PTEN和p53在宮頸浸潤(rùn)癌和癌前病變組織中的表達(dá)及意義

商素潔 邱建敏 商華

PTEN(phosphatase and tension homologue deleted on chromosome ten)是新發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因［1］。近幾年來，其在上皮性腫瘤尤其是肺、消化道腫瘤、子宮內(nèi)膜癌中的研究越來越多，但在宮頸癌中的研究較少。PTEN基因與宮頸癌的關(guān)系密切，故檢測(cè)宮頸癌PTEN的表達(dá)有助于其診斷和預(yù)后的評(píng)估。突變型p53在惡性腫瘤中常呈過度表達(dá)，研究認(rèn)為p53的突變可通過PTEN的缺失或下降導(dǎo)致癌變。本研究擬通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)慢性宮頸炎、CIN和浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組織中PTEN的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)宮頸癌P53的表達(dá)，進(jìn)一步闡明PTEN基因的缺失和p53的過度表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，為宮頸癌的早期診斷與治療、防止復(fù)發(fā)、改善預(yù)后提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選擇2000年1月至2006年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院病理科保存的石蠟包埋宮頸病變組織110例，包括慢性宮頸炎組織30例，宮頸上皮內(nèi)瘤變CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)組織分別為25例、15例、10例，浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組織30例(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期各10例)，患者年齡25～73歲，平均年齡35．5歲，患者取標(biāo)本前均未接受放、化療及免疫治療，所有組織標(biāo)本均由兩名病理醫(yī)師診斷。宮頸癌的臨床分期采用國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年修訂的臨床分期。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法 小鼠抗人PTEN單克隆抗體、p53單克隆抗體，通用型PV-6000二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，應(yīng)用二步法免疫組化方法，按說明書操作。

1．3 免疫組化結(jié)果判定 PTEN及p53陽性染色位于細(xì)胞核，呈淡黃色至棕黃色顆粒。根據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)量將陽性表達(dá)分為3級(jí):(1)弱陽性(+):陽性細(xì)胞比例＜10%或顯色強(qiáng)度為淡黃色;(2)強(qiáng)陽性(+++):陽性細(xì)胞比例＞60%，多數(shù)細(xì)胞呈棕黃色;(3)中度陽性(++):陽性細(xì)胞比例及顯色強(qiáng)度介于弱陽性與強(qiáng)陽性之間。陰性即染色強(qiáng)度與背景無明顯差別。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 PTEN在不同宮頸組織中的表達(dá) 在上述組織中，PTEN陽性表達(dá)率依次分別為 100%、92．00%、73．33%、40．00%、36．67%。上述組織中，PTEN陽性表達(dá)率逐漸下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。CINⅡ、CINⅢ、浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組分別和慢性宮頸炎組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);CINⅢ、浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組分別與CINⅠ組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01);CINⅡ組與浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);CINⅢ組與浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0．05)。見表1。

表1 PTEN在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組織中的表達(dá) 例

2．2 臨床病理分期與PTEN及p53表達(dá)的關(guān)系 PTEN的表達(dá)與宮頸鱗癌病理分期有關(guān)(P＜0．05)，30例宮頸癌p53表達(dá)陽性17例，占56．67%。PTEN基因表達(dá)缺失有19例，占63．33%。見表 2。

表2 臨床病理分期與PTEN及p53表達(dá)的關(guān)系

2．3 宮頸癌中PTEN與p53的關(guān)系 p53陽性的17例中PTEN下降或缺失24例，占70．83%;而 p53陰性的13例中PTEN下降或缺失8例，占61．54%;兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0．05)。

3 討論

宮頸癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，我國(guó)每年新增宮頸癌患者13．51萬左右，僅次于乳腺癌。PTEN是1997年被發(fā)現(xiàn)并克隆的抑癌基因，定位于人類染色體10q23．3，是繼p53之后發(fā)現(xiàn)的第二個(gè)突變率較高的抑癌基因，異常表達(dá)于膠質(zhì)細(xì)胞瘤、前列腺癌、乳癌、內(nèi)膜樣癌等［2，3］，目前國(guó)內(nèi)外對(duì) PTEN 在宮頸癌中的相關(guān)性研究較少，且結(jié)果不一［4，5］，本研究應(yīng)用免疫組化方法對(duì)110例宮頸病變組織進(jìn)行檢測(cè)PTEN、p53蛋白表達(dá)，進(jìn)一步探討其在宮頸鱗癌及宮頸病變組織中的表達(dá)及意義。

目前研究認(rèn)為，PTEN在慢性宮頸炎組織和正常宮頸組織中的表達(dá)沒有明顯區(qū)別。王喜梅等［6］對(duì)24例慢性宮頸炎組織進(jìn)行研究，PTEN陽性表達(dá)率為79．2%。CIN是與宮頸浸潤(rùn)癌密切相關(guān)的一組癌前病變，它反映宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的連續(xù)過程，但并不是所有的CIN均會(huì)發(fā)展為宮頸癌。如何能及早發(fā)現(xiàn)對(duì)人類威脅較高的CIN是宮頸癌早期預(yù)防的關(guān)鍵。本研究結(jié)果表明，在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ組織中，PTEN陽性表達(dá)率逐漸下降(100%、92．00%、73．33%、40．00%)，并且慢性宮頸炎組分別和CINⅡ、CINⅢ組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，而CINⅡ組和CINⅢ組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，說明在宮頸上皮內(nèi)瘤變形成過程中，PTEN改變扮演了重要角色，而且PTEN改變是發(fā)生在宮頸上皮內(nèi)瘤變形成過程的早期過程。

本結(jié)果表明，與慢性宮頸炎組織相比，浸潤(rùn)性宮頸鱗癌組織中PTEN陽性表達(dá)率明顯下降，提示PTEN改變與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組中發(fā)現(xiàn)均有PTEN表達(dá)缺失，CINⅠ組發(fā)生率較低，可能說明PTEN的缺失在癌前病變?cè)缙陔A段就已開始，故可能是腫瘤發(fā)生的早期階段。本研究還發(fā)現(xiàn)，PTEN的表達(dá)缺失率隨宮頸CIN級(jí)別的增高而增高，在CINⅠ中缺失率僅為8．0%，而CINⅡ、CINⅢ組的缺失率分別為26，67%和60%，其中CINⅡ、CINⅢ組的缺失率與慢性宮頸炎組織比較差異有顯著性意義，說明PTEN改變發(fā)生在宮頸癌變過程的早期，PTEN有望作為宮頸鱗癌早期篩查的指標(biāo)。

野生型p53突變失去抑制腫瘤的作用，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的事實(shí)已較為肯定，本研究宮頸癌中p53過表達(dá)為56．67%，明顯高于慢性宮頸炎的4．7%，表明突變P53蛋白在促進(jìn)宮頸粘膜上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中起一定作用。這一結(jié)果與許多研究結(jié)果［7］一致，提示在臨床檢測(cè)P53蛋白的表達(dá)可以用于預(yù)測(cè)宮頸癌和輔助診斷宮頸癌。本研究中，p53陽性的宮頸癌中PTEN缺失為70．83%，而p53陰性PTEN的缺失占61．54%，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，說明p53的致癌途徑除了引起PTEN的改變外，還有許多其他通路。因此說明PTEN在宮頸鱗狀細(xì)胞癌的早期發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。PTEN的失活和p53的過表達(dá)是宮頸鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)，兩種蛋白聯(lián)合檢測(cè)有助于臨床預(yù)測(cè)和診斷宮頸癌。

1 Steck PA，Pershouse MA，Jasser SA，et al．Identifica-tion of a candidate tumor suppressor gene，MMAC1，at chromosome 10q23．3 that is mutated in multiple advanced cancers．Nat Genet，1997，15:356-362．

2 Tsugawa K，Jones MK，Sugimachi K，et al．Biological role of phosphatase PTEN in cancer and tissue injury healing．Front Biosci，2002，7:245．

3 Mutter GI，Lin MC，F(xiàn)itzgerdd JT，et al．Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earliest endometrial pre-cancers．Natl cancer Inst，2002，92:924．

4 Myers MP，Pass I，Batty IH，et al．The lipid phoshatase activity of PTEN is critical for its tamor suppressor function．Proc Natl Acad Sci USA，1998，95:113513-13518．

5 Yaginuma Y，Yamashita T，Ishiya T，et al．Abnormal structure and expression of PTEN/MMAC1 gene in human uterine cancers．Mol Carcinog，2000，27:110-116．

6 王喜梅，劉逢吉，孫雷，等．PTEN和survivin在 宮頸腺癌中的表達(dá)及其與HPV16/18感染的關(guān)系，2006，26:847-849．

7 趙溫利，溫培娥，崔樹齡，等．人乳頭狀癌病毒感染、P53基因突變與宮頸癌的相關(guān)性研究．山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，36:1-4．