高效液相色譜法測定傷科筋骨水中鹽酸小檗堿含量

馮建峰，彭宗玢

（常熟市中醫院 藥劑科，江蘇 常熟215500）

外用傷科傷科筋骨水是以黃柏、黃連、紫草、山梔子等藥經醇提水沉后制成的外用水劑，我院臨床應用多年，具有清熱解毒、活血化於、消炎止痛、祛腐生肌之功效。黃柏、黃連在處方中是主藥，小檗堿是其主要成分［1］。本文采用高效液相色譜法對其主要成分進行了含量測定，為該藥的質量控制提供了可行的手段。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

安捷倫1100高效液相色譜儀，Zorbax Eclipse XDBC18色譜柱（46mm×150mm，5μm），KQ250B型超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司），JA2003N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）。

1.2 試劑

鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0713－200107，供含量測定用），傷科筋骨水由常熟市中醫院制劑室提供（批號：100122，101018，111111），甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性

色譜柱為Zorbax Eclipse XDB C18柱（46mm 150mm，5μm）；流動相：乙腈－水（55：45）（每1L水中含5.4g磷酸二氫鉀和3.4g十二烷基硫酸鈉）；檢測波長345nm；柱溫為室溫；流速為10mL·min－1。理論塔板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3 000。

2.2 對照品溶液制備

稱取經105℃干燥2h的鹽酸小檗堿對照品約24mg，精密稱定，置25mL容量瓶內，加甲醇溶解并稀釋至刻度得鹽酸小檗堿溶液（0.96mg·mL－1），精密吸取該溶液1.0mL至50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度即得（含有鹽酸小檗堿19.2μg·mL－1）。

2.3 供試品溶液制備

精密移取傷科筋骨水5.0mL，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理10min，靜置1h左右，取上清液過膜（以0.45μm微孔濾膜減壓過濾），精密移取續濾液2.0mL，置10mL容量瓶中，加流動相至刻度即得。

2.4 陰性對照液的制備

按傷科筋骨水處方制備不含黃柏、黃連藥材的陰性樣品，按“2.3”項下制備方法制成陰性對照溶液。

2.5 系統適用性試驗

按上述色譜條件精密吸取對照品溶液和供試品溶液陰性對照溶液各10μL，分別注入HPLC儀，記錄色譜圖。鹽酸小檗堿保留時間約為12.6min，陰性對照液在與鹽酸小檗堿對照品相同保留時間處未顯示明顯的色譜峰，故認為無干擾。結果見圖1。

圖1 樣品HPLC色譜

2.6 線性關系考察

精密吸取鹽酸小檗堿對照溶液（19.2μg·mL－1）2，4，6，8，10，20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。以對照品質量為橫坐標，對照品峰面積為縱坐標，進行線性回歸。得線性回歸方程為 Y＝101772X－301713（r＝0.9999）。鹽酸小檗堿進樣量在0.0384～0.0.384μg·mL－1范圍內相應峰面積和進樣量呈良好線性關系。

2.7 重復性實驗

精密量取10μL的對照品溶液，重復進樣6次，按上述色譜條件測鹽酸小檗堿峰面積，得峰面積RSD＝0.96%（n＝6），結果表明實驗精密度良好。

2.8 穩定性實驗

取10μL的對照品溶液在放置0，0.5，1，2，4，8h后注入色譜柱，按上述色譜條件進樣，RSD＝1.19%（n＝6），結果表明8h內測得結果較穩定。

2.9 回收率實驗

采用加樣回收法。精密量取已知含量的樣品（批號100122）5mL，分別加入不同體積的鹽酸小檗堿溶液（0.96mg·mL－1）1.5，1.8，2.2mL，按樣品含量測定方法操作，測定并計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果

2.10 樣品測定

取3批樣品，按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，分別進樣10μL，記錄色譜圖，按外標法計算樣品中鹽酸小檗堿的含量。結果見表2。

表2 鹽酸小檗堿的含量

3 討論

（1）本品為中藥提取的外用合劑，用甲醇來處理樣品：①所測成分小檗堿在甲醇中溶解較好［2］，②可以使樣品中的多糖物質得到沉淀，從而避免多糖類對色譜柱的堵塞。

（2）對鹽酸小檗堿含量測定，經過方法篩選［3］，以乙腈－水（55：45）（每1L水中含5.4g磷酸二氫鉀和3.4g十二烷基硫酸鈉）為流動相，基線分離好，以HPLC法測定，操作簡便，結果準確，可作為傷科筋骨水質量控制的測定方法。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京：化學工業出版社，2005.

［2］傅秀娟.HPLC法測定復方崗松洗液中鹽酸小檗堿含量［J］.瀘州醫學院學報，2008，31（55）：513.

［3］沈煒.HPLC測定婦洗康洗劑中鹽酸小檗堿含量［J］.海峽藥學，2010，22（9）：56.