響應(yīng)面法優(yōu)化根霉菌產(chǎn)麥角固醇的液體發(fā)酵工藝

汪財(cái)生，汪樂意，高有領(lǐng)*，譚志文，楊震峰

(浙江萬里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院，浙江 寧波 315100)

響應(yīng)面法優(yōu)化根霉菌產(chǎn)麥角固醇的液體發(fā)酵工藝

汪財(cái)生，汪樂意，高有領(lǐng)*，譚志文，楊震峰

(浙江萬里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院，浙江 寧波 315100)

以米根霉(Rhizopus oryzaeZW017)發(fā)酵產(chǎn)麥角固醇的產(chǎn)量為響應(yīng)值，對其液體發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化。采用HPLC法檢測菌株產(chǎn)麥角固醇含量，在單因素篩選試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以PDB液體發(fā)酵培養(yǎng)為基礎(chǔ)條件，應(yīng)用響應(yīng)面分析法(RSM)對碳源、氮源及發(fā)酵時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：以葡萄糖、酵母膏分別為最佳碳、氮源；最佳工藝條件為：PDB基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加葡萄糖3g/L、酵母膏5g/L、發(fā)酵培養(yǎng)9.64d，麥角固醇平均產(chǎn)量達(dá)5761.83μg/100mL，較優(yōu)化前提高了247.86%，與構(gòu)建模型理論預(yù)測值(5818.39μg/100mL)相吻合，且100mL液體培養(yǎng)基中麥角固醇產(chǎn)量占菌體細(xì)胞干質(zhì)量(0.36g)的1.60%。

根霉菌；麥角固醇；響應(yīng)面分析法

麥角固醇(C28H43OH)又名麥角甾醇，化學(xué)名稱為24β-甲基膽固醇-5,7-烯-3β-羥基，在常溫下麥角固醇呈白色片狀晶體或針狀晶體，相對分子質(zhì)量396.63，不溶于水，易溶于石油醚、乙醚、庚烷等有機(jī)溶劑。麥角固醇是一種重要的醫(yī)藥化工原料，可用于“可的松”、“激素黃體酮”及“蕓苔素內(nèi)酯”等藥物的生產(chǎn)，也是脂溶性VD2的前體，當(dāng)受到紫外線照射時(shí)可轉(zhuǎn)化為VD2，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]。由于我國生產(chǎn)麥角固醇的能力低，生物合成途徑尚處于不成熟階段，而且麥角固醇轉(zhuǎn)化成VD2的工藝比較落后，但我國對VD2的需求量又很大，其生產(chǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場的需求，每年需要從國外進(jìn)口一定量的麥角固醇，因此，麥角固醇的研究開發(fā)有很大的市場。

麥角固醇主要存在于植物和一些真菌的質(zhì)膜上[2]。目前，國外主要采用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)麥角固醇，所用的菌種有酵母菌、曲霉和青霉，其產(chǎn)量分別可達(dá)細(xì)胞干質(zhì)量的2.7%、2.0%和1.8%左右[3-4]；由于他們重視高產(chǎn)菌株的選育，以及對影響麥角固醇產(chǎn)生的代謝調(diào)控、發(fā)酵條件優(yōu)化等研究，其生產(chǎn)一直處于穩(wěn)中有升的趨勢[4-5]。國內(nèi)于20世紀(jì)50年代起開始對酵母產(chǎn)麥角固醇進(jìn)行研究，主要用酵母菌、黑曲霉及紅曲霉固體發(fā)酵生產(chǎn)麥角固醇，產(chǎn)量相對較低，僅為細(xì)胞干質(zhì)量的0.8%～1.2%[4]；如朱效剛等[6]利用紅曲霉SJS-20固態(tài)發(fā)酵，麥角固醇產(chǎn)量達(dá)到細(xì)胞干質(zhì)量的0.82%，陳松生等[7]以Monascus purpureus625進(jìn)行液體發(fā)酵，得到麥角固醇產(chǎn)量為菌體干質(zhì)量的1.68%左右，寧瑋霽等[8]以紅曲霉Monascussp. ZZ為菌種進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到菌體干質(zhì)量1.13%的麥角固醇，李國友等[9]從根霉3078菌絲體的甲醇提取物中分離得到9種化合物并對其進(jìn)行波譜分析，結(jié)果檢測到麥角甾醇的產(chǎn)生，該麥角甾醇被鑒定為5a,8a-表二氧-(20S,22E,24R)-麥角甾-6,22-二烯-3-醇。筆者在以PDB培養(yǎng)基篩選高產(chǎn)植酸酶實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)一株高產(chǎn)麥角固醇根霉菌。因此，本試驗(yàn)采用響應(yīng)面法對影響該菌株產(chǎn)麥角固醇的主要碳源、氮源、培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，以期為工業(yè)化高效生產(chǎn)麥角固醇及綜合開發(fā)根霉菌提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌種、培養(yǎng)基與試劑

米根霉(Rhizopus oryzaeZW017)由王國良教授提供，浙江萬里學(xué)院省重點(diǎn)微生物學(xué)科實(shí)驗(yàn)室保存。

斜面及平板培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基為PDB培養(yǎng)基 天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心。

麥角固醇(純度≥99.8% 美國Sigma公司；甲醇、乙腈(色譜純) 天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

QYC-211型恒溫振蕩培養(yǎng)箱 上海福瑪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；Agilent 1100高效液相色譜儀 美國Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 菌種活化

將斜面保存的菌種轉(zhuǎn)接到平板培養(yǎng)基，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5～7d，待平板培養(yǎng)基長出大量根霉菌孢子后，用吐溫-80輕輕洗下，無菌水調(diào)整孢子濃度至107個(gè)/mL左右備用。

1.3.2 基礎(chǔ)發(fā)酵

在250mL三角瓶裝基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基100mL，將液體種子按10%接種量接入培養(yǎng)基中，于28℃、150r/min振蕩培養(yǎng)3d，每次處理設(shè)3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，收集菌體測定麥角固醇含量，取平均值，并以此為對照實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 碳源的篩選

1.3.3.1 不同碳源對麥角固醇產(chǎn)量的影響

將葡萄糖、乳糖、蔗糖分別以3g/L加入基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行單因素篩選試驗(yàn)，每種碳源設(shè)3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，測定菌體麥角固醇產(chǎn)量，取其平均值。

1.3.3.2 不同質(zhì)量濃度碳源對麥角固醇產(chǎn)量的影響

將1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0g/L不同質(zhì)量濃度的最佳碳源分別加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進(jìn)行單因素試驗(yàn)，每個(gè)質(zhì)量濃度平行實(shí)驗(yàn)3次，測定菌體麥角固醇產(chǎn)量，取其平均值。

1.3.4 氮源的篩選

1.3.4.1 不同氮源對麥角固醇產(chǎn)量的影響

將蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、(NH4)2SO4分別以3g/L添加到基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行單因素試驗(yàn)，每種氮源設(shè)3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，測定菌體麥角固醇產(chǎn)量，取其平均值。

1.3.4.2 不同質(zhì)量濃度氮源對麥角固醇產(chǎn)量的影響

將1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0g/L最佳氮源分別加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進(jìn)行單因素試驗(yàn)，每個(gè)質(zhì)量濃度設(shè)3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，測定菌體麥角固醇產(chǎn)量，取其平均值。

1.3.5 發(fā)酵時(shí)間對麥角固醇產(chǎn)量的影響

將PDB基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基接種，按1.3.2節(jié)方法分別于發(fā)酵3、4、7、9、11、13d后收集菌體，密封冰凍保存，同批處理每個(gè)時(shí)間設(shè)3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，測定菌體麥角固醇產(chǎn)量，取其平均值。

1.3.6 響應(yīng)面分析法優(yōu)化發(fā)酵條件

根據(jù)上述單因素試驗(yàn)結(jié)果，以菌體麥角固醇產(chǎn)量為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面分析方法(RSM)研究幾個(gè)發(fā)酵因素間交互作用對米根霉產(chǎn)麥角固醇的影響，以確定最佳發(fā)酵工藝參數(shù)。根據(jù)Box-Benhnken的中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)響應(yīng)面分析法優(yōu)化發(fā)酵條件，再借助軟件Design Expert(Version7.1.3)對結(jié)果進(jìn)行分析，以篩選最佳發(fā)酵工藝參數(shù)，并對結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。RSM試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1所示。

表1 米根霉液體發(fā)酵產(chǎn)麥角固醇Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平編碼水平表Table 1 Coded values and corresponding actual values of the optimization parameters used in response surface analysis

1.3.7 米根霉菌體生物量與麥角固醇產(chǎn)量測定

1.3.7.1 菌體收集與生物量計(jì)算

將三角瓶中菌體發(fā)酵液轉(zhuǎn)移至500mL離心管中，10000r/min離心10min，棄上清液，蒸餾水洗滌沉淀2次，重復(fù)離心，所得菌體于真空干燥箱50～60℃烘干至質(zhì)量恒定，準(zhǔn)確稱取其質(zhì)量。生物量用100mL液體培養(yǎng)基中菌體質(zhì)量表示。

1.3.7.2 麥角固醇提取

參照文獻(xiàn)[10]，對上述計(jì)算生物量后的菌體采用皂化-乙醚萃取-乙醇溶解定容法進(jìn)行麥角固醇樣品的提取與制備。

1.3.7.3 麥角固醇含量檢測

采用HPLC檢測方法[10]，并進(jìn)行改進(jìn)。選用Agilent ODS C18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，流速1.2mL/min，柱溫35℃，檢測波長282nm，檢測每100mL液體培養(yǎng)基的菌體中麥角固醇含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 麥角固醇含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制不同質(zhì)量濃度的6個(gè)麥角固醇標(biāo)準(zhǔn)樣品，采用液相色譜儀在波長282nm處測得色譜圖，其中3.3μg/mL標(biāo)樣圖譜見圖1。此色譜工作條件下儀器精密度為1.40%(n＝5)，平均加標(biāo)回收率達(dá)104.20%(n＝5)，表明儀器性能良好，誤差較低，麥角固醇色譜峰與雜質(zhì)有較好的分離效果；麥角固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y＝18.325x－11.689，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9996，麥角固醇在3.3～165μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，可以用來檢測樣品中的麥角固醇含量。

圖1 麥角固醇標(biāo)樣及樣品分離色譜圖Fig.1 Chromatographs of ergosterol standard and samples

2.2 基礎(chǔ)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以PDB培養(yǎng)基為基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵3d收集1 00mL液體培養(yǎng)中菌體，測得麥角固醇的產(chǎn)量為1656.35μg/100mL。

2.3 添加不同碳源對麥角固醇產(chǎn)量的影響

在基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基礎(chǔ)上選擇添加葡萄糖、乳糖、蔗糖為補(bǔ)充碳源，結(jié)果見圖2。上述3種碳源都有利于米根霉菌體產(chǎn)麥角固醇量提高，當(dāng)添加葡萄糖作為補(bǔ)充碳源時(shí)，麥角固醇產(chǎn)量最高，菌體產(chǎn)3150.29μg/100mL麥角固醇，因此，后續(xù)選擇葡萄糖為最佳添加碳源。

圖2 不同碳源及氮源對米根霉菌體麥角固醇產(chǎn)量的影響Fig.2 Effects of carbon and nitrogen source types on ergosterol production

2.4 添加不同葡萄糖質(zhì)量濃度對麥角固醇產(chǎn)量的影響

圖3 不同質(zhì)量濃度葡萄糖對米根霉菌體麥角固醇產(chǎn)量的影響Fig.3 Effect of glucose concentration on ergosterol production

如圖3所示，隨葡萄糖質(zhì)量濃度升高，菌體干細(xì)胞中麥角固醇的產(chǎn)量逐漸升高。當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為4g/L時(shí)，菌體中所產(chǎn)的麥角固醇接近最大值4331.62μg/100mL，之后有降低趨勢，表明麥角固醇在菌體中富集到一定程度，原因可能是在麥角固醇產(chǎn)生合成過程中，羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶的作用受到抑制[11]，此外，也與菌體中葡萄糖分解代謝相關(guān)的酶趨于飽和不再結(jié)合底物有關(guān)。

2.5 添加不同氮源對麥角固醇產(chǎn)量的影響

如圖2所示，添加不同氮源對菌體中產(chǎn)生麥角固醇的產(chǎn)量影響也較為明顯。在基礎(chǔ)液體培養(yǎng)中添加4種氮源中，酵母膏最有利于菌體產(chǎn)生麥角固醇，其產(chǎn)量可達(dá)2828.1μg/100mL。因此，基礎(chǔ)培養(yǎng)中添加酵母膏為最佳氮源。

2.6 添加不同質(zhì)量濃度酵母膏對麥角固醇產(chǎn)量的影響

液體發(fā)酵培養(yǎng)中添加不同質(zhì)量濃度酵母膏后，結(jié)果如圖4所示，隨著酵母膏質(zhì)量濃度的增加，菌體中麥角固醇的產(chǎn)量隨之增高。當(dāng)添加酵母膏質(zhì)量濃度至4g/L時(shí)，達(dá)到峰值(4124.36μg/100mL)，之后，麥角固醇的產(chǎn)量隨之降低。此現(xiàn)象可能與麥角固醇的產(chǎn)生受抑制有關(guān)，表明添加適當(dāng)質(zhì)量濃度的酵母膏有利于米根霉菌體發(fā)酵產(chǎn)麥角固醇。

圖4 不同質(zhì)量濃度酵母膏對米根霉菌體麥角固醇產(chǎn)量的影響Fig.4 Effect of yeast extract concentration on ergosterol production

2.7 發(fā)酵時(shí)間對米根霉產(chǎn)麥角固醇的影響

圖5 不同發(fā)酵時(shí)間對米根霉菌體麥角固醇產(chǎn)量的影響Fig.5 Effect of fermentation time on ergosterol production

從圖5可以看出，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，麥角固醇的產(chǎn)量逐漸增加，當(dāng)發(fā)酵時(shí)間達(dá)到9d后，菌體麥角固醇產(chǎn)量出現(xiàn)峰值(4337.62μg/100mL)，之后，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長，麥角固醇的產(chǎn)量降低明顯。這與發(fā)酵過程中隨著培養(yǎng)基中菌體生物量的不斷增加，營養(yǎng)物質(zhì)消耗得不到補(bǔ)充或某種營養(yǎng)物質(zhì)缺乏造成營養(yǎng)不均衡時(shí)，菌體發(fā)生自溶有關(guān)。因此，米根霉產(chǎn)麥角固醇較佳發(fā)酵時(shí)間為9d左右。

2.8 響應(yīng)面優(yōu)化發(fā)酵條件結(jié)果

根據(jù)表2，利用Design Expert軟件對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行二次多元回歸擬合，得到麥角固醇產(chǎn)量對自變量A、B和C的二次多項(xiàng)回歸方程為：Y＝4717.4－428.8A＋544.6B－45.4C－84.8AB－515.5AC－314.4BC＋68.6A2＋72.3B2－110.9C2。

為了使方程具有更好的擬合性，根據(jù)Sampaio等[12]采用的方法，除去方程中的AB、A2和B2項(xiàng)，得到優(yōu)化的二次回歸方程為：Y＝4794.9－428.8A＋544.6B－45.4C－515.5AC－314.4BC－121.0C2。

表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Box-Behnken experimental design and results

表3 響應(yīng)面二次模型的方差分析Table 3 Variance analysis for the results of Box-Behnken experimental design

由表3可知，模型的F值為4.58，表明該模型顯著(P＜0.05)，失擬項(xiàng)P＝0.8027，表明由誤差引起的失擬不顯著。模型的決定系數(shù)為0.8746，說明方程的因變量與全體自變量間線性關(guān)系明顯；模型的變異系數(shù)值為6.9，說明模型的精密度較好，具有足夠的信號來用于響應(yīng)該設(shè)計(jì)。綜合以上各參數(shù)表明該試驗(yàn)方法可靠，各因素水平間設(shè)計(jì)合理，因此可用該回歸模型代替實(shí)驗(yàn)真實(shí)點(diǎn)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析預(yù)測。回歸模型各項(xiàng)的方差分析結(jié)果還表明，A、AC項(xiàng)為顯著項(xiàng)，B項(xiàng)為極顯著項(xiàng)(P＜0.01)，其余項(xiàng)均不顯著。

2.9 優(yōu)化發(fā)酵條件的確定及驗(yàn)證

以表2結(jié)果對培養(yǎng)基中菌體生物量與菌體產(chǎn)麥角固醇量之間進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)其并不存在直接的相關(guān)性，菌體生長中麥角固醇生物合成的特定抑制劑濃度以及其他與麥角固醇反應(yīng)的成分，溫度、pH值都可能影響真菌的液態(tài)新陳代謝，并且可能影響真菌細(xì)胞膜中麥角固醇濃度[13]。因此，米根霉液體發(fā)酵產(chǎn)麥角固醇最佳工藝條件優(yōu)化在本試驗(yàn)設(shè)計(jì)中不考慮菌體生物量。

由優(yōu)化后的二次回歸模型可得到等高線圖和三維響應(yīng)面圖(圖6)，在圖中橫坐標(biāo)分別為發(fā)酵時(shí)間與碳源質(zhì)量濃度(葡萄糖)兩個(gè)變量，另一變量酵母膏質(zhì)量濃度(圖中未表示)已處于當(dāng)麥角固醇產(chǎn)量最高時(shí)的最佳值(5g/L)。二次回歸模型計(jì)算結(jié)果表明在本試驗(yàn)設(shè)定的變量范圍內(nèi)，100mL液體培養(yǎng)基中的菌體最高可產(chǎn)麥角固醇量為5818.39μg。此時(shí)最優(yōu)化的各項(xiàng)自變量分別為：3g/L葡萄糖、5g/L酵母膏、發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間9.64d。依此條件進(jìn)行根霉菌液體發(fā)酵重復(fù)培養(yǎng)得到菌體麥角固醇平均產(chǎn)量5761.83μg/100mL，菌體平均生物量0.36g，麥角固醇平均達(dá)菌體干細(xì)胞質(zhì)量的1.60%左右，與模型預(yù)測值(5818.39μg/100mL)接近，反映了本響應(yīng)曲面模型的可靠性。

圖6 葡萄糖質(zhì)量濃度與發(fā)酵時(shí)間交互作用對米根霉液體發(fā)酵產(chǎn)麥角固醇影響的響應(yīng)面和等高線圖Fig.6 Response surface and contour plots showing the effects of fermentation time and glucose concentration on ergosterol production

3 結(jié) 論

3.1 采用響應(yīng)面分析法對米根霉產(chǎn)麥角固醇條件進(jìn)行了初步優(yōu)化，在PDB為液態(tài)發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基，28℃、孢子液接種量2%、振蕩培養(yǎng)3d條件下，100mL發(fā)酵培養(yǎng)液平均產(chǎn)麥角固醇1656.35μg；液態(tài)發(fā)酵的優(yōu)化條件為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加3g/L葡萄糖、酵母膏5g/L、發(fā)酵培養(yǎng)9.64d，麥角固醇產(chǎn)量較優(yōu)化前提高了247.86%，平均可達(dá)5761.83μg/100mL，約為菌體干細(xì)胞質(zhì)量的1.60%，與構(gòu)建模型的預(yù)測值(5818.39μg/100mL)接近，說明響應(yīng)面模型可很好地應(yīng)用于米根霉產(chǎn)麥角固醇的發(fā)酵條件優(yōu)化。

3.2 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示根霉菌是一株優(yōu)良的麥角固醇產(chǎn)生菌，但由于菌體生長的條件與麥角固醇合成的條件不一致，未能考慮菌體生長對產(chǎn)麥角固醇的影響。因此，通過對菌體生長及麥角固醇合成的其他條件，如溫度、pH值、微量元素等進(jìn)行優(yōu)化培養(yǎng)，并進(jìn)行工程菌誘導(dǎo)方面的研究，將更有利于提高米根霉菌產(chǎn)麥角固醇的能力，為工業(yè)開發(fā)應(yīng)用微生物生產(chǎn)麥角固醇具有重要意義。

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Application of Response Surface Methodology for Optimization of Liquid-State Fermentation Process for Ergosterol Production byRhizopus oryzae

WANG Cai-sheng，WANG Le-yi，GAO You-ling*，TAN Zhi-wen，YANG Zhen-feng
(College of Biological and Environmental Sciences, Zhejiang Wanli University, Ningbo 315100, China)

In order to maximize intracellular ergosterol production inRhizopus oryzaein liquid-state fermentation, nitrogen and carbon sources and fermentation time were optimized using response surface methodology. Ergosterol was determined by HPLC and the fermentation medium used was based on PDB liquid medium. The effects of carbon and nitrogen source types on ergosterol production were examined. One-factor-at-a-time experiments were conducted to analyze the effects of yeast extract,glucose and fermentation on ergosterol production. The optimum carbon and nitrogen sources were found to be glucose and yeast extract, respectively. The optimum fermentation process was achieved after 9.64 d of culture in a modified PDB liquid medium containing 3 g/L glucose and 5 g/L yeast extract. Under these conditions, the average ergosterol production was 5761.83μg /100 mL of fermentation broth, which was in agreement with the predicted value (5.818.39μg /100 mL of fermentation broth) from the model established and 247.86% higher than before the optimization. Moreover, the ratio of ergosterol to dry cell was 1.60%(100 mL liquid culture medium).

Rhizopus oryzaeZW017；ergosterol；response surface methodology

Q815；Q939.9

A

1002-6630(2012)05-0229-05

2011-02-24

浙江省科技廳重大科技專項(xiàng)(2009C12239)；寧波市科技局農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項(xiàng)目(2006C100093)

汪財(cái)生(1969—)，男，高級實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)榛钚晕镔|(zhì)提取與開發(fā)。E-mail：wangcaisheng@zwu.edu.cn

*通信作者：高有領(lǐng)(1978—)，男，講師，博士，研究方向?yàn)榘l(fā)酵工程和活性物質(zhì)開發(fā)。E-mail：gaoyol@gmail.com