統計分析，采用基因計數計算各組基因型頻率和等位基因頻率，Hardy－Weinburg平衡吻合度和基因頻率、基因型統計分析采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。檢驗水準α＝0.05。

2 結果

2.1 TAFI－2345 2G／1G位點的電泳圖TAFI－2345 2G／1G的AS－PCR結果：所有標本中均產生內參404bp，1G／1G基因型：同一標本中如含上游引物a1的PCR產物中有293bp產物，而含上游引物a2的PCR產物中沒有；2G／2G基因型：同一標本中如含上游引物a1的PCR產物中沒有293bp產物，而含上游引物a2的PCR產物中存在；2G／1G基因型：同一標本中如含上游引物a1的PCR產物中存在293bp產物，而含上游引物a2的PCR產物中亦存在，見圖1（1、2為同一標本B1，3、4為同一標本B2，5、6為同一標本B3，7、8為同一標本B4）。為驗證AS－PCR方法的可靠性，選取B3和B4標本送上海生工進行測序，結果見圖2和圖3，測序結果與ASPCR結果吻合。

圖1 TAFI－2345 2G／1G位點 AS－PCR電泳圖

圖2 B4標本測序分型結果為2G／2G基因型

圖3 B3標本測序分型結果為2G／1G基因型

2.2 Hardy－Weinburg平衡檢驗病例組與對照組人群的TAFI－2345 2G／1G基因型分布經χ2檢驗均符合 Hardy－Weinburg平衡，TAFI－2345 2G／1G態性位點的基因型分布在所研究的人群中已達到遺傳平衡。見表2。

2.3 TAFI－2345 2G／1G基因型及等位基因頻率分析見表3，TAFI－2345 2G／1G 在 病 例 組 的 1G 等 位 基 因 頻 率 為42.9%，對照組為50.8%，2組間差異有統計學意義（P＝0.024）；病例組 1G／1G 基因型頻率為 15.1%，對 照 組為24.5%，2組間差異有統計學意義（P＝0.017）。

2.4多元Logistic回歸分析以腦梗死為因變量，腦梗死危險因素為自變量進行Logistic回歸分析，見表4。TAFI－2345 1G／1G基因型與腦梗死的發病獨立相關（OR0.445，95%CI0.252～0.822，P＝0.009），是腦梗死的獨立發病因素。

表2 基因型分布的Hardy－Weinburg平衡吻合度檢驗

表3 TAFI－2345 2G／1G、基因型及等位基因頻率分布

表4 本研究人群中多元Logistic回歸分析結果

3 討論

凝血酶激活的纖溶抑制物（TAFI）基因又稱CPB2基因，位于染色體13q 14.11，含有11個外顯子，其編碼的蛋白質是一種酶原，激活后能減弱纖維蛋白溶解，在血液凝固和纖維蛋白溶解的平衡中發揮紐帶作用。普通人群中血漿TAFI抗原水平的個體差異很大，可達10倍之多，可能受遺傳控制［9－10］。血漿TAFI水平的變異可能與腦血管病有關，有研究表明血漿TAFI水平升高能顯著增加急性腦梗死發生的危險性，提示TAFI也許可作為急性腦梗死發生的危險性預測因子［11］。Boffa等［12］學者在人類肝癌細胞的研究中發現TAFI基因啟動子區－53至－40的區域有一個假設的C／EBP結合點，這個位點消除C／EBP結合點的突變使TAFI啟動子活性降低80%。TAFI基因啟動子區多態性與TAFI抗原水平密切相關，－438A／G可以解釋41%的遺傳可能性［9］。Franco等［13］研究認為－438A／G多態性位點非?？拷D錄因子結合的位置，位于VBP轉錄因子結合位置的下游區1bp，其多態性可能會通過影響特異轉錄因子的結合或者改變染色質在TAFI基因座位上的結構，從而改變啟動子的轉錄活性，影響抗原水平［14］。因此TAFI基因啟動子區多態性可能與腦梗死的發病相關，Ladenvall等［15］分析了TAFI基因不同功能區共11個SNP，在單位點分析中沒有發現SNP與缺血性腦血管病有關聯，其中啟動子區僅選擇－438A／G進行分析，目前為止未見啟動子區其他位點多態性與腦梗死相關報道，本研究旨在探討TAFI基因啟動子區－2345 2G／1G多態性與急性動脈粥樣硬化性腦梗死的關系。

Henry等［9］研究顯示 TAFI－2345 2G／1G多態性可以解釋20%的遺傳可能性。Frère等［11］的研究提示在非洲人群中TAFI－2345 2G／1G與TAFI水平相關。本研究發現，病例組TAFI－2345 1G／1G基因型2組間比較差異有統計學意義，經多元Logistic回歸分析，差異仍有統計學意義，提示1G／1G基因型對腦梗死有保護作用，是腦梗死的獨立遺傳因素。病例組1G等位基因頻率低于對照組，而2G等位基因的頻率則高于對照組，提示2G等位基因是腦梗死的危險因素，而1G等位基因則有保護作用。由此可見，對于中國漢族人，TAFI－2345 2G／1G多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死相關聯。目前未見有關TAFI－2345 2G／1G多態性與腦梗死的報道，二者的關系還有待深入研究與明確。

本研究是國內外首次對中國人群中TAFI基因啟動子區單核苷酸多態性與急性腦梗死關系進行研究，需大規模多中心研究進一步證實，如同時將測定活化的TAFI抗原水平、多個多態性位點與動脈粥樣硬化性腦梗死結合起來一同研究分析，更能反映相互關系。

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