環氧合酶-2表達水平和前列腺癌進展相關關系的研究

楊子紅 石會剛

[摘要] 目的 檢測環氧合酶-2在前列腺癌中的表達，并探討其與前列腺癌臨床病理因素及預后的關系。 方法 采用免疫組織化學SP法，檢測120例前列腺癌及20例前列腺增生組織（對照組）中環氧合酶-2的表達，分析檢測指標與前列腺癌發病情況的相關性。 結果 前列腺癌組織中環氧合酶-2表達陽性率明顯高于對照組。 結論 環氧合酶-2具有促進腫瘤細胞轉化、增殖、遷移的作用，對于環氧合酶-2的檢測有助于前列腺癌患者的預后評估。

[關鍵詞] 環氧合酶-2；前列腺癌

[中圖分類號] R737.25???[文獻標識碼] A???[文章編號] 2095-0616（2012）15-33-02

Research on the relations between expression level of COX-2 andprognosis of prostatic carcinoma

YANG?Zihong1，2??SHI?Huigang2

1.Basic Medical College of Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510080,China;2.Guangzhou Guiyi Biotech Co.，LTD.,Guangzhou 510600,China

[Abstract] Objective To detect the expression of COX-2 in prostatic carcinoma and in normal hyperplasia of prostate,and to discuss the relations between its expression level and the prognosis of prostatic carcinoma. Methods By using immunochemistry staining,we detected 120 samples of prostatic carcinoma and 20 samples of normal hyperplasia of prostate. Results In the prostatic carcinoma,the expression of COX-2 was significantly higher than the one's in hyperplasia prostate group. Conclusion COX-2 may induce cancer cell translocation,proliferation,and invasion. Detecting COX-2 level was helpful for diagnosis of prostatic carcinoma.

[Key words] COX-2;Prostatic cancinoma

前列腺癌（prostatic carcinoma）是男性生殖系最常見的惡性腫瘤，發病隨年齡而增長，其發病率有明顯的地區差異，歐美地區較高。據報道其僅次于肺癌，在男性是癌癥死亡的第2位[1]。我國目前前列腺癌患者人數在逐年增加。環氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）基因在絕大多數組織細胞中不表達，只有在細胞受到刺激時才誘導性表達，參與各種病理生理過程，包括炎癥過程及腫瘤發生、發展[2-4]。

Shirakawa等[5]報道，COX-2在人類許多良性癌前病變和惡性腫瘤中均有高表達，提示COX-2可能參與了惡性腫瘤的發生、發展。本研究通過病理切片染色的方法，探討COX-2在前列腺癌中的表達情況。

1?材料與方法

1.1?一般材料

選取前列腺癌石蠟包埋標本75例（2004年5月～2010年9月于筆者所在醫院行手術切除），年齡50～75歲，中位年齡63歲。術后均經病理證實。臨床分期依VICC-TNM標準，A期30例、B期20例、C期15例、D期10例。同時收集醫院2009年開放手術切除良性前列腺增生標本20例作為對照，年齡56～75歲，中位年齡68歲。所有標本用10%甲醛固定，常規石蠟包埋，每個標本制成4 μm厚連續切片3張。COX-2鼠抗人單克隆抗體（北京中杉生物技術有限公司）；即用型SP免疫組化試劑盒、DAB底物試劑盒均購自福州邁新公司。

1.2?實驗方法

石蠟包埋組織后4?m連續切片，采用免疫組化SP法染色，步驟如下：68℃烤片20 min，常規二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；3% H₂O₂ 37℃孵育10 min滅活內源性過氧化物酶，PBS沖洗3次，每次5 min；抗原修復：置0.01M枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）中煮沸（95℃，15～20 min），自然冷卻20 min以上，PBS沖洗3次，每次5 min；正常羊血清工作液封閉，37℃ 10 min；滴加一抗4℃冰箱孵育過夜，PBS沖洗3次，每次5 min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）；滴加生物素標記二抗，37℃孵育30 min，PBS沖洗3次，每次5 min ；滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min PBS沖洗3次，每次5 min；DAB/H₂O₂反應染色，蘇木素復染，常規脫水，透明，干燥，封片。

1.3?結果判斷

COX-2陽性表達定位于細胞漿及核膜出現棕黃色顆粒，每例分別由兩人獨立閱片，然后核對所得結果。每片隨機觀察5個視野，計數1 000個細胞中染色陽性細胞數，按陽性細胞數占腫瘤細胞的比例進行分級：0級為無棕黃色染色或染色陽性腫瘤細胞數≤10%，也就是陰性；陽性細胞數11%～25%為1級，相當于弱陽性；陽性細胞數26%～50%為2級，相當于中等陽性；陽性細胞數＞50%為3級，相當于強陽性。

1.4?統計學方法

前列腺癌與良性前列腺增生之間的比較用Mann-Whitney檢驗。使用Spearman等級相關分析臨床病理資料與免疫組化的結果及COX-2之間的相關性。應用SPSS11.5統計分析軟件，P＜0.05為差異有統計學意義。

2?結果

COX-2蛋白在前列腺癌和良性前列腺增生組織中的表達。COX-2蛋白在前列腺癌癌細胞胞核部位染色陽性，低分化或轉移灶的癌細胞常出現COX-2蛋白染色強陽性，而在良性前列腺增生組織中的基底細胞和腔面腺細胞偶爾可見胞核COX-2陽性（圖1）。在前列腺癌中的COX-2蛋白染色陽性率顯著高于良性前列腺增生（P＜0.05）。

3?討論

我國前列腺癌的臨床發病率雖然低于歐美國家，但近年來其發病率呈迅速上升趨勢。隨著檢查技術手段的增加和改進，以及對病理診斷標準認識的提高，前列腺癌的檢出率也有所提高。現在，前列腺癌的診斷和鑒別已成為我國一個重要的研究課題[6-7]。

通過免疫組化檢測發現，COX-2蛋白在前列腺癌細胞中表達顯著，而在良性前列腺增生組織中表達很低，這說明COX-2蛋白在前列腺癌中應該具有重要意義。Oshima M等[8]證實在腫瘤形成過程中，COX-2可能通過影響癌基因或抑癌基因的表達而起到直接或間接的作用。現有資料表明，COX-2過度表達與腫瘤新生血管形成密切相關，而COX-2選擇性抑制劑可阻斷其在血管生成中的作用。進一步研究發現，COX-2可能會誘導以血管內皮生長因子（VEGF）為代表的促血管生成因子的表達，同時抑制血管內皮細胞的凋亡而促進腫瘤血管形成[9-12]。筆者的檢測結果與上述結論相符。

Tsujii等[13-15]的研究證實COX-2可能通過各種機制上調基質金屬蛋白酶2（MMP2）、VEGF等的表達，促進腫瘤細胞的侵潤及轉移。本研究發現，和前列腺正常增生的組織相比，COX-2在前列腺癌組織中的表達明顯增加，這同樣提示COX-2可能通過作用于一些下游作用分子的信號調控而促進前列腺癌向侵襲性方向發展， 這對于預測前列腺癌進展、轉移，特別是術前治療方案的確定有著重要的實際意義。進一步研究COX-2在前列腺癌轉移中作用及其機制可使其成為預防和治療前列腺癌靶標，防止腫瘤向激素非依賴型前列腺癌轉移。

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（收稿日期：2012-04-19）