HPLC法測定肝脂消膠囊中大黃素的含量

鄭 佳

（岳陽職業技術學院 生物醫藥系，湖南 岳陽414000）

近年來，隨著人們生活水平提高，脂肪肝在我國的發病率呈上升趨勢。脂肪肝可發展成脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化，嚴重者可發展成肝癌。目前，臨床尚無治療脂肪肝的特效藥物。從天然產物中研究新的藥物制劑防治本病，已成為研究課題之一。肝脂消膠囊主要由虎杖、大黃、山楂、柴胡等中藥組成，具有降脂、利膽、消炎的作用，特別是對脂肪肝有較好的治療作用，其中虎杖為君藥，大黃為臣藥，而虎杖和大黃主要藥效成分為蒽醌類物質（其中大黃素含量較高），具有保肝利膽降脂的功效。為便于臨床應用，筆者擬對其質量標準進行研究，采用HPLC法測定了肝脂消膠囊中大黃素的含量，現報道如下。

1 試藥與儀器

肝脂消膠囊（同濟醫院藥學部提供）；虎杖、大黃、山楂、柴胡等藥材（武漢國藥集團提供）；大黃素（批號：110756－200110，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。美國Agilent 1100型高效液相色譜儀，包括7725i進樣閥；UV－265FW型可見紫外分光光度計（日本島津）；SCQ－250型超聲波提取儀（上海申波超聲公司）；AUW 220D型雙量程分析天平（日本島津）。

2 大黃素含量測定［1－2］

2.1 色譜條件

色譜柱為 Hypersil－ODS 4.6mm×200mm（5μm）；流動相：甲醇－0.1%磷酸（80：20）；流速：0.8mL／min，檢測波長：254nm，柱溫：40℃，進樣量10μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取大黃素對照品0.04122g于100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精密吸取10mL于50mL量瓶，加甲醇至刻度，制成每1mL含大黃素82.44μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取肝脂消膠囊粉末1g，加入25mL氯仿和2.5mol／mL硫酸20mL，80℃水浴回流2h，冷卻稱定，氯仿補重，精密量取三氯甲烷10mL，蒸干，加甲醇溶解，移至10mL容量瓶中，定容，搖勻，即得。

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，結果見圖1。

圖1 大黃素對照品和肝脂消膠囊高效液相色譜

2.4 陰性樣品溶液的制備

取缺虎杖、大黃藥材的其它藥材，按供試品制備方法得到陰性樣品溶液。

2.5 線性范圍

精密量取大黃素對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0mL分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。分別精密吸取上述對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值。以大黃素峰面積的積分值A為縱坐標，對照品溶液濃度C為橫坐標，作線性回歸分析，得大黃素回歸方程：A＝64.41C＋218.85，r＝0.9997，說明大黃素在4.122～41.22μg／mL濃度范圍內呈良好線性關系。

2.6 精密度試驗

準確吸取對照品溶液10μL，重復進樣6次，測定峰面積，大黃素RSD為1.07%。

2.7 穩定性試驗

精密吸取新制備的供試品溶液，每隔2h進樣測定1次，共測定6次。結果供試品中的大黃素的RSD為0.86%，表明供試品溶液在12h內穩定。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知含量的供試品粉末（批號070101），分別加入質量濃度為37.64μg／mL的大黃素對照品溶液3、4、5mL，同“2.3”項下方法，制成供試品溶液，吸取10μL，進樣分析2次，記錄色譜圖，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗

2.9 樣品含量測定

參照“2.3”項下方法操作，制備供試品溶液，精密吸取樣品溶液，注入液相色譜儀，依法測定，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

本品每粒以大黃素計算，暫定為：不得少于0.0383mg。

3 討論

大黃素是分布最廣泛的一種蒽醌類物質，具有保肝利膽、降脂消炎等多種生物活性，是虎杖和大黃主要有效成分之一［3］。HPLC測定肝脂消膠囊中大黃素含量的方法學考察結果表明，在254nm檢測波長下，以甲醇－0.1%磷酸（80：20）為流動相，該方法在4.122μg／mL～41.22μg／mL間線性關系良好，重復性和穩定性良好，加樣回收試驗回收率達99.47%，RSD值為0.37%。該方法準確，穩定可靠，可作為大黃素的定量控制方法。

本研究參照《中華人民共和國藥典》2010版一部虎杖項下大黃素含量測定方法制訂肝脂消膠囊的含量測定方法，通過5個批次大黃素的含量測定，得到足夠數據表明各批樣品大黃素含量均處于0.0383mg／粒以上，且各批樣品含量均高于這一數據，據此確定本品含大黃素不少于0.0383mg／粒。經過上述HPLC試驗，為肝脂消膠囊的質量標準的提高提供了大量實驗數據，在生產中能更好地控制本制劑的質量。

［1］王娟，袁紹莉.HPLC法測定護肝寧膠囊中大黃素的含量［J］.亞太傳統醫藥，2010，6（10）：25－26.

［2］金鑫，曲佳，李時放.HPLC法測定麻仁膠囊中大黃素及大黃酚的含量［J］.天津藥學，2011，23（4）：17－19.

［3］裴蓮花，吳學，金光洙.虎杖化學成分及藥理作用研究現狀［J］.延邊大學醫學學報，2006，29（2）：147－149.