實時熒光定量RT-PCR監測沙門氏菌活菌

張 沖，劉 祥，陳計巒

(1.石河子大學食品學院，新疆石河子 832000;

2.國家加工食品質量監督檢驗中心，天津 300384)

實時熒光定量RT-PCR監測沙門氏菌活菌

張 沖1，劉 祥2，*，陳計巒1

(1.石河子大學食品學院，新疆石河子 832000;

2.國家加工食品質量監督檢驗中心，天津 300384)

沙門氏菌是引起食物中毒的最常見致病菌，而基于DNA水平的常規PCR(DNA－PCR)檢測法雖然快速、靈敏，但在檢測時無法區分死活菌，死亡的細菌會出現假陽性結果，嚴重影響日常檢測結果的判斷。提取沙門氏菌總RNA之后，采用一步法逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT－PCR)，以沙門氏菌invA mRNA為檢測對象，發現只有活的沙門氏菌顯陽性，死亡的沙門氏菌呈陰性。而且RT－PCR法的穩定性良好，能夠準確定量活的沙門氏菌，在純培養時，檢出限可達1CFU/3mL。實驗表明，建立的RT－PCR法是一種能夠快速、精確檢測沙門氏菌活菌的方法。

沙門氏菌，RT－PCR，死活菌，常規PCR

沙門氏菌是食品中最常見的致病菌，大量存在于牛肉、豬肉、雞蛋、牛奶、海鮮等多種食物中，能引發多種沙門氏疾病，中、輕度感染會有腹瀉、嘔吐、腹部絞痛、發燒等癥狀產生［1］。在歐盟委員會、美、英、法、日等多個國際權威機構和國家發布的食品微生物限量標準中，對肉、蛋、奶類等動物性產品沙門氏菌的規定均為不得檢出，在所有微生物限量的標準中限制最為嚴格［2］。傳統培養檢測法，操作復雜繁瑣、耗時費力，完成整個檢測過程至少需要5d的時間［3］;而目前在食品微生物檢測中廣泛運用的定量PCR技術，大多是基于DNA水平的(DNA－PCR)，雖然快速、特異性強、靈敏度高，但由于細菌死亡后，DNA降解緩慢，能夠穩定存在，容易產生假陽性結果［4］。……