咳喘穴位貼片成型工藝研究及透皮特性研究

楊立平 鄧桂明 楊廣民

咳喘穴位貼片是由湖南中醫藥大學第一附屬醫院臨床應用十余年的貼散經劑改而成的外用中藥新制劑，由麻黃、丁香、肉桂等組成，療效可靠深受廣大患者歡迎，是治療咳喘病標本兼顧的獨特療法。但傳統的咳喘穴位貼散是純生藥原粉，存在劑型落后等缺點，對其進行劑型改進。采用超臨界CO2萃取技術提取有效部位的工藝研究［1］，研制了咳喘穴位貼片，并篩選了該貼片透皮促進劑為1%氮酮［2］，進行了2種劑型的體外透皮特性比較研究［3］。對咳喘穴位貼片的體外透皮吸收［4］和釋放性［5］進行了研究，本文對該穴位貼片的成型性及透皮特性進行了研究，為開發中藥新劑型提供依據。

1 材料與儀器

1.1 試藥 羊毛脂 (上海嘉定華亭羊毛脂廠)、黃凡士林(包頭黃河石化有限責任公司)氮酮(化學純，天津市科密歐化學試劑開發中心)、單硬脂酸甘油酯(上海三浦化工有限公司)、硬脂酸(天津市東麗區天大化學試劑廠)、甘油(河南焦作市化工三廠)、司盤-60(天津市科密歐化學試劑開發中心)、司盤-20(清明化工廠)、司盤-80(天津市科密歐化學試劑開發中心)、吐溫-80(天津市光復精細化工研究所)、海藻酸鈉(中國醫藥(集團)上海化學試劑公司 )等均為分析純，藥材購于湖南振興中藥飲片有限公司，水為重蒸餾水。

1.2 儀器 DK-S22型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設備有限公司)、AR2140型Adenturer電子分析天平(感量:0.1 mg，奧豪斯國際貿易上海有限公司)、DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 (鞏義市英峪予華儀器廠)Franz擴散池(自制)|全玻璃注射器(10 ml，上海注射器廠)、高效液相色譜儀(Agilent1100，二極管陣列檢測器(DAD)檢測器)、超聲波清洗器(昆山市淀山湖檢測儀器廠)。

表1 處方設計

表2 處方設計結果

2 方法與結果

2.1 成型性考察

2.1.1 提取物制備 將藥材粉碎成粉，采用CO2超臨界提取法提取有效成分。萃取條件為:萃取壓力24 MPa、萃取溫度45℃、分離釜Ⅰ壓力6 MPa、分離釜Ⅰ溫度55℃、分離釜Ⅱ壓力6 MPa、分離釜Ⅱ溫度 40℃、分離時間2 h、粒度40目、夾帶劑:75%乙醇，用量25%。

2.1.2 處方設計 作者對各種基質加藥物提取物制成的產品成型性進行考察，記錄如表1，結果見表2。

表3 因素水平表

通過以上實驗發現油脂性基質的成型性較優，其中以單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、司盤、吐溫、羊毛脂、黃凡士林、提取物混合后的產品成型性最優。為進一步摸索最佳成型處方，進行正交設計見表3，正交設計見表4。

表4 正交實驗表

表5 正交實驗結果等級的一致性檢驗分析表

2.1.3 處方設計 綜合實驗結果，最優處方為4號，組成為單硬脂酸甘油酯∶硬脂酸∶司盤-80∶吐溫-80∶羊毛脂∶黃凡士林∶提取物 =1.5∶1.5∶1∶2∶1.5∶1.5∶9，按此處方制得的產品外表光澤，手感細膩，涂展性好，載藥量高。

2.1.4 制備方法 將硬脂酸、吐溫-80、黃凡士林、按比例量加入燒杯熔融成液體A備用。將單硬脂酸甘油酯、司盤-80、羊毛脂加入燒杯熔融，待完全熔融成液態后加入比例量的提取物，輕輕攪勻后迅速倒入液體A，邊加邊攪拌，混合后稍冷，用傾倒法倒入已備好的背襯材料上成直徑20 mm的薄圓餅形即得。

2.2 透皮性研究

2.2.1 透過用皮膚的制備 取體重合格的兔子(湖南中醫藥大學實驗動物中心提供)，靜養24 h，處死。以8%硫化鈉溶液去除兔毛，溫水洗凈，取下背部皮膚，去除皮下脂肪及筋膜、血管，再用生理鹽水洗凈，置于冰箱中4℃冷藏備用。從皮膚的制備到用于實驗不能超過1個月。

2.2.2 透皮用藥物樣品的制備 分別制備加氮酮1%和加氮酮3%的藥物樣品，分別考察透皮性。處方總量保持不變，增加氮酮的量就減少吐溫的量。加1%氮酮的樣品制備:取單硬脂酸甘油酯1.5 g、硬脂酸1.5 g、羊毛脂1.5 g、黃凡士林1.5 g、司盤-80 1 g、吐溫-80 1.8 g、提取物 9 g、氮酮 0.2 g，按照2.1.4制備方法制備。加3%氮酮的樣品制備:取單硬脂酸甘油酯1.5 g、硬脂酸1.5 g、羊毛脂1.5 g、黃凡士林1.5 g、司盤-80 1 g、吐溫-80 1.4 g、提取物 9 g、氮酮 0.6 g，按照2.1.4制備方法制備。

2.2.3 透皮試驗方法 將兔皮平攤蒙于Franz擴散池(自制)雙室之間，皮膚表面對著上室，用膠布將上下室固定，于上室加入精密稱定的咳喘穴位貼劑的藥物，下室加接收液，接收液為14 ml生理鹽水，磁力攪拌器恒溫水浴(37±1)℃。在一定的時間間隙取樣，同時補加14 ml生理鹽水，樣品用HPLC測定，同法做空白。

2.2.4 HPLC條件［4］流動相為甲醇∶水=55∶45，檢測器波長280 nm，流速 1 ml/min。

2.2.5 透皮特性試驗 透皮用丁香酚含量作為計算指標，數據處理記錄如表6，透皮動力學進行數學模型擬合結果見表7。由數學模型擬合結果可知未加氮酮組Q與t之間有相關性的函數關系為零級動力學模型、對正態分布模型、Higuchi模型、一級動力學模型、威布爾模型，進一步比較殘差平方和及擬合度，則更符合威布爾分布模型;1%氮酮組Q與t之間有相關性的函數關系為零級動力學模型、對正態分布模型、Higuchi模型、一級動力學模型、威布爾模型，進一步比較殘差平方和及擬合度，則更符合Higuchi模型;3%氮酮組Q與t之間有相關性的函數關系為零級動力學模型、對正態分布模型、Higuchi模型、一級動力學模型、威布爾模型，進一步比較殘差平方和及擬合度，則更符合威布爾模型。上述結果說明3%氮酮的透皮機理與未加氮酮透皮機理相同，加1%氮酮改變了透皮機理，明顯加快透皮速率。

表6 透皮特性試驗結果

表7 透皮動力學模型的擬合

r表示線性相關系數;SUM表示殘差平方和;R2表示擬合度;r臨=0.606(α=0.01;υ=15)

透皮試驗結果可知，貼片透過速率大于原貼散劑的透皮速率且釋藥穩定，且加入1%氮酮的透過性優于加入3%氮酮的。

3 討論

3.1 成型性研究 用海藻酸鈉作基質做成乳劑型藥物會發現軟膏中有黃色不溶小塊，疑為存在配伍禁忌。考慮全用水溶性基質如CMC-Na、PEG等，但實驗發現，提取物不能分散，呈油珠狀懸浮在液態基質中。于是采用全油脂性基質，取得教好的效果。在實驗中發現，甘油會使產品在液態時分層，使凝固時藥物分布不均，遂不用甘油。

作者對產品的凝固點進行了考察，發現隨著硬脂酸和單硬脂酸甘油酯的用量增加，其凝固點會上升，但細度和涂展性及順滑性會降低。其凝固點難達到40℃以上用2.1.3法配比制成的產品凝固點為37℃左右。產品全為油脂性基質，理論上HLB值低的司盤類應該應用較多，但作者從實驗中發現，HLB值較高的吐溫類應用多于司盤類的產品在成型性及外觀上較優，且吐溫∶司盤=2∶1較好。

3.2 透皮特性研究 在透皮實驗中，發現不加透皮促進劑藥物的透皮速率極低，故加入氮酮考察其透皮性，并分別討論加入1%和3%兩種情況分析比較。在此實驗中，溫度是一個重要的條件，水浴溫度要嚴格控制，溫度太低會使藥物有效成分在HPLC下幾乎檢測不到，太高會破壞皮膚的生理。將藥物涂抹在皮膚上的方法也是一個重要的影響因素，藥物應該涂成薄薄一層，讓藥物與皮膚緊密接觸。皮上藥物的用量不宜太多，涂的藥物也不宜太厚，以免部分藥物無參與透皮反而減少總透過率。

［1］鄧桂明，陳鎮，楊廣民，等.超臨界CO2萃取咳喘穴位貼片藥材的工藝研究.中國醫院藥學雜志，2007，27(11):1493-1494.

［2］何群，鄧桂明，楊廣民，等.咳喘穴位貼片透皮促進劑的篩選.中國藥房，2007，18(9):658-660.

［3］何群，鄧桂明，楊廣民，等.咳喘穴位貼片與貼散體外透皮特性比較研究.中國中藥雜志，2007，32(18):1877-1880.

［4］鄧桂明，陳鎮，楊廣民，等.咳喘穴位貼片體外透皮吸收實驗研究.中南藥學，2008，6(2):134-137.

［5］楊立平，鄧桂明，楊廣民.咳喘穴位貼片體外透皮速率和體外釋放規律研究中國藥房，2009，20(18):1372-1374.