雷公藤多甙對類風濕性關節炎大鼠細胞免疫功能的影響

趙太平，徐玉東，朱勇杰

（1.廣州醫學院 從化學院 基礎醫學部，廣東 廣州510925；2.哈爾濱醫科大學 人體解剖學教研室，黑龍江 哈爾濱150081）

類風濕性關節炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種發病率高、具有高度致殘性、嚴重影響患者生活質量的自身免疫性疾病。其臨床表現為受累的關節疼痛、腫脹、功能下降，病變成持續性，反復發作過程。如何有效治療RA、降低致殘率、改善患者生活質量仍是當前中西醫學界亟待攻破的難題之一，但其免疫病理特征及發病機制目前仍不十分清楚。本實驗通過建立大鼠類風濕性關節炎模型，并給予口服雷公藤治療，研究外周血T淋巴細胞亞群及致炎細胞因子（IL－1β、IL－6、TNF－α）變化特點，探討細胞免疫功能在大鼠類風濕性關節炎發病機制及治療中的作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

弗氏完全福氏佐劑（CFA，Sigma）；雷公藤多甙（湖南藥業有限公司）；IL－1β、IL－6血清 ELISA 試劑盒及 TNF－α放免試劑盒（Headquarters，USA）；全自動酶標儀（普朗公司），FJ－2021γ－放射免疫計數器（西安二六二廠）；T細胞亞群試劑盒（北京中山生物科技公司）；流式細胞儀（BD，USA）。

1.2 實驗動物及分組

Wistar大鼠，60只，6～8周齡，雌雄各半，體重（160±15）g，購自南方醫科大學動物實驗中心。隨機分成三組：①正常對照組；②模型組；③雷公藤治療組，每組20只，分籠飼養，室溫（20±2）℃，相對濕度45%～50%。

1.3 建立動物模型

除正常對照組外，其余各組大鼠于左后足墊皮下注射CFA 0.1mL致炎，誘發RA發生。雷公藤治療組于CFA致炎后立即開始給藥（10mg／kg），正常對照組及模型組給予等量生理鹽水，連續給藥21d。

1.4 流式細胞儀分析外周血T亞群變化

各組大鼠21d斷頭取抗凝血2mL，用流式細胞儀檢測T細胞亞群變化并分

1.5 外周血IL－1β、IL－6、TNF－α檢測

取血3mL，離心取上清作為檢測標本，IL－1β、IL－6采用雙抗體夾心法ELISA，具體操作參見說明書，于450nm讀數；TNF－α檢測用放免法，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.6 統計學分析

2 結果

2.1 癥狀觀察

給予CFA致炎的各組大鼠均于注射第2～3天出現注射側足爪紅、腫、熱、功能障礙等急性炎癥表現，約持續3～7d后癥狀逐漸緩解。約10～14d后開始出現以多發性關節炎為特征的全身遲發型超敏反應，病變累及到未注射CFA的足爪，表現為關節局部程度不同的紅、腫、熱及功能障礙。隨著病程延長，多發性關節炎可反復出現。部分大鼠可在病程不同時期于耳、尾部出現數量不等、程度不一的紅斑、炎性小結，并有脫毛、鼻黏膜充血、滲血、精神萎蘼等關節外癥狀。TWP治療組大鼠關節炎癥狀明顯減輕。

2.2 外周血T亞群變化

于21d取全血測定T淋巴細胞亞群CD＋3、CD＋4、CD＋8、的值，結果見表1。

表1 各組大鼠T細胞亞群的變化（s）

表1 各組大鼠T細胞亞群的變化（s）

注：＊與正常對照組及治療組相比，P＜0.05；＊＊與正常對照組相比，P＞0.05。

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2.3 IL－1β、IL－6、TNF－α檢測

結果顯示，模型組與正常對照組相比，IL－1β、IL－6、TNF－α均明顯升高（P＜0.05）；治療組和正常對照組相比，無明顯差異（P＞0.05）。

表2 各組大鼠IL－1β、IL－6、TNF－α檢測結果

3 討論

類風濕性關節炎是一種慢性進行性的自身免疫性疾病。T淋巴細胞免疫功能異常在RA發病過程中起著重要作用，RA滑膜及關節液中浸潤的細胞主要是T淋巴細胞。研究表明，T淋巴細胞在RA的發生和發展過程中起著核心作用。CD＋4、CD＋8數目的變化，尤其比值是RA發病及免疫損傷的中心環節，是反映機體免疫調節的一項重要指標［1］。RA患者由于存在著CD＋4細胞數量的減少或CD＋8數量的增加，使的相對比下降，Th細胞功能相對亢進和Ts細胞功能相對減弱，從而導致特異性細胞免疫功能，提示T細胞亞群紊亂是RA大鼠的免疫病理機制之一。雷公藤的治療作用與其調節CD＋4和CD＋8的比例有關，通過上調比率而產生臨床效應，發揮其抗炎及免疫抑制作用。

RA最基本的病理改變為關節滑膜組織的炎癥，IL－1β、IL－6、TNF－α均是RA的致炎細胞因子，可由關節浸入全身血液循環，使炎癥因子的水平明顯升高，這些炎癥因子具有多效性，可以調節機體免疫反應，并誘導T細胞增化并激活T細胞分泌更多的細胞因子，介導免疫性炎癥反應。有研究表明，一方面IL－1產生過多必促進TNF－α產生過多，另一方面TNF－α減少不僅會減少關節內IL－1的生成，而且減輕 TNF－α和IL－1 的 協 同 效 應［2，3］。因 此，致 炎 細 胞 因 子TNF－α、IL－6、IL－1是 RA的有效治療目標。本實驗，模型組大鼠外周血中IL－1、IL－6、TNF－α與正常對照組相比明顯升高（P＜0.05），與RA的活動呈正相關，提示正是由于致炎因子的異常分泌導致了T細胞亞群之間存在動態平衡被打破影響了它們的交互抑制作用。因此，大鼠的細胞免疫功能下降，促進了淋巴細胞和巨噬細胞的局部浸潤，并由此發病。雷公藤正是作為IL－1、IL－6、TNF－α的抑制劑和拮抗劑有效地發揮了抗炎作用。

［1］李慧玲，鄔劍，斗章，等.佐劑性關節炎大鼠細胞免疫功能的變化［J］.黑龍江醫藥科學，2011，34（2）：82.

［2］田俊閣，盧偉偉，平立峰.中藥對佐劑性關節炎大鼠細胞因子影響的研究進展［J］.現代中西醫結合雜志，2009，18（30）：377－3776.

［3］王一凡，韋登明.雷公藤內酯治療類風濕關節炎分子機制的研究進展［J］.中華風濕病學雜志，2005，9（10）：628－630.