三七及屏邊三七花粉不同貯藏條件生活力測(cè)定

孫玉琴，黃天衛(wèi)，楊 莉，韋美麗，王朝梁，陳中堅(jiān)

（1.文山學(xué)院 三七研究院，云南 文山 663000；2.文山華信三七股份有限公司，云南 文山 663000）

花粉是種子植物的雄配子體，在有性繁殖中發(fā)揮著重要作用。采集的花粉和貯存的花粉，在使用之前必須作生活力的鑒定，以估價(jià)花粉是否有授精能力。在農(nóng)業(yè)和林業(yè)的常規(guī)育種工作中，為了進(jìn)行人工輔助授粉和雜交授粉，通常需要早期采集和儲(chǔ)藏花粉，尤其是在雜交育種工作中，為解決親本花期不一致和遠(yuǎn)距離雜交的問題，更需要保存生活的花粉［1］。

三七［Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen］及屏邊三七（P.stipuleanatus）屬五加科人參屬植物，三七由于長期的人工栽培，病蟲害比較嚴(yán)重［2］，屏邊三七為三七的近源野生種，具有較強(qiáng)的抗病性。但人工栽培三七與屏邊三七花期不遇，為探尋是否可以利用雜交育種手段選育三七抗病新品種，為三七的育種工作提供一條新途徑，筆者對(duì)不同貯藏條件下二者的花粉生活力進(jìn)行測(cè)定，以便了解二者的花粉貯藏壽命。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)材料采自文山學(xué)院三七研究院硯山試驗(yàn)場(chǎng)內(nèi)種植的二年生三七，三年生三七及種質(zhì)資源圃內(nèi)的多年生屏邊三七的花粉，采樣后分別保存在普通冰箱的4 ℃保鮮層及-20 ℃冰凍層中。

1.2 方法

1.2.1 染色液的配制

花粉測(cè)定采用噻唑藍(lán)（MTT）染色法，稱取0.1 g MTT，溶解于10 mL配置好的5%的蔗糖溶液中，搖勻置于冰箱中避光保存。

1.2.2 染色測(cè)定操作過程

（1）取少數(shù)花粉置于載玻片上，加1～2滴MTT溶液，蓋上蓋玻片

（2）將制片在室溫下放置15 min，然后在低倍鏡下觀察。凡是染成紅色的花粉，其生活力為強(qiáng)，淡紅的次之，無色的為不具活力的花粉或不育花粉。

（3）觀察3個(gè)制片，每片取5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)100粒，然后計(jì)算花粉的活力百分率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同貯藏條件下三七花粉壽命比較

不同貯藏條件下二年生三七、三年生三七花粉壽命比較情況見表1。由表1可以看出，三年生三七花粉貯藏壽命長于二年生三七花粉。三七花粉在冰凍條件保存，花粉從有活力至活力完全喪失的時(shí)間約80 d，保鮮條件下，二年生三七花粉活力維持時(shí)間約45 d左右，三年生三七花粉活力維持時(shí)間約60 d左右。二年生花粉保鮮貯藏23 d，花粉活力降低了49.42%，冰凍貯藏30 d，花粉活力降低了53.85%（見圖1），而三年生三七花粉保鮮貯藏45 d，花粉活力降低了59.53%，冰凍貯藏35 d，花粉活力降低了47.03%（見圖2）。

表1 二年生、三年生三七花粉貯藏壽命表

圖1 二年生三七花粉壽命

圖2 三年生三七花粉壽命

2.2 不同貯藏條件下屏邊三七花粉壽命

不同貯藏條件下屏邊三七花粉生命情況見表2。

由表2可以看出，屏邊三七花粉在保鮮條件下貯藏的時(shí)間較冰凍條件下要長，在保鮮條件下屏邊三七花粉從有活力至活力完全喪失的時(shí)間約60 d左右，而冰凍條件下貯藏時(shí)間僅為35 d左右。屏邊三七花粉在冰凍條件下保存3 d左右時(shí)間，花粉活力開始迅速下降，保存一個(gè)星期后，花粉活力降低了59.43%（見圖3）。

表2 屏邊三七貯藏壽命表

圖3 屏邊三七花粉壽命

3 結(jié)論與討論

（1）栽培三七剛采獲后的花粉活力基數(shù)比屏邊三七花粉活力基數(shù)低，這與每個(gè)花序上的小花數(shù)目多少有關(guān)，栽培三七平均一個(gè)花序上的小花數(shù)目遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于屏邊三七，其營養(yǎng)供應(yīng)遠(yuǎn)不如屏邊三七，致使小花采獲的花粉活力基數(shù)大大低于屏邊三七。

（2）栽培三七一般人工種植三年即可收獲，三七從栽種的第二年就可以開花結(jié)果，故在三七的一個(gè)生長周期內(nèi)同時(shí)采收二年生三七花粉和三年生三七花粉比較它們的貯藏時(shí)間。比較結(jié)果顯示，在保鮮條件下，三年生三七花粉較二年生三七花粉耐貯藏時(shí)間稍長，在冰凍條件下，二者相差不大。

（3）屏邊三七花粉的耐貯藏性比栽培三七時(shí)間短，雖然花粉活力基數(shù)高但經(jīng)過一段時(shí)間貯藏花粉活力迅速降低，可能與栽培三七經(jīng)過400多年的人工馴化，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性增強(qiáng)，而屏邊三七是從原始森林收集到三七研究所種質(zhì)資源圃的，人工栽培時(shí)間短，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性弱有關(guān)，但其生機(jī)理制還需進(jìn)一步研究。

［1］王欽麗，盧龍斗，吳小琴，等.花粉的保存及其生活力測(cè)定［J］.植物學(xué)通報(bào)，2002（ 3）：365-373.

［2］陳昱君，王勇，馮光泉，等.三七病蟲害防治［M］.昆明：云南科技出版社，2006：1-3.