熱灌注順鉑治療晚期卵巢癌惡性腹腔積液的臨床療效

李燦宇 張自森 薛長年 吳 敏 陳秀芹 郭尚云

(鄭州大學第五附屬醫院腫瘤科，河南 鄭州 450052)

熱灌注順鉑治療晚期卵巢癌惡性腹腔積液的臨床療效

李燦宇1張自森 薛長年 吳 敏 陳秀芹2郭尚云2

(鄭州大學第五附屬醫院腫瘤科，河南 鄭州 450052)

目的 探討熱療聯合順鉑對人卵巢癌細胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效。方法 MTT法研究常溫及42℃不同作用時間下溫熱聯合順鉑對卵巢癌細胞敏感株SKOV3的生長抑制作用，流式細胞術檢測細胞凋亡。觀察腹腔熱灌注順鉑治療36例晚期卵巢癌腹腔積液的療效及不良反應。結果 42℃熱療顯著增強順鉑對卵巢癌細胞敏感株SKOV3的生長抑制，42℃熱療60min聯合順鉑化療顯著增加SKOV3細胞凋亡率。熱灌注順鉑治療卵巢癌腹腔積液的有效率為61.1%(22/36)，不良反應輕微。結論 熱療能顯著增強順鉑的卵巢癌細胞毒性作用，熱灌注順鉑是晚期老年卵巢癌患者安全有效的治療方法。

熱療;化療;順鉑;卵巢癌;惡性腹腔積液

大多數卵巢癌患者就診時已有腹腔播散，并發惡性腹腔積液，嚴重影響患者的生活質量，尤其是復發或耐藥的患者，全身化療療效差，且部分患者不能耐受，因此采取有效的治療可改善此類患者生存。本研究采用細胞體外研究了熱療對順鉑的增效作用，并觀察了腹腔熱灌注順鉑治療晚期卵巢癌合并惡性腹腔積液的療效與不良反應，并對其進行臨床分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例資料 將2005年5月至2011年10月收治的36例經病理學或細胞學確診的老年晚期卵巢癌合并腹水患者采用熱灌注順鉑化療。年齡60～78〔平均(66.2±5.9)〕歲，漿液性囊腺癌22例，黏液性囊腺癌14例，術后復發15例，Ⅲ期病變者21例，Ⅳ期病變者15例。本組患者卡氏評分均在60分以上。化療前血常規、肝、腎功能及心電圖均未發現異常，無化療禁忌?；熐熬炇鹬橥鈺?。

1.1.2 細胞系 人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細胞株(SKOV3)，貼壁生長，由河南省醫藥科學研究院提供。

1.2 方法

1.2.1 熱灌注化療 經B超定位后常規腹腔置管，注藥前盡量排盡腹腔積液，將順鉑(25 mg/m2)溶解到42℃的0.9%生理鹽水2 000 ml，將混合液灌入腹腔，然后腹腔內注入地塞米松5 mg、2%利多卡因2 ml減輕腹膜粘連，灌注后封管，囑患者多次變換體位，之后采用42℃條件下微波熱療1 h。每w灌注1次，連續3 w為1個療程，休息1 w，連用2個療程后評價療效。

1.2.2 療效評價 完全緩解(CR)：腹水消失并持續4 w以上;部分緩解(PR)：腹水減少50%以上并持續4 w以上;穩定(NC)：腹水減少不足50%或增加小于25%至少以上，持續4 w;無效(PD)：腹水增加20%，癥狀加重。有效率=(CR例數+PR例數)/總例數 ×100%。根據美國NCI制定的毒性評價標準評價不良反應事件。

1.2.3 細胞培養 人卵巢癌SKOV3細胞生長于含10 ml/L小牛血清的RPMI-1640培養液中，置于37.0℃、5%CO2的恒溫培養箱中進行傳代培養。

1.2.4 噻唑藍(MTT)檢測細胞增殖 觀察內容分兩種設計：(1)固定熱療時間，溫度為42℃，加熱60 min，觀察順鉑不同濃度時SKOV3細胞的生長抑制率，順鉑濃度分別為0、1、10、20、40、80 μg/ml;(2)固定熱療溫度為42℃，熱療時間依次設定為0，30，60，90 和 120 min，共 5 個時間點，觀察熱療不同時間時SKOV3細胞的生長抑制率。取對數生長期SKOV3細胞，經胰蛋白酶消化，計數以7×104/ml的細胞濃度接種到96孔板中，每孔100 μl，37.0℃、5%CO2的恒溫培養24 h。設單純細胞對照組、單純熱療組、單純化療組、熱化療聯合組4組，每組設4個重復孔。順鉑給藥后，培養48 h，收集細胞，用MTT法檢測順鉑不同濃度及作用不同時間對卵巢癌SKOV3細胞增殖的影響，用酶標儀在570 nm處測定吸光值(A)。計算順鉑對SKOV3細胞的抑制率。實驗重復3遍，取平均值。

1.2.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡 收集各組經過處理的細胞，離心后棄去上清液，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2次。按照雙色細胞凋亡檢測(Annexin/PI)試劑盒操作說明，流式細胞儀檢測細胞凋亡百分率。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件分析，計量資料比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05認為差異具有顯著性。

2 結果

2.1 不同濃度順鉑對SKOV3細胞的生長抑制作用 在同一作用時間條件下，SKOV3細胞的生長抑制作用隨順鉑藥物濃度的增加而增強。42℃ 熱療60 min處理后，順鉑對SKOV3細胞的生長抑制作用顯著增加(P＜0.05)。見表1。

表1 42℃熱療時不同順鉑濃度時SKOV3細胞的生長抑制率(%)

2.2 熱化療不同作用時間對SKOV3細胞的生長抑制作用

在 42℃ 條件下順鉑作用 0、30、60、90、120 min，分別檢測 SKOV3細胞的生長抑制率。42℃下作用不同時間對SKOV3細胞的抑制作用差異有統計學意義(P＜0.05)，隨熱療時間的延長，SKOV3細胞生長抑制率逐漸增加。42℃下作用60 min和30 min相比，差異有統計學意義(P＜0.05)。作用 60 min、90 min和120 min相比，差異無顯著性。見表2。

表2 42℃熱療不同時間時順鉑對SKOV3細胞的生長抑制作用(%)

2.3 熱療聯合順鉑化療對SKOV3細胞凋亡的影響 順鉑處理SKOV3細胞后，42℃下作用60 min后，37℃下繼續培養48 h。收集活細胞行Annexin V-FITC/PI檢測，結果顯示熱療聯合順鉑化療組細胞凋亡率(早期和晚期之和)為69.39%，單純順鉑化療組細胞凋亡率為47.94%，差異有統計學意義(P＜0.05)。熱療作用下，凋亡早期SKOV3細胞比率顯著增加(P＜0.05)。見表3。

表3 熱療聯合順鉑作用48 h后SKOV3細胞凋亡情況(%)

2.4 熱灌注順鉑治療卵巢癌惡性腹腔積液的臨床療效 36例患者經熱灌注順鉑治療后，22例患者腹水量得到控制，其中CR 3例，PR 19例，SD9例，PD 5例，有效率 61.1%(22/36)。副作用有輕微腹痛者4例，低熱5例，輕微腹痛及低熱患者未做特殊處理，自行緩解。副反應以消化道癥狀為主，發生率為66.7%(24/36)，其中Ⅰ～Ⅱ級者18例，Ⅲ～Ⅳ級者6例，處理后癥狀均緩解。血液系統副反應發生率為47.2(17/36)，多表現為輕度白細胞減少和貧血。全組患者均未出現腹腔感染、腸黏連等并發癥，腸梗阻發生2例，為腫瘤進展壓迫腸道所致。

2.5 熱灌注順鉑對卵巢癌患者血清CA125水平的影響 監測記錄記錄治療前、治療第4周、治療第8周CA125表達水平。根據臨床療效分組，有效組患者血清CA125水平較熱灌注順鉑化療前顯著下降，差異有統計學意義(P＜0.05)。無效組患者血清CA125水平雖有下降，但差異無顯著性。見表4。

表4 熱灌注順鉑對卵巢癌患者血清CA125水平的影響(±s)

表4 熱灌注順鉑對卵巢癌患者血清CA125水平的影響(±s)

分組 n 治療前 第4周 第8周有效22 80.25±14.23 52.58±11.22 40.45±12.42無效14 102.51±24.33 99.64±21.86 86.50±19.36

3 討論

卵巢癌是老年女性患者中最常見的惡性腫瘤，其腹腔轉移后極易形成腹腔積液。順鉑腹腔灌注是卵巢癌常見且有效的治療方法，能有效控制腹水產生。順鉑為劑量依賴性藥物，但是大劑量的順鉑常導致嚴重副反應，嚴重限制了順鉑對腫瘤的殺傷效果。因此，增強卵巢癌細胞對順鉑化療的敏感性成為重要臨床課題。

熱療近年來逐漸成為繼放化療、生物治療之后的又一腫瘤治療手段，腹腔熱灌注治療成為腹腔腫瘤控制的有效方法，不良反應相對較少，安全性好〔1〕。有研究證實，溫熱對腫瘤細胞有直接的殺傷作用。熱療聯合化療可以提高抗腫瘤作用，順鉑是最早被發現與熱療有協同作用的化療藥物，腹腔熱灌注順鉑可有效控制腹水生成〔2〕。熱療可以增加腫瘤細胞膜的通透性，提供細胞內的藥物濃度，促進DNA與鉑類藥物結合，抑制DNA的修復，從而提高化療藥物的殺傷作用，還有助于逆轉順鉑耐藥的發生〔3〕。本研究通過體外研究證實，熱療能顯著增強順鉑對卵巢癌SKOV3細胞的毒性作用，誘導細胞發生凋亡，這為卵巢癌熱化療的臨床應用提供了理論參考依據。本研究在42℃熱療條件下觀察了順鉑對卵巢癌SKOV3細胞的毒性作用，結果表明熱療時間為60 min是最佳作用時間，繼續延長作用時間并不能進一步顯著提高療效。在臨床實踐的過程中，60 min也是患者能夠耐受且副作用小的常用時間期限〔4〕。過度延長熱療時間可能帶來其他副反應且使患者不易耐受。

本研究通過采用腹腔熱灌注順鉑聯合微波熱療對晚期老年卵巢癌合并腹腔積液的患者進行治療觀察，通過化療和熱療的結合，取得了較好的臨床療效，與文獻報道一致〔5〕。本研究對象為老年患者，采用了熱灌注單藥治療，不良反應低于同時靜脈聯合用藥的報道，僅表現為輕度胃腸道反應和骨髓抑制，有較好的安全性。雖然腹腔多藥聯合灌注也能取得較好的腹水控制效果，但其Ⅲ～Ⅳ級不良反應也顯著增加〔6〕，降低患者生存質量。順鉑耐藥是常見的臨床難題，耐藥機制復雜〔7〕。近來有報道免疫增強劑可逆轉卵巢癌細胞對順鉑的耐藥〔8〕，結果提示熱灌注順鉑聯合免疫增強劑治療卵巢癌可能取得更好的療效。

綜上所述，本研究通過對熱灌注順鉑治療卵巢癌惡性腹腔積液的體外研究和臨床觀察，證實熱療能顯著增強順鉑的卵巢癌細胞毒性作用，熱灌注順鉑能有效控制卵巢癌惡性腹腔積液，不良反應較少，安全性好。因此，熱灌注順鉑是晚期老年卵巢癌患者有效的治療方法，臨床上適宜推廣。

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R735

A

1005-9202(2012)17-3656-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.17.017

鄭州市科技發展計劃項目(No.2010SFXM345)

1 鄭州大學第三附屬醫院婦產科 2 鄭州大學第五附屬醫院婦產科通訊作者：吳 敏(1957-)，女，主任醫師，主要從事腫瘤個體化治療研究。

李燦宇(1977-)，女，碩士，主治醫師，主要從事婦科腫瘤的基礎與臨床研究。

〔2012-04-10收稿 2012-05-18修回〕

(編輯 袁左鳴)