靈山麻雞內臟型馬立克氏病并發大腸桿菌病的調查與診斷

陳振威，多婷，楊玉瑩 顧玉芳，溫凌子，梁雄燕

(長江大學動物科學學院，湖北荊州434025)

靈山麻雞內臟型馬立克氏病并發大腸桿菌病的調查與診斷

陳振威，多婷，楊玉瑩 顧玉芳，溫凌子，梁雄燕

(長江大學動物科學學院，湖北荊州434025)

對湖北省荊州市某專業土雞養殖場的靈山麻雞內臟型馬立克氏病并發大腸桿菌肉芽腫病例進行了病理學和組織學診斷。系統剖檢顯示病雞心肌、肝臟、肺臟、胸肌及脾臟表面和內部均有灰白色或黃白色結節。病理組織學觀察可見，病雞心、肝、脾、肺、腎及法氏囊等組織均發生不同程度的變性、壞死，顯示有大量的多形態淋巴細胞增生；同時，肝臟組織還有大量單核巨細胞、多核巨細胞浸潤及肉芽腫。細菌學檢驗可見大腸桿菌。結果顯示此病例為內臟型馬立克氏病并發大腸桿菌病。

馬立克氏病；大腸桿菌肉芽腫；病理學

馬立克氏病(Marek’s disease，MD)是由皰疹病毒科(Herpesviridae)馬立克氏病病毒(Marek’s disease virus，MDV)引起的一種禽類古老接觸性傳染性腫瘤疾病[1]。主要經過呼吸道進入體內，以引起全身各組織器官出現多形態的淋巴細胞增生為特征。1907年，Marek首次發現該病毒。1961年，在英國科學家Biggs的倡導下，正式命名該病為馬立克氏病[2]。該病傳染性強，傳播速度極快，潛伏期較長，急性發病的雞場淘汰及死亡率達10%～80%，是危害養禽業的最重要的傳染病之一。近年的研究表明，MDV除了造成禽類機體產生腫瘤以外，還同時存在免疫抑制的危害[3-4]，致使被感染禽類的免疫功能受損，導致機體抵抗力以及對其他疫苗免疫反應性的降低，極其容易并發或繼發感染其他病原，會造成更大的損失。

大腸桿菌性肉芽腫又稱Hjarre氏病，主要侵害成年雞和火雞，一般呈散在發生，個別雞群發病率高達75%。O4、O8、O9及O18型大腸桿菌，可引起雞小腸、盲腸、腸系膜和肝臟等處出現粟粒大肉芽腫結節[4]。

2012年3月，湖北省荊州市某養殖場林地散養的8000只靈山麻雞在82日齡時，雞群開始零星出現腹瀉、食欲不振、精神萎靡等癥狀，使用環丙沙星進行抗生素治療，療效不明顯。90～98日齡時，雞群大面積發病，病雞被毛凌亂無光，精神沉郁、體態消瘦、臥地不起，腹瀉，排土黃色糞便，被覆白色黏液，每天死亡20～30只。經剖檢、病理組織學診斷和細菌學檢測，確診該病例為內臟型馬立克氏病并發大腸桿菌病，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

林地散養的82～98日齡靈山麻雞，來源于湖北省荊州市某專業土雞養殖場。

1.2 方法

1.2.1 臨床調查

對發病雞群臨床癥狀和免疫狀況進行調查，記錄臨床癥狀，取典型病例進一步進行細菌學檢測和病理學診斷。

1.2.2 細菌學檢測

無菌取心血、肝組織，制備血涂片和組織觸片，進行瑞氏染色鏡檢；同時用心血和無菌肝組織，接種TSA平板進行細菌培養，革蘭氏染色鏡檢。

1.2.3 病理學診斷

對病雞進行系統剖檢，觀察各系統大體病變。取具有典型病變的心、肝、脾、肺、腎及法氏囊制作石蠟組織切片進行病理學診斷。

2 結果與分析

2.1 臨床調查情況

經調查，雞群按照常規免疫程序進行了MDV免疫。雞群82日齡時，零星出現腹瀉、食欲不振、精神萎靡等癥狀，使用環丙沙星進行抗生素治療，療效不明顯。90～98日齡時，雞群大面積發病，病雞被毛凌亂無光，精神沉郁、體態消瘦、臥地不起，腹瀉，排土黃色糞便，被覆白色黏液，每天死亡20～30只。

2.2 細菌學檢測結果

血涂片、肝臟抹片，經瑞氏染色鏡檢，可見散在分布的粉紅色、兩端鈍圓、單個或成對排列的短桿狀菌，疑似大腸桿菌。

TSA平板培養，單菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見短桿菌，呈革蘭氏陰性，兩鈍圓，疑似大腸桿菌。

2.3 病理變化

系統剖檢：剖檢典型癥狀病雞，可見肝臟高度腫大，顏色暗淡，肝組織有栗粒至蠶豆大小不一灰白色結節。肝葉被覆黃白色網狀纖維素性膜(圖1)；腹腔內見乳黃色干酪狀物質。心包腔內有積液，心臟腫大，心肌呈灰白或淡黃色，心肌內有黃豆大灰白色結節(圖2)。脾臟上有散在分布的粟粒狀壞死(圖3)。肺臟背面有較多的淡黃色結節(圖4)。腎臟質脆，顏色棕紅。胸部肌肉組織中有黃豆大小的腫瘤結節，質地硬實，切開呈現似卵黃狀的干酪樣。

圖1 具蠶豆大小腫瘤結節并腫大的肝臟圖2 具黃豆大灰白色結節的心肌

病理組織學觀察：肝臟在低倍鏡視野下，幾乎看不見正常結構，肝組織中有大量的界限清晰的肉芽腫(圖5)。高倍鏡視野下，可見該結節的中央為凝固性壞死，壞死細胞核濃縮、破碎、溶解、消失，胞漿H.E.紅染，呈團塊狀。周圍可見過度增生的上皮樣細胞，細胞腫大，胞漿豐富，紅染，細胞界限不清。同時，有少量的中性粒細胞浸潤。另外，肝組織中有大量的多形態淋巴細胞增生，瘤細胞的大小和形狀均有所不同，胞核近似圓形，大小不一，深染，缺乏胞漿。同時伴有大量的單核巨噬細胞和多核巨細胞增生，可見胞體巨大，形態不規則，胞漿豐富，紅染，細胞核呈葡萄狀(圖6)。

心臟組織在低倍鏡視野下，可見散在分布的團塊狀壞死灶，周圍心肌纖維混濁不清，縱橫紊亂，著色不均，邊緣處心肌纖維完全溶解。高倍鏡視野下，心肌間質中，有大量的多形態淋巴細胞浸潤，瘤細胞大小不一，形態各異，細胞核呈圓形或近似圓形，有的較小，深染，缺乏胞漿；有的體積較大，胞核。同時心肌壞死可見間質中有大量的網狀纖維，毛細血管擴張充血，血管壁增厚(圖7)。

圖3 具彌散分布粟粒狀壞死的脾臟圖4 具淡黃色腫瘤結節的肺臟

圖5 肝組織中的肉芽腫(640×)圖6 多形態淋巴細胞大量增生的肝組織(640×)

脾臟白髓區的鞘動脈周圍網狀細胞疏松，有輕微的水腫，部分細胞發生壞死，細胞核溶解、消失。淋巴小結疏松，變小。紅髓區的髓竇里有散在的多形態淋巴細胞增生，細胞形態多樣，大小不均，胞核深染，胞漿色淺(圖8)。

圖7 多形態淋巴細胞大量增生的心肌間質(640×)圖8 多形態淋巴細胞大量增生的脾臟(640×)

圖9 具顆粒變性、水泡變性及壞死的腎小管上皮細胞(640×)

腎臟的腎小球體積增大，細胞顯著腫脹，毛細血管網渾濁不清，腎小球嚴重缺血。部分腎小球囊中見滲出的紅細胞。腎小管上皮細胞發生了不同程度的顆粒變性、水泡變性及壞死。變性細胞腫大，胞漿內出現細小顆粒，H.E.染色呈淡紅色。變性嚴重的細胞胞漿疏松呈空網狀。壞死細胞可見胞核溶解、消失(圖9)。

肺臟的肺泡壁增寬，有散在的多形態淋巴細胞浸潤。肺泡腔因受周圍細胞擠壓，略有縮小，腔內無明顯的病理變化。法氏囊的淋巴濾泡結構完整，濾泡之間有馬立克氏病瘤細胞浸潤。

3 討論

雞的腫瘤性疾病，例如馬立克氏病、禽白血病等均可引起禽類大多數內臟器官發生腫瘤結節，眼觀難以區分，容易造成誤診，給臨床診斷及疫情防控帶來一定的難度。在病理學診斷中，應特別注意將馬立克氏病與禽白血病加以區分。馬立克氏病的腫瘤細胞由多形態淋巴細胞構成，其中包括成淋巴細胞、大中小淋巴細胞以及網狀細胞。經典的禽淋巴細胞白血病則是以形態較為一致的成淋巴細胞為主[6]。另外，法氏囊的變化具有診病意義。患馬立克氏病時，腫瘤出現在法氏囊淋巴濾泡之間[7]。而發生禽白血病時，腫瘤細胞生長在濾泡內[8-9]。診斷中通過對發病的雞病理組織學觀察，發現腫瘤組織主要侵害肝臟、心臟、脾臟、肺臟、腎臟等，法氏囊淋巴濾泡結構正常，濾泡之間見有腫瘤細胞生長，而在血液涂片、肝臟觸片以及病理組織石蠟切片中，均未發現禽白血病相關成淋巴細胞浸潤或髓細胞性瘤細胞的增生等癥狀，因此本病例應為內臟型馬立克氏病。另外，診斷中還利用禽白血病特異性引物H5/H7[8-10]對病雞肝臟所提取的DNA進行了PCR法擴增，未出現陽性的特異性片段，故排除禽白血病感染的可能。

細菌學檢查、心血涂片、肝組織觸片及心血和肝組織細菌培養均見革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿狀細菌，結合剖檢所見肝臟包膜和各組織的肉芽腫，診斷為大腸桿菌。病理組織石蠟切片顯示，本病例肝臟組織中肉芽腫數量最多，大腸桿菌對肝臟損傷最為嚴重。肝臟組織中發現了大量的巨噬細胞浸潤，說明馬立克氏病引起單核巨噬細胞系統活躍，在肝臟中極易形成肉芽腫結節，也說明該雞群感染馬立克氏病的同時并發了大腸桿菌肉芽腫。

目前，對馬立克氏病的治療尚無特效的療法。為了控制該病的蔓延，病雞必須徹底檢出淘汰，充分隔離，徹底消滅傳染源。在該病的防控上，最有效的方法是綜合防控。臨床調查顯示該雞群進行了常規馬立克氏疫苗免疫，但是仍然爆發了此病，究竟是何種原因造成了免疫失敗，有待進一步探討。值得注意的是，接種疫苗時必須選用合格的疫苗并考慮母源抗體的影響，避免母源抗體的干擾。對于本病例雞群大腸桿菌的防控，重點仍應是如何合理選擇和有效使用抗生素，因為林下散養不同于籠養容易控制環境衛生。

[1]褚秀玲,蘇建青,付本懂，等.雞馬立克病研究進展[J].動物醫學進展.2009,30(1):80-84.

[2]Ikezawa M,Sasaki J,Goryo M.Relationship between tumour development and detection of Marek’s disease virus in the feather follicular epithelium of older chickens[J].Acta Veterinaria Hungarica,2012,60: 333-342.

[3]Geerligs H,Quanz S,Suurland B,et al.Efficacy and safety of cell associated vaccines against Marek’s disease virus grown in a continuous cell line from chickens[J].Vaccine,2008,26:5595-5600.

[4]黃占欣,米同國，杜云良.雞大腸桿菌病表現多樣性及診治[J].中國家禽，1998,20(7)：14-15.

[5]馬 明.雞大腸桿菌病的分類辨癥施治[J].當代畜禽養殖業,2011,(12):35-36.

[6]楊玉瑩,顧玉芳,趙振華.Ag-NOR蛋白顆粒定量分析[J].中國家禽，2007,29(2):25-26.

[7]顧玉芳，楊玉瑩，鐘 蓓.蛋雞J 亞群禽白血病與馬立克氏病混合感染的病理學診斷[J].湖北農業科學，2011,50 (24): 5193-5195.

[8]趙振華，楊玉瑩，陳子強.禽白血病[M].北京:中國農業出版社，2006:52-80.

[9]楊玉瑩.雞內源性類J亞群禽白血病病毒gp85基因的克隆及分析[D].呼和浩特:內蒙古農業大學,2003.

[10]楊玉瑩，梁雄燕,余連喜，等.湖北蛋雞群血管瘤型ALV-J血清學檢測和PCR診斷[J].湖北農業科學，2011,50(6):1211-1213.

2012-09-25

陳振威(1987-)，男，江西萍鄉人，碩士生，研究方向為動物病源與分子生物學。

楊玉瑩，E-mailyangggcn@gmail.com。

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.10.002

S858.31

A

1673-1409(2012)10-S005-04