不同的存放溫度及時間下網織紅細胞計數結果的分析

盤國雄 梁燕媚 謝中興

不同的存放溫度及時間下網織紅細胞計數結果的分析

盤國雄 梁燕媚 謝中興

目的探討血液標本存放溫度和存放時間對網織紅細胞計數結果的影響。方法對80例健康成人標本按六個不同時間段進行網織紅細胞計數的測定，得出測定結果。結果網織紅細胞計數結果隨著標本的存放溫度和時間不同測定結果降低各異。結論血液標本的存放溫度和時間對網織紅細胞計數結果影響較大，在臨床檢驗工作中應引起重視。

網織紅細胞;活體染色;溫度;時間

影響網織紅細胞計數結果的因素很多，包括染液的性質，染色的溫度、時間及標本的存放條件和時間等。尤其是標本的存放溫度和時間對網織紅細胞計數結果影響較大。為了探討標本不同的存放條件和存放時間對網織紅細胞計數結果造成的影響，筆者采集了80名健康成人靜脈血。對同一人份靜脈抗凝血分別在4℃、室溫(22℃～28℃)和37℃條件下存放2 h、4 h、8 h、24 h、48 h，然后分別用新亞甲藍加醇溶液進行活體染色［1］。在油鏡下計數1000個紅細胞中網織紅細胞數，分析標本在不同的保存條件下對網織紅細胞計數結果的影響。

1 材料與方法

1.1 材料來源80名健康成人靜脈抗凝血，用EDTA-Na2抗凝。

1.2 對同一人抽取靜脈抗凝血分三份，根據標本不同的存放條件和存放時間情況，先對標本進行室溫平行后再檢測。

2 結果

2.1 實驗結果(表1)。

表1 不同存放溫度和時間網織紅細胞計數結果(±s，%)

表1 不同存放溫度和時間網織紅細胞計數結果(±s，%)

溫度時間(h) 2 4 8±0.16 4℃1.24±0.191.17±0.241.13±0.250.94±0.140.66±0.18 37℃1.26±0.251.05±0.220.82±0.170.49±0.12 8 2448室溫1.21±0.271.16±0.320.93±0.180.67±0.150.3 0.23±0.13

在室溫(22-28℃)條件下存放8 h內與4℃條件下存放24 h內網織紅細胞計數結果無顯著差異(P＞0.05)。置于37℃條件下超過8 h網織紅細胞結果偏低，涂片沉渣多，背景臟，無網狀結構網織紅細胞。無論置于何種條件下的標本都會隨著時間的延長而致網織紅細胞結果逐漸偏低。因此作網織紅細胞計數應在2 h內進行其效果最佳，而37℃條件下存放應不超過4 h。

2.2 三種溫度條件下的相應時間點的計數結果比較，在2 h、4 h內各組的計數結果差異無統計學意義(P＞0.05)，其他相同時間點的計數結果均有差異(P＜0.05)。37℃試驗組中最小值位于24 h和48 h，在相同的時間點中與室溫及4℃條件下結果存在顯著性差異(P＜0.05)，37℃存放24 h、48 h時計數結果明顯低于室溫及4℃條件下的計數結果(見表1)。

3 討論

網織紅細胞檢測是臨床上多種血液疾病的參考指標，例如對慢性貧血和缺鐵性貧血的鑒別有一定的價值［2］，白血病患者網織紅細胞較正常人偏低［3］等。網織紅細胞是一種尚未完全成熟的紅細胞，胞漿內尚存在嗜堿性的RNA物質與新亞甲藍活體染色后呈藍色的網狀及點狀結構。網織紅細胞計數結果數量的變化能間接反映骨髓的造血功能，根據有關文獻報告，在正常生理情況下，骨髓釋放到外周血中的網織紅細胞成熟時間需2 d，在本試驗中可見部分網織紅細胞其胞質中的RNA在37℃條件下存放1 d后即消失。由此可見其胞質中的RNA隨著網織紅細胞成熟的時間推移即逐漸消失，尤其是標本保存在接近人體溫度的37℃環境中放置的時間趆長其RNA消失的速度趆快。標本置于37℃條件下4 h內其網織紅細胞計數結果并未見明顯下降，但在放置8 h后網織紅細胞計數結果降低較快，放置時間超過24 h后網織紅細胞計數結果則降低明顯，由此可見在37℃條件下存放時間超過8 h的血液標本已不適合作網織紅細胞計數。而在室溫與4℃條件下存放的標本在8 h內網織紅細胞計數結果未見明顯異常，可見隨著保存溫度的降低其保存時間越長。特別是在4℃條件下其保存時間更長，保存時間超過24 h后其網織紅細胞計數結果也未見明顯下降，其原因是網織紅細胞在低溫環境中其細胞代謝減慢，因此RNA消失較慢。因此日常工作中作網織紅細胞計數檢測應在2 h內進行其效果最佳，在37℃條件下存放應不超過4 h，在室溫條件下存放不應超過8 h，而在4℃條件下保存期最長，但也不能超過24 h。綜上實驗結果，筆者認為對于一些不能及時檢測的標本應保存在4℃條件下，并在24 h內檢測完畢為宜。

［1］秦德柱，關國坤，王鳳仁.網織紅細胞染色方法的改進．中華醫學研究雜志，2003，3(1):72．

［2］褚靜英，陸玉霞，羽曉瑜，等.抗凝劑對網織紅細胞檢測的影響．中國醫藥導報，2009，6(19):115-116．

［3］邱麗君，高瑞香，許穎彬.急性白血病化療患者未成熟網織紅細胞指數的臨床觀察．中國醫學檢驗雜志，2005，6(1):34-35．

ObjectiveTo explor the storage time of blood specimen that influence the Reticulocyte Count results.MethodsDetect the Reticulocyte Count of blood specimen which from 80 healthy adults on five different period，and get results.ResultsIt appeared different declining Reticulocyte Count results depend on different storage temperature and time ConclusionThe storage temperature and time of blood specimen was biggish influence to the Reticulocyte Count results，which in the clinical inspec-tion work should be taken seriously．

Reticulocyte;Living dyeing;Temperature;Time

526060肇慶市第二人民醫院

1.3試劑制取染液(新亞甲藍加醇溶液):第I組溶液-取0.9%生理鹽水80 ml與30 g/L枸櫞酸鈉20 ml，混勻，稱取1.2 g新亞甲藍溶于其中，過濾備用;第Ⅱ組溶液-異丙醇乙醇溶液按1:1混合，新制備的醇溶液備用。將第I和Ⅱ組溶液按9:1混合，充分混勻，置棕色瓶內［1］備用。

1.4 方法將置于4℃、室溫和37℃條件下擺放2 h，4 h，8 h，24 h，48 h后的靜脈抗凝血分別加入試管中(染液及靜脈抗凝血按1:1混合)在37℃條件下與新亞甲藍加醇溶液進行活體染色10 min，然后分別取各支試管內的混懸液推成薄片待干，在紅細胞分布均勻的區域內油鏡下計數1000個紅細胞中網織紅細胞的數量。每個樣本重復2次，取其平均值。

1.5 統計學方法應用SPSS16.0統計軟件分析處理，各組間網織紅細胞計數結果的總體比較采用方差分析，以P＜0.05上個月統計學意義。