紫外分光光度法測定弱視明口服液中總多糖含量

梁學政，唐勇琛，呂建偉，陳惠紅，陸玉婷

(1.廣西壯族自治區柳州市中醫院，廣西 柳州 545001;2.廣西中醫學院研究生學院2008級研究生，廣西 南寧 530001)

弱視明口服液是廣西柳州市中醫院通過臨床實踐研制出的純中藥制劑，由熟地黃、黃精、枸杞子、陳皮、石菖蒲等6味中藥組方，具有益腎填精、養肝明目、開竅寧神之功效，用于兒童神經發育不良、近視、遠視、散光等造成的弱視。現代藥理學研究證明，熟地黃多糖具有滋陰、益智、增強人體造血機能、調節免疫等作用[1]，黃精多糖可調節血糖、提高人體免疫功能、抗疲勞等[2]，枸杞子多糖可提高人體免疫功能、降糖調脂、抗疲勞、抗衰老、保肝等[3]，因此，多糖為該制劑的主要有效成分之一。筆者采用苯酚-硫酸法[4-8]對弱視明口服液中的總多糖進行含量測定，為更深入地研究弱視明口服液提供依據。

1 儀器與試藥

UV-1601型紫外-可見分光光度計(日本島津公司);電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司);CQX25-6型超聲波清洗機(中國北京創新德超聲電子研究所);KR80-2型沉淀離心機(上海分析儀器廠)。D-無水葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110833-200904);弱視明口服液(柳州市中醫院藥劑科自制，批號為 20110513，20110514，20110515);苯酚、濃硫酸等其他試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法和結果

2.1 溶液制備

取苯酚100 g，加鋁片0.1 g、碳酸氫鈉0.05 g混合，常壓蒸餾，收集182℃餾分，稱取該餾分5.0 g，置100 mL容量瓶中，加新鮮蒸餾水稀釋至刻度，搖勻后置棕色試劑瓶中，即得5%苯酚溶液，冷藏，避光保存。精密稱取經105℃干燥至恒重的 D-無水葡萄糖對照品40.4 mg，置100 mL量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為0.404 g/L的葡萄糖對照品溶液。精密吸取弱視明口服液1 mL，加水稀釋至50 mL，從中另取2 mL蒸干，80%乙醇洗滌，離心(3 000 r/min)10 min，傾去上清液，用80%乙醇洗滌兩次，再用水溶解沉淀，合并殘留在蒸發皿上的沉淀一并過濾，收集濾液后，稀釋并定容至100 mL容量瓶中，即得供試品溶液。

2.2 檢測波長確定

分別吸取一定量的葡萄糖對照品溶液，顯色后在280～600 nm波長范圍內掃描。結果葡萄糖對照品和供試品的最大吸收峰位一致，均在490 nm波長處有最大吸收。因此，本試驗選用490 nm作為檢測波長。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取葡萄糖對照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。分別精密吸取以上溶液各2.0 mL，置具塞試管中，加5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，迅速沿壁加入濃硫酸5.0 mL混勻，40℃水浴加熱20 min，置冷水浴中冷卻至室溫，在490 nm波長處測定吸光度(另用純化水隨行做空白試驗)。以葡萄糖質量濃度(X)為橫坐標、吸光度(A)為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 A=15.571X+0.026，r=0.999 8(n=6)。結果表明，葡萄糖質量濃度在0.008 08～0.048 48 g/L范圍內與吸光度呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一葡萄糖對照品溶液2 mL，置25 mL試管中，依法重復測定5次。結果的 RSD=0.25%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一供試品溶液2 mL，置25 mL試管中，依法在120 min內重復測定9次，每隔15 min測定1次。結果平均吸光度為0.314 5，RSD=0.15%(n=9)，表明供試品溶液中總多糖在120 min內穩定性良好。

重復性試驗:精密吸取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果的 RSD=0.60%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密吸取6份已知含量的樣品溶液(以葡萄糖計量為0.027 7 g/L)各1 mL，再準確加入1 mL已知質量濃度的 3 組葡萄糖對照品溶液(0.023 1，0.026 0，0.033 1 g/L)，混勻。取混勻液依法測定含量，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 總多糖加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密吸取3批樣品1 mL，依法制備供試品溶液并測定，用外標法計算口服液中總多糖含量(以葡萄糖計)。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

3 討論

目前，由于國內實驗室條件的限制，苯酚-硫酸法被廣泛應用于多糖的含量測定[4-8]。多糖在被濃硫酸水合時，產生的高溫使其迅速水解成單糖，反應迅速完全，并能迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚縮合成有色化合物，在490 nm波長處有特征吸收，且形成顏色的深淺與其含量成正比。故可采用分光光度計測定其吸光度，然后通過葡萄糖標準曲線計算總多糖的含量。

另外，試驗樣品用80%乙醇處理，消除了親脂性雜質、單糖、低糖和苷類成分的干擾，故可純化多糖。

[1]馮建明，趙 仁.三種地黃炮制品現代研究進展[J].云南中醫學院學報，2000，23(4):41.

[2]陳 曄，孫曉生.黃精的藥理研究進展[J].中藥新藥與臨床藥理，2010，21(3):328.

[3]陳慶偉，陳志桃.枸杞多糖藥理作用研究進展[J].海峽藥學，2005，17(4):5.

[4]孫成宏，王彩云，張 遙，等.苯酚-硫酸顯色法測定復方紅景天片中總多糖的含量[J].河北中醫，2010，32(7):1 060.

[5]范彥博，何 翔，顧施健，等.紫外分光光度法測定香菇調脂膠囊中香菇總多糖含量[J].醫藥導報，2010，29(9):1 024.

[6]王宏潔，李鵬躍，劉 婷，等.苯酚-硫酸法測定清開靈注射液中總多糖的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2009，15(11):3.

[8]李 輝，羅佳波.苯酚-硫酸法測定圍樂顆粒中總多糖的含量[J].中國藥房，2008，19(9):685.