PMA- LAMP方法檢測滅菌乳中金黃色葡萄球菌的研究

胡惠秩，滿朝新，董鑫悅，劉珊珊，薛玉清，楊士芹，謝鯤昊，劉 穎，盧 雁，姜毓君，，*

(1.東北農業大學乳品科學教育部重點實驗室，黑龍江哈爾濱 150030;

2.東北農業大學國家乳業工程技術研究中心，黑龍江哈爾濱 150030)

PMA- LAMP方法檢測滅菌乳中金黃色葡萄球菌的研究

胡惠秩1，滿朝新2，董鑫悅1，劉珊珊1，薛玉清1，楊士芹1，謝鯤昊1，劉 穎1，盧 雁2，姜毓君1，2，*

(1.東北農業大學乳品科學教育部重點實驗室，黑龍江哈爾濱 150030;

2.東北農業大學國家乳業工程技術研究中心，黑龍江哈爾濱 150030)

近年來，金黃色葡萄球菌引起的食品安全事件頻發，這就需要建立一種快速準確地檢測食品中金黃色葡萄球菌的方法。傳統方法檢測食品中金黃色葡萄球菌活菌存在很多缺點。由于細胞死亡后其DNA依然能夠存活許久，所以傳統方法不能有效區分DNA來自死菌還是活菌。通過熒光染料PMA與快速檢測技術LAMP相結合的方法快速、靈敏的檢測滅菌乳中金黃色葡萄球菌，并對死/活菌進行區分。根據金黃色葡萄球菌nuc基因設計引物，并對LAMP反應體系及PMA－LAMP方法進行優化，同時優化了滅菌乳中提取DNA的方法。在純培養的金黃色葡萄球菌中，PMA－LAMP方法檢測靈敏度為3.2CFU/mL，PMA－PCR方法的檢測靈敏度為3.2×102CFU/mL;對人工污染滅菌乳中的金黃色葡萄球，PMA－LAMP方法檢測靈敏度為5×101CFU/mL，而PMA－PCR方法檢測靈敏度為5×103CFU/mL。整個反應需要大約6h，說明PMA－LAMP方法檢測滅菌乳中金黃色葡萄球菌特異性強、靈敏度高、時間短且操作簡便，有望成為快速檢測金黃色葡萄球菌活菌的新方法。

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