谷氨酰胺促進(jìn)左半結(jié)腸切除術(shù)后大鼠殘余結(jié)腸的增殖作用

趙征紅

谷氨酰胺促進(jìn)左半結(jié)腸切除術(shù)后大鼠殘余結(jié)腸的增殖作用

趙征紅

谷氨酰胺是人體含量最豐富的非必需氨基酸，近幾年來(lái)在谷氨酰胺的代謝，免疫功能的調(diào)節(jié)作用，以及在腸外營(yíng)養(yǎng)中的應(yīng)用等方面進(jìn)行了大量研究，在腸外營(yíng)養(yǎng)谷氨酰胺對(duì)結(jié)腸的及創(chuàng)傷大手術(shù)的患者臨床上已經(jīng)嘗試性進(jìn)行應(yīng)用，但谷氨酰胺對(duì)結(jié)腸的各方面影響報(bào)導(dǎo)甚少，我們通過(guò)建立左半結(jié)腸切除的大鼠模型，觀察谷氨酰胺對(duì)大鼠殘余結(jié)腸的促進(jìn)增殖作用。

1 材料與方法

2 結(jié)果

2.1 光鏡下所見(jiàn) A正常對(duì)照組:結(jié)腸黏膜較平坦，大腸腺厚為1～5層，腺上皮細(xì)胞分裂偶見(jiàn)，可見(jiàn)杯狀細(xì)胞，少量?jī)?nèi)分泌細(xì)胞，黏膜下可見(jiàn)血管淋巴管和疏松結(jié)締組織，肌層較薄5～12層。B.手術(shù)組:結(jié)腸黏膜增厚，黏膜皺壁呈現(xiàn)半環(huán)形突起，黏膜住狀上皮間斷，不連續(xù)。大腸腺厚增厚10～20層，可見(jiàn)較多炎性細(xì)胞。漿膜層增厚，較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。C.手術(shù)添加谷氨酰胺喂養(yǎng)組:結(jié)腸黏膜顯著增厚，黏膜皺壁向腔內(nèi)突起，似乳頭狀，黏膜柱狀上皮完整，連續(xù)。大腸腺增多5～12層，內(nèi)分泌細(xì)胞，杯狀細(xì)胞明顯增多，分裂細(xì)胞顯著增多，黏膜下層無(wú)差異，肌層增厚15～25層。

2.2 結(jié)腸黏膜細(xì)胞DNA含量測(cè)定

表1

3 討論

3.1結(jié)腸在結(jié)腸切除術(shù)后有代償 實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，術(shù)后10 d組大鼠和正常組相比較，光鏡下見(jiàn)殘余結(jié)腸黏膜略增厚，呈現(xiàn)半環(huán)狀凸起，以半杯狀細(xì)胞增多為主，黏膜下層肌層無(wú)明顯差異。肌層及漿膜層有較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。分子生物學(xué)檢測(cè)測(cè)定殘余結(jié)腸黏膜DNA含量，手術(shù)組略高于正常組，表明結(jié)腸黏膜處于增殖狀態(tài)，術(shù)后殘留結(jié)腸不能適應(yīng)機(jī)體的需要，已經(jīng)發(fā)生了代償性改變，另外，術(shù)后組大鼠結(jié)腸黏膜有炎癥表現(xiàn)，也是手術(shù)后肌體必然的反應(yīng)。

3.2 谷氨酰胺對(duì)結(jié)腸代償有促進(jìn)作用 術(shù)后添加谷氨酰喂養(yǎng)組和術(shù)后組相比較，結(jié)腸黏膜DNA含量明顯增高，光鏡下黏膜厚度增高，黏膜柱狀上皮完整，連續(xù)，黏膜皺壁呈乳頭狀凸起，以杯狀細(xì)胞增多為主。其內(nèi)可見(jiàn)較多核分裂細(xì)胞，肌層及漿膜層正常，炎性細(xì)胞少見(jiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明大鼠左半結(jié)腸切除術(shù)后殘余結(jié)腸即發(fā)生了適應(yīng)性代償改變，但改變速率有限，外源性給予谷氨酰胺可明顯促進(jìn)這一適應(yīng)性代償改變。可能機(jī)制如下:⑴谷氨酰胺是蛋白質(zhì)，核酸等合成的重要前體，并為腸黏膜細(xì)胞提供能源，促進(jìn)結(jié)腸黏膜增殖。⑵術(shù)后早期適量的給予外源性谷氨酰胺，可以減少骨骼肌蛋白的分解加速，迅速補(bǔ)充血漿組織中谷氨酰胺，減少谷氨酰胺缺乏引起的腸黏膜萎縮，腸通透性增加，細(xì)菌移位，繼發(fā)腸源性感染，結(jié)腸內(nèi)細(xì)胞菌較多保持完整的結(jié)腸屏障功能很有意義。⑶谷氨酰胺可為生產(chǎn)Slg-A的漿細(xì)胞提供能源，從而降低腸道細(xì)菌對(duì)腸黏膜的附著和種植，保護(hù)了腸道免疫系統(tǒng)。

3.3 谷氨酰胺應(yīng)用前景遠(yuǎn)大 結(jié)腸性疾病較多 ，如先天性巨結(jié)腸，結(jié)腸炎，結(jié)腸癌等，治療較為棘手，在小兒外科領(lǐng)域，先天性巨結(jié)腸(無(wú)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥)性病率較高。國(guó)內(nèi)資料為1∶4000(0.26%)，并有逐年增加的趨勢(shì)，該病病理改變主要是結(jié)腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢中沒(méi)有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，臨床上以反復(fù)腹脹，便秘為主要癥狀，易并發(fā)小結(jié)腸炎，腸穿孔，水中毒等并發(fā)癥，先天性巨結(jié)腸不經(jīng)治療死亡率高達(dá)93%，很少活到成年，盡可能切除病變腸管是最好的治療辦法，也就是行根治性手術(shù)，近年來(lái)腹腔鏡手術(shù)，經(jīng)肛門(mén)根治術(shù)的推廣，已大大減少了患兒的痛苦和手術(shù)死亡率，但由于左半結(jié)腸甚至大部分結(jié)腸被切除，術(shù)后常常出現(xiàn)頑固性腹瀉，水電解質(zhì)紊亂，肛門(mén)濕疹，術(shù)后小腸結(jié)腸炎及生長(zhǎng)發(fā)育尺緩等并發(fā)癥，極難糾正。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)動(dòng)物模型驗(yàn)證了結(jié)腸在結(jié)腸切除術(shù)后雖有代償，但速率有限，谷氨酰胺對(duì)結(jié)腸代償有明顯的促進(jìn)作用。谷氨酰胺對(duì)結(jié)腸免疫系統(tǒng)的影響有待下一步研究，對(duì)術(shù)后小腸結(jié)腸炎的發(fā)生將有更重要的作用。

130051長(zhǎng)春市兒童醫(yī)院新生兒外科

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的制備 藥物谷氨酰胺顆粒劑(Glutamine Granules)為重慶藥友制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品(批號(hào)國(guó)準(zhǔn)字H20020054)。實(shí)驗(yàn)選用雄性Wistar大鼠(長(zhǎng)春高新開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供)隨機(jī)分三組，A正常對(duì)照組B左半結(jié)腸切除術(shù)組C左半結(jié)腸切除術(shù)后添加谷氨酰胺喂養(yǎng)組，術(shù)后每日谷氨酰胺顆粒(0.075 g)，溫水調(diào)勻口服。每組12只。

1.2 標(biāo)本制作 完成喂養(yǎng)10 d后，處死大鼠，取距回腸盲部2 cm全部結(jié)腸，剝離結(jié)腸黏膜組織稱重量。

1.3 標(biāo)本檢測(cè)

1.3.1 光鏡觀察 標(biāo)本用Camoy液固定，常規(guī)酒精脫水，石蠟包埋切片，厚度為6 μm，常規(guī)HE染色。

1.3.2 結(jié)腸黏膜DNA含量測(cè)定 動(dòng)物組織DNA提取試劑盒(由北京鼎國(guó)生物技術(shù)發(fā)展中心提供)，將所測(cè)的DNA通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)，測(cè)取OD260值。

所測(cè)結(jié)腸黏膜細(xì)胞DNA含量

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用ANOVA方差分析。組間用Bon-ferronic方法差異性檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)計(jì)算采用STAT軟件，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。