直接ELISA法與間接ELISA法檢測HIV抗體的對比分析

喬健健

直接ELISA法與間接ELISA法檢測HIV抗體的對比分析

喬健健

目的合理選擇檢測試劑，建立一種準確的ELISA檢測方法。方法直接ELISA法和間接ELISA法對不同血液標本分別進行HIV抗體的檢測，并對結果進行比較分析。結果間接ELISA法檢測后會出現不同例數的假陽性結果，而直接ELISA法未出現假陽性結果。結論直接ELISA法檢測結果假陽性率低，作為新一代試劑，可逐步取代間接ELISA法。

酶聯接免疫吸附劑測定法;直接ELISA法;間接ELISA法;HIV;檢測

檢測人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)抗體的常用實驗方法有蛋白印跡法、酶聯接免疫吸附劑測定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)法、膠體金法等。ELISA法的操作步驟簡便，試劑成本較低，檢測靈敏度較高，尤其適合于標本的快速批量檢測，因而我國血站、衛生防疫部門更常使用 ELISA法進行血液篩查和檢測［1］。ELISA法有直接檢測法和間接法，間接ELISA法會造成較大的假陽性檢測結果，浪費原本緊張的臨床血液資源，打擊了一部分獻血者的參與積極性，甚至會出現不良社會影響和糾紛［2］。為了合理選擇檢測試劑，建立一種準確的ELISA檢測方法，本文采用直接ELISA法和間接ELISA法分別進行HIV抗體的檢測，并對結果進行比較分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 隨機選取本中心接收的血液標本314例，采用間接ELISA法檢測結果HIV陽性8例的血液標本，經過上級確認實驗室確認的HIV陽性3例的血液標本。

1.2 儀器 ETI-MAX3000型全自動酶免分析儀。

1.3 試劑 檢測所用的質控血清為衛生部臨床檢驗中心提供。間接ELISA法試劑盒分別購自國內公司 (A)與公司(B)。直接ELISA法為雙抗原夾心法，所用國產試劑盒購自國內某公司(C)，進口試劑盒購自日本某公司(D)。所有試劑均在有效期內使用，嚴格按照說明書規定的操作步驟進行。

1.4 檢測方法 將血液樣品離心后，通過自動加樣器加樣，在全自動酶聯免疫分析系統中進行兩次免疫初篩。對于初篩陽性血液標本采用雙孔平行檢測法再次檢測。采用GeneLab試劑將ELISA法初篩結果陽性的血液標本進行免疫學蛋白印跡法確證實驗。

2 結果

間接ELISA法和直接ELISA法檢測HIV抗體的陽性結果比較見表1。可見，間接ELISA法檢測后會出現不同例數的假陽性結果，而直接ELISA法未出現假陽性結果。

表1 間接法和直接法檢測HIV抗體的陽性結果比較

3 討論

ELISA法是進行HIV感染情況的最常用初篩方法。間接ELISA法采用非特異性的抗人IgG作為酶標二抗，只可檢測IgG抗體，對在微孔板上吸附的抗體無篩查功能，因而間接ELISA法特異性較低。影響間接ELISA法特異性的因素較多，但大比例的是由非特異性因素造成的。這是由于HIV抗原和其他逆轉錄病毒抗原存在交叉反應，而一些人血清中的HIV抗體和HIV感染的淋巴細胞抗原也存在交叉反應，所以會出現一定比例的假陽性結果［3］。直接ELISA法的采用固相抗原的抗-HIV抗原作為酶標，固相抗原和抗-HIV抗原可對血清中的HIV抗體進行雙重識別［4］，因此，直接EL ISA法特異性較高，其檢測HIV抗體的假陽性結果比間接ELISA法降低。

可用于ELISA法檢測的試劑盒較多，國產試劑盒價格較低、靈敏度較高，而進口試劑盒價格較昂貴、特異性強、穩定性高［5］。目前國內ELISA法檢測試劑盒沒有采用統一的質量標準，因而國產間接法試劑盒的檢測結果出現不同例數的陽性結果。在國產和進口直接ELISA法試劑盒的對比中，二者的檢測結果無差異，均和確證實驗結果一致。因此，使用國產雙抗原直接ELISA法試劑盒來進行血液的HIV篩查工作，成本較低，而特異性、靈敏度均符合要求。

［1］殷勤，盛磊.不同孵育方式對ELISA法抗-HIV(1+2)檢測結果的影響．臨床檢驗雜志，2005，23(6):444-446．

［2］何紅霞，貌盼勇，侯俊，等.雙抗原夾心法檢測抗HIV-1/2總抗體方法的建立和評價．中華實驗和臨床病毒學雜志，2002，16(3):571-573．

［3］李鎣玲，黃玲，馬海燕，等.抗-HIV(1/2)間接法與雙抗原夾心法的比較．廣西預防醫學，2004，10(1):62-62．

［4］張宏萍.三種方法篩查HIV抗體的比較．上海預防醫學，2012，24(3):155-156．

［5］強來英，林旭東，沈彤慶，等.國產抗-HIV ELISA診斷試劑質量提高的血清學證實．中國輸血雜志，2003，16(2):81-83．

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