基質金屬蛋白酶－2在結腸腺癌組織中的表達

周競奇，李維山

(1.濟源市人民醫院，河南濟源454650;2.漯河醫學高等專科學校，河南 漯河462000)

結腸癌是人類常見的惡性腫瘤之一，近年來其發病率有上升的趨勢，患者的預后與結腸癌細胞的浸潤轉移有密切關系。基質金屬蛋白酶－2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)的過度表達與惡性腫瘤的轉移密切相關［1］。本實驗利用組織芯片技術，在一張玻片上一次性完成本研究所采集的組織標本的免疫組織化學標記，檢測59例結腸腺癌組織中MMP-2的表達，探討其在結腸腺癌組織中的表達情況及與臨床病理參數之間的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選自濟源市人民醫院和濟源市第二人民醫院病理科2006年至2010年存檔材料。59例結腸腺癌患者均經復查和病理確診。患者年齡35～65歲，平均年齡45歲。其中高分化16例，中分化25例，低分化18例;并選取正常結腸組織10例作為對照。標本經體積分數10%中性甲醛固定，石蠟包埋。

1.2 主要試劑 單克隆抗體MMP-2購自福州邁新公司，S-P二步法試劑盒和DAB顯色劑購自北京中杉生物公司。

1.3 組織芯片的手工制作 用手電鉆在空白蠟塊上構建10×9個點陣，間距2 mm。用空心針(內徑1.8 mm)把目標組織穿刺取下圓柱狀標本，分別種植到對應的點陣中，在38℃恒溫箱中烘烤2 h，與空白蠟塊融合為一體。

1.4 免疫組織化學 采用S-P二步法，嚴格按照免疫組織化學檢測試劑盒說明書指導步驟進行染色:將構建的芯片蠟塊以5 μm厚連續切片，常規脫臘至水，體積分數3%H2O215 min阻斷內源性過氧化物酶活性，置入有 0.01 mol·L－1枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)的高壓鍋內加熱進行抗原修復(從高壓鍋開始慢慢噴氣時，計時3 min)，迅速冷卻后洗滌。滴加一抗MMP-2(1∶100)，濕盒中孵育，4℃冰箱中過夜，PBS充分洗滌，DAB顯色。蘇木素復染，鹽酸酒精分化，脫水、透明、水溶性樹脂封片，光鏡下觀察。

1.5 陽性結果判斷標準 MMP-2陽性信號以細胞漿出現淡黃色至棕黃色為陽性。根據陽性細胞占全部腫瘤細胞或實質細胞的百分比及著色程度判斷結果:無明顯陽性反應細胞或陽性細胞數＜10%為陰性;有著色較強細胞或陽性細胞數＞10%為陽性［2］。采用雙盲法，由2位有經驗的病理醫生分別對免疫組化染色結果進行評估。

1.6 統計學處理 應用SPSS 13.0進行統計分析，率的比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 MMP-2在結腸腺癌組織和正常結腸組織中的表達 MMP-2在59例結腸腺癌組織中的表達率為62.7%(37/59)，高于正常結腸組織中表達率20.0%(2/10)，差異有統計學意義 (P＜0.05)。陽性信號主要定位于細胞質。見表1，圖1、2。

表1 MMP-2蛋白在不同結腸組織中的表達 例

2.2 MMP-2在結腸腺癌中的表達與臨床病理參數的關系 MMP-2在結腸中的陽性率和腫瘤的大小、淋巴結轉移、浸潤深度以及分化程度有關(P＜0.05)，而與患者的年齡無關(P＞0.05)。見表2。

表2 MMP-2的表達與結腸癌臨床病理參數的關系 例

3 討論

近年來的研究［3］表明腫瘤細胞的浸潤和轉移最重要的一步就是通過基底膜和細胞外基質，而腫瘤細胞可以分泌MMP-2，最終MMP-2被激活形成Ⅳ型膠原蛋白酶，降解和破壞腫瘤細胞周圍細胞外基質中的膠原蛋白及明膠，從而得以沿著破壞的基膜向周圍組織浸潤蔓延，浸潤血管、淋巴管或者體腔后即可發生轉移。Papadopoulou等［4］的研究表明 MMP-2的高表達和結腸腫瘤的大小，臨床分期以及組織學分級有關，與淋巴結轉移無關。但是也有研究［5］表明MMP-2的高表達與淋巴結轉移有密切關系。本文結果表明，MMP-2在結腸腺癌組織中表達陽性率高于正常結腸組織，差異有統計學意義，其陽性表達率與患者組織分化程度，腫瘤大小，淋巴結轉移和浸潤深度均有關，差異均有統計學意義(P＜0.05)，與患者的年齡無關(P＞0.05)，這與文獻［4］報道基本一致。MMP-2 表達率越高，腫瘤體積越大，分化越差，浸潤越深，越容易發生淋巴結轉移，說明MMP-2不僅參與結腸腺癌的浸潤和轉移，而且參與了結腸腺癌的發生。因此臨床中檢測腫瘤組織中MMP-2的表達可能會成為判斷患者預后的重要指標。

［1］Arvelo F，Cotte C.Metalloproteinases in tumor progression.Review［J］.Invest Clin，2006，47(2):185 －205.

［2］郭琦，唐芙愛，李印，等.Claudin-1和VEGF-c在食管鱗癌中的表達［J］.胃腸病學和肝病學雜志，2009，18(6):515 －517.

［3］Patel BP，Shah SV，Shukla SN，et al.Clinical significance of MMP-2 and MMP-9 in patients with oral cancer［J］.Head Neck，2007，29(6):564－572.

［4］Papadopoulou S，Scorilas A，Arnogianaki N，et al.Expression of gelatinase-A(MMP-2)in human colon cancer and normal colon mucosa［J］.Tumour Biol，2001，22(6):383 －389.

［5］蔡鳳林，周士福，馬兆生，等.乳腺浸潤性導管癌中 COX-2、MMP-2的表達及其相關性［J］.實用癌癥雜志，2008，23(1):44－47.