薄層掃描法測定咽速康氣霧劑中膽酸的含量

黃榮增，蘇 超，張麗君 (湖北中醫藥大學藥學院，湖北 武漢 430065)

孟軍華 (武漢市第三醫院藥劑科，湖北 武漢 430060)

蘇明武 (湖北中醫藥大學藥學院，湖北 武漢 430065)

薄層掃描法測定咽速康氣霧劑中膽酸的含量

黃榮增，蘇 超，張麗君 (湖北中醫藥大學藥學院，湖北 武漢 430065)

孟軍華 (武漢市第三醫院藥劑科，湖北 武漢 430060)

蘇明武 (湖北中醫藥大學藥學院，湖北 武漢 430065)

目的：建立咽速康氣霧劑中膽酸的含量測定方法。方法：采用雙波長反射法鋸齒形薄層掃描法(λs=385nm)測定膽酸的含量。結果：膽酸在1.16～5.80μg范圍內線性關系良好(r=0.9993)，膽酸的平均加樣回收率為98.67%(RSD=1.5%)。結論：該方法準確可靠，重現性好，為咽速康氣霧劑的質量控制和評價提供了依據。

咽速康氣霧劑；薄層掃描；膽酸；質量標準

六神丸是我國傳統的咽喉良藥，由于中藥傳統丸劑具有服用量較大、生產流程長、易受微生物污染、質量難以控制等諸多缺點，因此我們在六神丸的基礎上將其改進成定位、速效、更安全的新型氣霧劑。我們參照文獻[1-4]，采用雙波長反射法鋸齒形薄層掃描法測定制劑中膽酸的含量，為控制該制劑質量提供可靠的實驗依據。

1 儀器與試藥

CS-9000雙波長飛點掃描儀(日本島津);硅膠G(青島海洋化工廠)；膽酸(供含量測定用，中國藥品生物檢定所，批號10078-0013)；咽速康氣霧劑(自制制劑)；其它試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1薄層與掃描條件

硅膠G板(規格200mm×200mm，厚度為0.3mm)，展開劑為氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸(11∶5∶2∶2)，顯色劑為30%硫酸乙醇溶液。于105℃烘至斑點清晰，干燥冷卻，上蓋玻璃板密封。掃描波長λs=385nm，λR=700nm，反射法鋸齒掃描，SX=3。

2.2對照品、供試品、陰性對照溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的膽酸對照品約1mg，精密稱定，置2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含膽酸0.58mg)。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品，除去帽蓋，冷卻至5℃，在鋁蓋上鉆一小孔，插入連有干燥橡皮管的注射針頭(勿與藥液面接觸)，橡皮管另一端放入水中，待拋射劑緩緩排出后，除去鋁蓋，精密量取藥液10ml，置圓底燒瓶內，揮干乙醇，加20%氫氧化鈉溶液40ml，加熱回流2h，放冷，加鹽酸20ml，搖勻，放冷，轉移至分液漏斗中，加乙酸乙酯振搖提取4次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對照溶液的制備 按處方比例和工藝，制成不含人工牛黃的陰性樣品溶液，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

2.3線性關系考察

吸取膽酸對照品溶液2、4、6、8、10、12μl點樣，展開，顯色，測定各斑點峰面積，以各點樣量斑點峰面積積分值對點樣量進行線性回歸，得回歸方程y=0.0001x-0.0291，r=0.9993，表明膽酸在1.16～5.80μg范圍內線性關系良好。鑒于標準曲線不過原點，采用隨行標準外標兩點法進行含量測定。

2.4精密度試驗

吸取膽酸對照品溶液5μl，在同一塊硅膠G薄層板上，點5個斑點，按上述薄層色譜和掃描條件，測定膽酸峰面積積分值，結果RSD為2.7%。

2.5重復性試驗

取本品(批號100401)，除去帽蓋，冷卻至5℃，在鋁蓋上鉆一小孔，插入連有干燥橡皮管的注射針頭(勿與藥液面接觸)，橡皮管另一端放入水中，待拋射劑緩緩排出后，除去鋁蓋，精密量取藥液10ml，5份，照上述供試品制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液3μl、對照品溶液3、6μl點在同一塊硅膠G薄層板上，按上述薄層色譜和掃描條件測定，計算樣品中膽酸含量平均值為 0.7289mg/ml。試驗結果表明，測定結果的重復性良好，RSD為2.8%。

2.6穩定性試驗

取供試品溶液3μl點于薄層板上，按上述薄層色譜和掃描條件，間隔30min測定一次，共4次，結果表明，120min內色譜斑點峰面積積分值基本不變，RSD為1.5%。

2.7加樣回收率試驗

取本品(批號100401)，除去帽蓋，冷卻至5℃，在鋁蓋上鉆一小孔，插入連有干燥橡皮管的注射針頭(勿與藥液面接觸)，橡皮管另一端放入水中，待拋射劑緩緩排出后，除去鋁蓋，精密量取藥液(含量為0.7289mg/ml)5ml，5份，置圓底燒瓶內，分別精密加入一定量的膽酸對照品，照供試品溶液制備方法制備, 按上述薄層色譜和掃描條件測定。結果(見表1)表明本法回收率為98.67%，RSD為1.5%。

表1 加樣回收試驗結果

2.8含量測定

表2 5批咽速康氣霧劑膽酸含量測定結果

取本品(批號為100401、100402、100403、100501、100502)，照上述供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，按上述薄層色譜和掃描條件測定，測得峰面積積分值，計算含量，結果見表2。

3 討 論

膽酸是方中人工牛黃所含的主要有效成分，我們以膽酸為指標，進行了薄層掃描測定方法的研究。參考有關文獻，對多種薄層色譜和掃描條件進行了考察，經試驗研究選擇氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸(11∶5∶2∶2)作為展開劑，30%硫酸乙醇溶液作為顯色劑。于105℃烘至斑點清晰，干燥冷卻，上蓋玻璃板密封。掃描波長λs=385nm，λR=700nm，反射法鋸齒掃描，SX=3。該方法簡便、準確、選擇性好、陰性無干擾，可作為該制劑的含量測定方法。

膽酸對照品易吸水,使用前應減壓干燥至恒重；膽酸多以其鹽存在于人工牛黃及其制劑中,故在供試品溶液制備時,加入20%氫氧化鈉溶液加熱回流,目的是促使其水解完全,加鹽酸酸化使萃取完全。

[1]衛生部.中國藥典(一部)[S].2005.

[2] 傅軍，周漩，高曉霞，等.薄層掃描法測定珍黃液中膽酸的含量[J]. 中國實驗方劑學雜志， 2006，12(3)：25-26.

[3]楊洪武，王崢，辛敏通，等.薄層掃描法測定人工牛黃及其制劑中膽酸的含量[J]. 中成藥，2003，25(4)：290-293.

[4]葉蓓蓓，潘莉，王棟，等.薄層掃描法同時測定人工牛黃中膽酸及豬去氧膽酸的含量[J]. 藥物分析雜志，2010，30(4)：706-709.

[編輯] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.01.032

R917

A

1673-1409(2012)01-R057-02

2011 12 08

黃榮增(1972)，男，湖北黃梅人，講師，博士，主要從事中藥復方物質基礎及作用機理研究；通訊作者：蘇明武，EmAil：sumingwu@126.Com。