胞磷膽堿鈉片的穩定性研究

趙先亮，王士立

(1.濟南利民制藥有限責任公司，山東 濟南250200;2.山東省醫藥生物技術研究中心，山東濟南250200)

胞磷膽堿鈉片中有效成分胞磷膽堿(cytidine diphosphate choline)為胞嘧啶核苷二磷酸膽的堿簡稱，為核酸類衍生物，對各種腦損傷引起的意識障礙，包括精神、行為、記憶、學習有明顯改善，所以胞磷膽堿在中風藥物中列為神經保護劑。除改善中風后癥狀及患者各項中樞神經功能外，對帕金森綜合征［1］、癡呆癥［2］、青光眼［3］亦有一定療效。目前國內生產廠家僅有兩家，為滿足市場需要，我公司對胞磷膽堿鈉片進行了研發，通過對胞磷膽堿片的光照試驗、加速試驗及長期室溫留樣試驗觀察，以含量作為考察指標，為藥品儲存、有效期的確定提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SeriesIII Laballiance型高效液相色譜儀，WD－B恒溫加速試驗箱(天津藥典標準儀器廠)，GZX－250光照箱(北京中興偉業儀器有限公司)。

1.2 藥品與試藥 胞磷膽堿片(濟南利民制藥有限責任公司生產，批號090406、090407、090408)，乙腈(色譜純;美國天地)，磷酸(分析純;萊陽康德化工有限公司)。

2 試驗方法與結果

2.1.1 檢測方法 色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液－甲醇(95∶5)為流動相，流速1 mL·min－1;柱溫30℃，檢測波長為276 nm。取5'－胞苷酸25 mg，置100 mL的量瓶中，加水稀釋制成每1 mL中含0.25 mg的溶液，取上述溶液適量，與胞磷膽堿鈉對照品溶液等量混合，搖勻，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，胞磷膽堿鈉與5'－胞苷酸的分離度應符合要求。

2.1.2 測定法 取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于胞磷膽堿25 mg)，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液;另取105℃干燥4 h的胞磷膽堿鈉對照品適量，用水制成每1 mL中約含胞磷膽堿0.25 mg的溶液，作為對照品溶液。取上述溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算即得。

2.1.3 線性試驗 精密稱取105℃干燥4 h的胞磷膽堿鈉對照品21.70 mg(中檢所提供，含量以胞磷膽堿計95.69%)置25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別取1、2、3、4、5 mL至10 mL的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。進樣10 μL，記錄色譜圖。得回歸方程:A=9.61 ×103C －5.71×104，r=0.999 6，結果表明胞磷膽堿在 83.06 ～415.29 μg·mL－1范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.2 胞磷膽堿片的穩定性研究

2.2.1 光照試驗 取本品(批號:090406)，除去外包裝，開口置玻璃平皿中，放于GZX－250光照箱，照度為(4 500±500)lx中，分別于第5、10天取樣，依上述方法測定含量，并與0 d的結果進行比較，觀察樣品在強光照射下的穩定性，結果見表1。

表1 胞磷膽堿鈉片強光照射試驗結果(批號090406)

2.2.2 高溫試驗 取本品(批號:090406)，除去外包裝，置玻璃平皿中，于60℃恒溫箱中放置，分別于第5、10天取樣，按考察項目檢查和測定，并與0 d的結果進行比較，觀察樣品在高溫條件下的穩定性，結果見表2。

表2 胞磷膽堿鈉片高溫試驗結果(批號090406)

2.2.3 高濕試驗 取本品(批號:090406)，除去外包裝，開口置玻璃平皿中，于25℃、相對濕度RH(90±5)%的密閉容器中放置，分別于第5、10天取樣，按考察項目檢查和測定，并與0天的結果進行比較，觀察樣品在高濕條件下的穩定性，結果見表3。

表3 胞磷膽堿鈉片高濕試驗結果(批號090406)

2.2.4 經典恒溫加速試驗 取胞磷膽堿鈉片三批(批號090406、090407、090408)在市售包裝條件下，于溫度(40±2)℃、(50±2)℃、(60±2)℃和 RH(75±5)%的條件下，放置6個月，分別于 0、1、2、3、6個月各取樣，依法測定含量。以lgC和時間t作回歸曲線，根據一級動力學公式:

當前，國內城市地鐵大多采用110/35kV的兩級電壓集中供電方式。這種供電方式主要由外部電源、主變電所、中壓環網、牽引變電所和降壓變電所構成。每個主變電所從城市電網引入2路110kV電源互為備用，降壓至地鐵所需的35kV中壓系統，然后通過中壓環網向牽引變電所和降壓變電所供電。中壓環網采用分區供電，幾個相鄰的牽引變電所通過串接的方式構成一個供電分區。主變電所向每個供電分區的一個變電所供電，分區的其他變電所則通過串接的方式獲得電源。各個牽引變電所之間通過交流電纜連接，這樣就構成了地鐵的集中供電系統，如圖2所示。

V=KC，即 dC/dt=KC

K=dC/C×1/dt

積分得:K=(1/t)×ln(Ct/C0)

即:lnCt=lnC0+Kt

分別計算出40、50、60℃的K值，結果見表4。

表4 胞磷膽堿鈉片加速試驗結果(批號090406)

2.2.5 有效期估算 經典恒溫加速試驗的理論依據是arrhenius方程:K=Ze－E/RT，經推導換算得通式為:lnK=A+B/T，K 為負數則為 ln(－ K)=A+B/T［4］。

式中:T為絕對溫度;R為氣體常數;E為活化能，對某一具體反應為常數;K為速度常數，是化學反應的一個特征數值，與濃度無關。

根據上式及一級動力學公式lnCt=lnC0+Kt計算得出K25℃的值，再依據t=(1/K)×ln(Ct/C0)估算有效期，其中C0為每批的初始含量，Ct為本品規定的最低含量限度，根據表4至表6數據可以看出，隨著胞磷膽堿鈉的分解含量降低，有關物質增加，為保證有效期內有關物質符合規定，確定Ct為 95.0%，結果見表 5、表 6。

表5 三批胞磷膽堿鈉片動力學數據

表6 K25℃及有效期

根據090407批、090409批加速試驗結果，同法計算，其回歸方程分別為:ln(－K)= －8 172.4/T+20.03、ln(－K)=－9 764.3/T+24.90，得出其估算有效期分別為83個月、135個月。

2.2.6 長期穩定性試驗 樣品批號:090406，090407，090408。按上市包裝，置溫度(25±2)℃、相對濕度(60±10)%的條件下放置36個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月、24個月、36個月末取樣，比較外觀后，測試各項指標，將結果與0個月比較，結果見表7。

3 討論

本研究重點考察了胞磷膽堿鈉片的化學穩定性，主要采用了光照試驗、60℃高溫試驗、高濕試驗、經典恒溫熱加速試驗、長期試驗。加速試驗是在超常條件下進行的，其目的在于通過加速藥物的化學或物理變化，觀察藥物的穩定性，預測其有效期，為藥品儲存、有效期的確定提供實驗依據。

3.1 光照試驗 本品在強光條件下考察10 d，外觀、有關物質、溶出度、含量等各項理化指標基本無明顯改變，表明本品在強光條件下性質基本穩定。

3.2 高溫試驗 本品在60℃高溫條件下考察10 d，外觀、有關物質、溶出度、含量等各項理化指標基本沒有明顯改變，表明本品在高溫條件下性質基本穩定。

3.3 高濕試驗 本品在高濕條件下考察10 d，外觀、有關物質、溶出度、含量等各項理化指標基本沒有明顯改變，表明本品在高濕條件下性質基本穩定。

3.4 經典恒溫熱加速試驗 由經典恒溫熱加速試驗結果表明，三批樣品的回歸方程分別是ln(－K)=－8 533.4/T+21.14、ln(－K)= －8 172.4/T+20.03、ln(－K)= －9 764.3/T+24.90，分解5%的時間分別是100個月，83個月，135個月，說明胞磷膽堿鈉片具有非常好的穩定性，考慮到產品市場消耗周期及銷售后的環境變動等因素，可將本產品有效期定為36個月。

3.5 長期試驗 通過對三批樣品長期試驗考察，在36個月內樣品質量同0月相比基本沒有變化，與經典恒溫熱加速試驗預測有效期吻合。

［1］Ross BM，Mamalias N，Moszczynska A，et al.Elevated activity of phospholipid biosynthetic enzymes in substantia nigra of patients with Parkinson's disease［J］.Neuroscience，2001，102(4):899 －904.

［2］王曉燕.胞磷膽堿鈉的臨床應用［J］.華夏醫藥，2003，7(3):73－75。

［3］Rejda R，Toezolowski J，Kurkowski J，et al.Oral citicoline treatment improves visual pathway function in glaucoma［J］.Med Sci Monit，2003，9(3):124 －128.

［4］趙先亮，周曰玲，張翠娟.酪酸梭菌二聯活菌散及膠囊的加速穩定性試驗［J］.齊魯藥事，2009，28(4):241－244.