245例宮腔內人工授精夫婦染色體核型分析

陳志恒 孫 玲 全吳敏廣州市婦女兒童醫療中心生殖醫學中心，廣東廣州 510623

245例宮腔內人工授精夫婦染色體核型分析

陳志恒 孫 玲 全吳敏廣州市婦女兒童醫療中心生殖醫學中心，廣東廣州 510623

目的 探討染色體核型多態性對夫精人工授精 （AIH）妊娠結局的影響。 方法 對245對接受夫精人工授精（AIH）治療的夫婦行外周血染色體核型分析，分析核型多態性與夫精人工授精治療結局的關系。 結果 檢出染色體異常核型和染色體多態性49例 （發生率為10.0%），包括平衡易位2例 （0.41%），4號、9號染色體臂間倒位15例（3.06%），Y染色體多態性2例（0.41%），其他染色體多態性30例（6.12%）。染色體核型正常組與染色體臂間倒位組比較，AIH周期臨床妊娠率無差異（P＞0.05），染色體核型正常組與常染色體多態性組比較，周期臨床妊娠率有差異（P＜0.05）。 結論染色體臂間倒位對人工授精臨床妊娠率無明顯影響，常染色體多態性對AIH妊娠率并無負面影響。

染色體；染色體多態性;人工授精

不孕不育是婦科常見病，可由多種因素引起，其中染色體異常是重要原因之一，因此為了子代的安全，在實施輔助生育技術治療前會對患者夫婦進行細胞遺傳學檢查。其中發現部分為染色體核型異常和染色體多態性患者，這些染色體異常和多態性對采用輔助生育技術后的妊娠率和妊娠結局有何影響越來越受到醫學界的重視。染色體多態性是指生物物種之內個體之間的正常變異，表現在結構及帶型強度的變異，傳統理論認為此區無遺傳信息傳遞，發生變異后一般不會引起臨床表型異常，多年來各國學者均認為染色體多態性與生殖異常無明確關系。然而，許多臨床醫生發現不少染色體呈多態性的個體存在生殖異常[1]。由此，為了探討染色體核型異常和多態性對夫精人工授精（AIH）妊娠率和妊娠結局的影響，本文對本生殖中心245對行夫精人工授精治療的夫婦的細胞遺傳學檢查結果以及實施人工受精后的妊娠率和妊娠結局進行統計，現匯報如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2004年1月～2009年11月在我院生殖中心就診的245對不孕患者夫婦，其中，原發不孕147例，占60.0%，繼發不孕98例，占40.0%，女方平均年齡（32.2±4.0）歲，男方平均年齡（34.7±4.5）歲，平均不孕年限（4.5±3.1）年。治療前男女雙方均按衛生部相關要求進行排查，符合人工授精適應癥，均無人工授精禁忌證，245對夫婦共行人工授精422個周期。

1.2 方法

1.2.1 中期染色體G顯帶分析 患者夫婦雙方術前檢查時常規行染色體檢查，取外周血抗凝，接種于1640培養基，37℃培養72 h，常規制片、G顯帶觀察，必要時行C顯帶、R顯帶。每例計數30個中期核型，分析3個核型。如疑嵌合體，計數100個中期分裂相。

1.2.2 夫精人工授精 卵泡監測和人工授精時機：①自然周期：于月經第10～12天開始經陰道B超監測卵泡發育，當優勢卵泡徑線達到14 mm以上時，結合尿LH監測，出現尿LH峰后12～36 h行人工授精。②克羅米芬促排卵周期：于月經第五天給予克羅米芬50～100 mg/d，連續5 d，停藥2 d后開始監測卵泡，視卵泡發育情況可加用人絕經期促性腺激素（HMG，珠海麗珠醫藥有限公司）75～150 IU/d，卵泡直徑達20 mm時給予HCG 5 000～10 000 IU肌注，24～36 h后行人工授精IUI。③hMG組：在月經周期的第3～5天開始注射hMG，150 IU/d，連續5 d，然后根據卵泡發育調整劑量直到成熟后停藥。當LH峰出現或卵泡直徑平均達18 mm時，注射hCG 5 000～10 000 IU，24～36 h 后行人工授精。

1.3 妊娠的判斷標準

人工授精術后14 d通過血β-HCG檢測確定是否妊娠。妊娠者術后5周B超檢查了解胚胎情況，可見妊娠囊、卵黃囊、胚芽及胎心搏動者為臨床妊娠。

1.4 統計學方法

采用SPSS 13.0統計軟件進行數據統計分析，臨床妊娠率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 染色體異常和多態性的發生率

245 對不孕癥夫婦雙方共檢查出染色體異常核型和染色體多態性49例 （10.0%），包括平衡易位2例 （0.41%），4號、9號染色體臂間倒位15例 （3.06%），Y染色體多態2例（0.41%），其他染色體多態性30例（6.12%），其詳細分類妊娠情況見表1。

2.2 染色體核型對夫精人工授精結局的影響

199 對染色體核型正常夫婦共經過352個AIH治療周期，臨床妊娠52例，臨床妊娠率為14.77%。46對夫婦檢出核型異常、染色體臂間倒位和多態性共49例。其中2對夫婦檢出2例染色體平衡易位（配偶單方為平衡易位，另一方核型正常），共行2個周期AIH均未孕。另有13對夫婦檢出4號和9號染色體臂間倒位15例，其中有2對夫婦同時為9號染色體臂間倒位，1對夫婦男方為Y染色體多態攜帶者，女方為9號染色體臂間倒位攜帶者（這對夫婦AIH周期統計歸入染色體臂間倒位組），這13對夫婦共行AIH 21周期，臨床妊娠2例，臨床妊娠率為9.52%，與核型正常組比較臨床妊娠率無差異（P＞0.05）。還有1對夫婦男方為Y染色體多態攜帶者行2個周期AIH均未孕。30例其他常染色體多態夫婦共行45個AIH周期，臨床妊娠13例，臨床妊娠率為28.89%，與正常染色體組相比臨床妊娠率有差異（P＜0.05）。

3 討論

3.1 平衡易位對AIH妊娠率的影響

平衡易位攜帶者由于沒有造成染色體片段的增加和減少，一般個體表型正常，但由于其配子多為不平衡，在形成配子的減數分裂前期Ⅰ的粗線期可形成四價體，從而產生18種類型的配子，其中只有1種正常，1種為表型正常的平衡易位攜帶者，其他均為單體或部分單體，三體或部分三體，這種不平衡配子是導致畸形、死胎及反復流產的主要原因[2]。但張月萍等[3]曾報道，在其研究的194例平衡易位攜帶者中有20.1%的夫婦得到了正常（或）平衡易位后代，提示平衡易位攜帶者也有成功受孕并生育正常后代的可能性。本研究2例平衡易位行2個周期AIH均未受孕，由于例數過少，仍需在以后工作中進一步總結研究。

表1 染色體核型異常和多態性分類

3.2 臂間倒位對AIH妊娠率的影響

臂間倒位幾乎涉及每條染色體，其中以9號染色體的發生率最高，在一般人群中可達0.82%[5]，有關9號染色體臂間倒位的生物學效應，有學者認為由于倒位并不導致遺傳物質的丟失，不具有病理學意義[6]，但也有報道認為臂間倒位染色體攜帶者當形成生殖細胞減數分裂時，按同源染色體節段相互配對，形成特有的倒位環，在環內進行交換可產生四種不同類型配子，一種完全正常，一種為倒位攜帶者，另兩種為部分重復和部分缺失，前兩種與正常細胞受精后一種發育成正常個體，另一種為倒位攜帶者，后兩種為不平衡配子，胚胎很難存活，將導致流產和死胎[7]。本研究中245對夫婦490例染色體檢查中9號染色體臂間體倒位14例，發生率約為2.86%，遠高于正常人群0.82%。此外本研究中15例臂間倒位患者共進行21個周期AIH，共獲得2例妊娠，妊娠率為9.52%，與染色體正常組相比無差異（P＞0.05），其結果表明臂間倒位并不影響AIH成功率，這與周友泉等[8]提出的inv（9）的主要臨床效應是不良孕產史而非不孕不育的觀點相符。

3.3 Y染色體多態性對AIH妊娠率的影響

關于Y染色體多態性是否會引起遺傳效應一直以來都存在爭議。有學者認為，大Y是一種正常的染色體多態性變異，不會引起臨床效應[9]。也有研究發現，大Y與自然流產、胚胎停育、死胎等不良孕產史有關[10]，在近期輔助生育技術研究中，有作者認為大Y染色體對體外受精－胚胎移植的胚胎發育及近期妊娠結果均無顯著影響[11]，本研究中Y染色體多態性2例，發生率為0.82%，3周期均未獲妊娠。由于例數過少仍需進一步總結。

3.4 其他常染色體多態性對AIH妊娠率的影響

常染色體的多態性主要以異染色質的變異為主，含有高度重復DNA的異染色質尤為明顯，結構異常染色質集中分布于著絲粒、端粒、隨體、次縊痕和Y染色體長臂。異染色質在著絲粒功能方面起著至關重要的作用，是姐妹染色單體結合和染色體分離所必需的[4]，異染色質的異常有可能影響在減數分裂時染色體配對聯會和配子的形成，導致生育方面的異常。本研究中染色體多態性主要表現為隨體的有無和個數（D組和G組5對染色體）、副縊痕的增長等，共30例，發生率為6.12%，共行45個AIH周期，共獲得13例妊娠，妊娠率為28.89%，與正常染色體組相比有差異（P＜0.05），因此染色體多態性表現中隨體變異和副縊痕的增長等對AIH妊娠率并無負面影響。

綜上所述，本研究檢測的染色體臂間倒位與核型正常者在AIH治療后臨床妊娠率無差異，而常染色體多態性核型攜帶者與核型正常者在AIH治療后臨床妊娠率有差異，常染色體多態性對AIH妊娠率無負面影響，由此筆者推測，染色體臂間倒位和多態性并不是生育的絕對禁忌證，即使是染色體臂間倒位和多態性核型攜帶者，其成功妊娠并生育出表型正常活產兒的可能性并不低于核型正常者。但在本研究AIH人群中，均為不孕癥群體，其染色體異常及多態性率高達10%，顯著高于一般人群染色體異常發生率（0.5%）[12]，因此，對將要進行輔助生殖治療的夫婦進行細胞遺傳學檢查是非常必要的，同時須告知患者，雖然部分的核型異常和多態性并不影響AIH的妊娠率和結局，但卻仍然有將異常染色體基因傳給后代的可能性，而且女性攜帶者較男性攜帶者更易出現異常妊娠的情況，讓患者有充分的知情選擇權。

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Chromosome karyotype analysis among 245 couples with artificial insemination in uterine cavity

CHEN ZhihengSUN LingQUAN Wumin
Reproductive Medical Center,Guangzhou Women and Children Medical Center,Guangdong Province,Guangzhou 510623,China

Objective To explore influence of karyotype polymorphism on pregnant outcome of artificial insemination to husband(AIH).Methods Chromosome karyotypes from peripheral blood of 245 couples accepting AIH were analyzed in order to find the relationship between karyotype polymorphism and pregnant outcome of AIH.Results The number of abnormal chromosome karyotype and karyotype polymorphism cases was 49,accounted for 10%.It contains four aspects:balanced translocation(2 cases),pericentric inversion of chromosome 4 and 9(15 cases),Y chromosome polymorphism(2 cases),and other chromosome polymorphism (30 cases),at the percentages of 0.41%,3.06%,0.41%,and 6.12%respectively.There was no significant difference in clinical pregnancy rate of AIH cycle between normal chromosome karyotype and pericentric inversion group (P＞0.05).However,the clinical pregnancy rate of AIH cycle showed a statistical difference between normal chromosome karyotype and autosomal polymorphism group (P＜0.05).Conclusion The impact from pericentric inversion on AIH′s clinical pregnancy rate is very subtle,and there is no negative effect on AIH′s clinical pregnancy rate by autosomal polymorphism.

Chromosome;Chromosome polymorphism;Artificial insemination

R715.2

A

1673-7210（2012）08（b）-0040-03

2012-05-02 本文編輯：郝明明）