托吡酯片降解產物的HPLC法測定研究

孫 偉，叢曉麗，李一鳴，張堅杯

（杭州民生濱江制藥有限公司 質量部，浙江 杭州 310000）

托吡酯片含活性成分托吡酯，其化學名稱為2，3：4，5－雙－0－（1－甲基亞乙基）－β－D 吡喃果糖氨基磺酸酯，分子式為C12H21NO8S，分子量為339.36。托吡酯為廣譜抗癲癇新藥，對各類癲癇發作均有效，對肌陣攣、嬰兒痙攣也有效。如今，制劑成品中存在的雜質的控制越來越受到大家的重視，本文對托吡酯片生產或存放過程中新產生或增加的降解產物進行分析研究，從而能更有效地控制藥品的質量。

1 材料與溶液制備

1.1 藥品與試劑

托吡酯標準品，托吡酯雜質2標準品，托吡酯片，乙腈。

1.2 儀器

Waters2695高效液相色譜儀；Waters2414示差折光檢測器；電子天平：XS105DU。

1.3 溶液制備

1.3.1 流動相

量取乙腈和超純水各500mL（50∶50），混勻，超聲脫氣。

1.3.2 標準貯備液

稱取25mgTop－imp－2和10mg的托吡酯RS到50mL的容量瓶中，加入流動相適量，超聲使溶解，再用流動相稀釋至刻度。

1.3.3 標準溶液

移取5.0mL上述貯備液到25mL的量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.3.4 分離度（SS）溶液

稱取托吡酯API200mg置于10mL的量瓶中，吸取標準貯備液5.0mL、流動相2.0mL，超聲溶解，再用流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.3.5 樣品溶液

取不少于20片樣品，稱重，磨成細粉。精密稱定適量樣品粉末（相當于500mg托吡酯）至25mL量瓶中，加入20mL流動相，超聲10min，隨后振搖30min。再用流動相稀釋至刻度并混勻，用0.45μm尼龍濾膜過濾，棄去初濾液3mL，收集續濾液。

1.4 色譜條件及系統適用性

流速：1.2mL／min ；柱溫：35℃ ；進樣量20μL。取 SS溶液進樣，Top－imp－2的相對于托吡酯的保留時間為0.90，與托吡酯的分離度不小于1.0。連續6次標準溶液進樣，Top－imp－2和托吡酯的峰面積相應的RSD不大于5.0%。

2 方法與結果

2.1 系統適用性實驗

分離度（SS）溶液進樣所得圖譜中Top－imp－2的保留時間為7.443，相對保留時間為0.90，Top－imp－2與托吡酯的分離度（R）為2.2＞1.0。連續進6針的標準溶液中Topimp－2的峰響應的RSD為0.9%＜5.0%，托吡酯峰響應的RSD為1.1%＜5.0%，符合規定。SS溶液色譜見圖1。

圖1 SS溶液進樣色譜

2.2 Top－imp－2的線性范圍

分別配制Top－imp－2的濃度為10、20、30、50、100、150μg／mL的溶液，進樣測試，相關系數為0.999 9。故線性范圍為10～150μg／mL。線性表見圖2。

圖2 托吡酯雜質2定量線性范圍

2.3 Top－imp－2的測定定量限

配制托吡酯雜質2濃度為10μg／mL的溶液，重復6次進樣所得Top－imp－2的峰面積的RSD為2.9%。

2.4 精密度試驗

配制三個濃度水平（10%，100%，150%）每個水平3份的摻有托吡酯雜質2的托吡酯片樣品溶液，測試得到托吡酯雜質2的平均回收率為101.1%。見表1。

2.5 專屬性考察

考察藥品在各種強化條件下如加熱、加熱／高濕、光照、酸、堿、氧化劑破壞下的降解情況，評估分析方法對可能產生的降解產物的分析能力以及藥片空白輔料對降解產物測試的影響。結果發現：空白輔料對測試沒有干擾，該藥品在加熱、加熱／高濕、光照、堿、氧化劑強化條件下均比較穩定，未產生新的降解產物；而在酸破壞下托吡酯雜質2沒有顯著的增加趨勢，卻出現了兩個未知雜質，保留時間分別為4.983min和5.869min，與 Top－imp－2及主峰能夠有較好的分離。見圖3。

表1 托吡酯雜質2（Top－imp－2）測試的回收率

圖3 酸破壞樣品降解產物色譜

2.6 耐用性

耐用性主要是考察該方法是否能夠承受某些參數輕微的變動，如HPLC系統參數以及樣品溶液制備時參數改變。本試驗按表2設計進行試驗。

表2 耐用性試驗條件

HPLC系統的參數的輕微改變對系統適用性沒有影響，Top－imp－2的相對保留時間為0.90，Top－imp－2與托吡酯的分離度（R）均＞1.0。樣品溶液制備時的參數的改變對降解產物的測定沒有影響，沒有雜質的峰的出現或消失，各種條件下雜質概況一致。

3 結論

通過對藥片進行系統適用性、線性、定量限、精密度、專屬性、耐用性項目的研究分析，認為該方法穩定可靠，具有良好的準確度、專屬性和耐用性，方法靈敏度高，能夠用于降解產物的定量檢測。