反相高效液相色譜法測(cè)定柴遠(yuǎn)解郁片中梔子苷的含量

趙霞 仲崇琳 楊美林

反相高效液相色譜法測(cè)定柴遠(yuǎn)解郁片中梔子苷的含量

趙霞 仲崇琳 楊美林

目的建立以反相高效液相色譜法測(cè)定柴遠(yuǎn)解郁片中梔子含量的方法。方法以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑;以乙腈-水(15∶85)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm;流速1.0 ml/min。理論板數(shù)以梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。結(jié)果梔子濃度線性范圍為0.1248 μg～0.6240 μg。平均回收率為99.27，RSD=0.41%(n=5)。結(jié)論本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于柴遠(yuǎn)解郁片的質(zhì)量控制。

柴遠(yuǎn)解郁片;梔子;反相高效液相色譜法

柴遠(yuǎn)解郁片是我院在研的六類新藥，該制劑由柴胡、遠(yuǎn)志、梔子、巴戟天、五味子、石菖蒲、酸棗仁、茯苓、牡丹皮和半夏藥材組成，具有舒肝解郁和安神定志，用于治療抑郁癥(肝郁氣滯型)。梔子是柴遠(yuǎn)解郁片中主要成分之一，在新藥研制過(guò)程中，參照2010年版中國(guó)藥典梔子項(xiàng)下含量測(cè)定方法，筆者建立了以反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測(cè)定其中梔子含量的方法。作為控制本品質(zhì)量的方法之一。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10ATvp高效液相色譜儀，十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱(Diamonsil C18(250 4.6 mm;5 μm)色譜柱(迪馬公司);SPD-10AVP檢測(cè)器，N2010色譜數(shù)據(jù)工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)，梔子苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(供含量測(cè)定用)，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為重蒸餾水。柴遠(yuǎn)解郁片由我院試制中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑;以乙腈-水(15∶85)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm;流速1.0 ml/min;柱溫:室溫。理論板數(shù)以梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含31.2 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約0.2 g，同時(shí)另取本品粉末測(cè)定水分(中國(guó)藥典2010年版附錄Ⅸ H第二法)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性溶液的制備 依照柴遠(yuǎn)解郁片工藝，去上述藥材除去梔子，按照工藝要求及原理，制備一批藥品，作為陰性供試品。

2.5 干擾試驗(yàn) 取不含梔子的陰性對(duì)照液、供試品、對(duì)照品各20 μl，注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照液的色譜圖在梔子苷色譜峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，結(jié)果見(jiàn)圖 1，2。

2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml中含梔子苷31.2 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取 4、8、12、16、20 μl，注入高效液相色譜儀，按上述條件測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，梔子苷的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程:Y=30243.21+1337910.18X r=0.9997，線性范圍:0.1248 μg ～0.6240 μg。

圖1 溶劑峰、梔子苷對(duì)照品、樣品液及陰性液高效液相色譜圖

圖2 溶劑峰、梔子苷對(duì)照品、樣品液及陰性液高效液相色譜圖

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，按正文中的含量測(cè)定方法測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，5次測(cè)定峰面積分值的RSD為0.17%，結(jié)果表明，含量測(cè)定方法精密度符合要求。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品(批號(hào):20110801)依法獨(dú)立按正文含量測(cè)定方法測(cè)定，平均值為1.52(mg/g)，RSD 1.0%，結(jié)果表明，含量測(cè)定方法重現(xiàn)性符合要求。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液(批號(hào):20110801)，按正文中的含量測(cè)定方法測(cè)定，分別于0、6、12、18、24 h進(jìn)樣一次，測(cè)定峰面積，結(jié)果供試品溶液色譜峰面積積分值在24 h內(nèi)基本無(wú)變化，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知梔子苷含量的樣品五份(含量1.52 mg/粒)，精密加入一定量的梔子苷對(duì)照品溶液，依法按正文含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率99.27%，RSD0.41%。

2.11 樣品含量測(cè)定 取三批樣品，依法按正文含量測(cè)定方法測(cè)定其含量，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，本品每g中含梔子苷平均值為1.50 mg，考慮到在今后實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)有一定損耗，故限定樣品中梔子含量以梔子苷(C17H24O10)計(jì)不得低于1.0 mg/g(n=5)。

3 討論

本試驗(yàn)乙腈-水(15∶85)為流動(dòng)相，組分簡(jiǎn)單，柱平衡時(shí)間短，基線平直，試驗(yàn)后色譜柱易清洗。本試驗(yàn)線性關(guān)系良好，線形范圍寬，穩(wěn)定性好，回收率在99.27%，方法可行。因中藥成分復(fù)雜，多難分離，然用本文所述方法則提取完全，未引入其他雜質(zhì)，組分分離較佳，理論板數(shù)定為2500。

136000 四平，吉林省神經(jīng)精神病醫(yī)院(趙霞);吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院(仲崇琳 楊美林)

梔子苷為梔子活性成分，本文采用以十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱的反相高效液相法對(duì)其定量，操作簡(jiǎn)單，可作為該藥材的質(zhì)量控制法。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

編號(hào) 取樣量(g)樣品已知含量(mg)對(duì)照品加入量(mg)測(cè)得總量(mg)回收率(%)平均值(%)RSD(%)1 0.2551 0.97 1.04 2.00 99.71 2 0.2671 1.01 0.98 1.98 98.97 3 0.2673 1.01 0.97 1.97 99.17 99.27 0.41 4 0.2550 0.97 1.01 1.97 99.68 5 0.2802 1.06 0.94 1.99 98.83