HPLC法測定膽酸止咳片中膽酸的含量

張 潔，白 娟，李成網(wǎng)

（安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，安徽 合肥 230061）

膽酸止咳片是一種由粗膽酸、陳皮、甘草等中藥組成的傳統(tǒng)中藥制劑，臨床使用已有多年的歷史，具有止咳化痰之功效，用于治感冒引起的咳嗽，療效顯著。關(guān)于膽酸的含量測定報(bào)道較少［1-3］，且多是用比色法，操作復(fù)雜，誤差較大。現(xiàn)采用HPLC法測定膽酸含量，簡便、快速、重現(xiàn)性好，可作為膽酸止咳片的定量分析方法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜儀；UV996紫外檢測器；AD-2型百萬分之一電子天平；BP210S型萬分之一電子天平；AS3120型超聲波清洗器；膽酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100078-200414）；甲醇（色譜純）；水（重蒸水）；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用反向高效液相法測定本品中的膽酸含量［4，5］。色譜柱：Shim Pack CLC ODS C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水-磷酸（38：62：0.1）；檢測波長：208nm；柱溫：25℃；流速：1.0mL×min-1；進(jìn)樣量：20μL。在此條件下進(jìn)行樣品分析，供試品溶液中的膽酸與其他雜質(zhì)峰分離良好，保留時(shí)間在25min左右，分離度大于1.5。

2.2 線性范圍考察

精密稱取膽酸對照品適量，加甲醇制成4.105mg／mL的對照品溶液，分別精密吸取1.25、2.50、5.00、7.50mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。依法測定，峰面積積分值分別為：84466、166931、343615、506738、691137。以膽酸峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為 Y＝168277X-4080.6，r＝0.9998。結(jié)果表明，膽酸濃度在0.513～4.105mg／mL范圍內(nèi)與峰面積之間呈良好線性關(guān)系。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率300W，頻率50Hz）30min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 干擾試驗(yàn)

取處方中除粗膽酸外的全部藥味，按成品工藝及供試品溶液的制備方法制備空白對照品溶液，按正文擬定方法進(jìn)行測定，結(jié)果表明：在膽酸保留時(shí)間處，無其他成分干擾。見圖1。

圖1 膽酸HPLC圖譜

2.5 儀器精密度考察

精密吸取同一份供試品溶液（批號：091201），重復(fù)進(jìn)樣，結(jié)果峰面積積分值依次為：351280、354819、355865、353464、350060，RSD為0.68%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察

取同一份供試品溶液（批號091201），分別在制備后0、2、4、6、8h后依法測定膽酸的峰面積，結(jié)果峰面積積分值依次為：362473、361279、363010、355794、348026，RSD 為1.77%。結(jié)果表明：供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批樣品（批號091201），依法平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)行測定，計(jì)算膽酸的含量，結(jié)果測得含量分別為61.13mg／片、59.63mg／片、60.37mg／片、59.00mg／片、60.68 mg／片，平均含量為60.16mg／片，RSD為1.41%。結(jié)果表明：該方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收方法，精密稱取重現(xiàn)性樣品6份，每份0.25g，精密稱定，分別置50mL量瓶中，分別精密加入一定量的膽酸對照品，再加甲醇適量（約40mL），超聲處理30min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果

結(jié)果表明：正文擬定方法具有良好的回收率。

2.9 樣品的測定

取三批樣品，分別依法測定，計(jì)算膽酸的含量，結(jié)果膽酸含量分別為60.16mg／片、57.53mg／片、53.39mg／片。

3 討論

3.1 測定波長的選擇

精密稱取膽酸對照品102.63mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（每1mL含膽酸4.105mg），用島津UV-240可見紫外分光光度計(jì)在300～190nm波 長 范 圍 進(jìn) 行 光 譜 掃 描［1］，結(jié) 果 在200nm 和208nm處有最大吸收，由于在200nm處溶劑干擾大，故選擇208nm為測定波長。

3.2 供試品溶液的制備

膽酸可溶于甲醇、乙醇，由于本片為片劑，含有一定量的淀粉，故選用對淀粉溶解性較小的甲醇提取膽酸。在確定供試品溶液的制備方法時(shí)，對回流提取和超聲提取兩種方法進(jìn)行了比較，并對提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超聲提取30min不僅方法簡便且提取完全，故最后確定供試品溶液的制備選擇用甲醇超聲30min。

［1］陳琦.紫外分光光度法測定牛黃上清膠囊中膽酸的含量［J］.中國醫(yī)藥指南，2010，8（20）：183-184.

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